第一 蛋白質的結構與功能

蛋白質研究的歷史1833年，從麥芽中分離淀粉酶；隨后從胃液中分離到類似胃蛋白酶的物質。1864年，血紅蛋白被分離并結晶。19世紀末，證明蛋白質由氨基酸組成，并合成了多種短肽。20世紀初，發(fā)現(xiàn)蛋白質的二級結構；完成胰島素一級結構測定。本文檔共102頁；當前第1頁；編輯于星期三\8點51分20世紀中葉，各種蛋白質分析技術相繼建立，促進了蛋白質研究迅速發(fā)展；1962年，確定了血紅蛋白的四級結構。20世紀90年代，功能基因組與蛋白質組研究地展開。本文檔共102頁；當前第2頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質的生物學重要性分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質；細胞的各個部分都含有蛋白質。含量高：蛋白質是細胞內最豐富的有機分子，占人體干重的45％，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達80％。1.蛋白質是生物體重要組成成分本文檔共102頁；當前第3頁；編輯于星期三\8點51分作為生物催化劑（酶）代謝調節(jié)作用免疫保護作用物質的轉運和存儲運動與支持作用參與細胞間信息傳遞2.蛋白質具有重要的生物學功能3.氧化供能本文檔共102頁；當前第4頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質的分子組成

TheMolecularComponentofProtein第一節(jié)本文檔共102頁；當前第5頁；編輯于星期三\8點51分組成蛋白質的元素主要有C、H、O、N和S。

有些蛋白質含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個別蛋白質還含有碘。本文檔共102頁；當前第6頁；編輯于星期三\8點51分各種蛋白質的含氮量很接近，平均為16％。由于體內的含氮物質以蛋白質為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質的大致含量：100克樣品中蛋白質的含量(g%)=每克樣品含氮克數(shù)×6.25×1001/16%蛋白質元素組成的特點本文檔共102頁；當前第7頁；編輯于星期三\8點51分一、組成人體蛋白質的20種氨基酸均屬于L--氨基酸

存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有20種，且均屬L-氨基酸（甘氨酸除外）。本文檔共102頁；當前第8頁；編輯于星期三\8點51分H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式RC+NH3COO-H本文檔共102頁；當前第9頁；編輯于星期三\8點51分非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸二、氨基酸可根據(jù)側鏈結構和理化性質進行分類本文檔共102頁；當前第10頁；編輯于星期三\8點51分(一)側鏈含烴鏈的氨基酸屬于非極性脂肪族氨基酸本文檔共102頁；當前第11頁；編輯于星期三\8點51分(二)側鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸本文檔共102頁；當前第12頁；編輯于星期三\8點51分(三)側鏈含芳香基團的氨基酸是芳香族氨基酸本文檔共102頁；當前第13頁；編輯于星期三\8點51分(四)側鏈含負性解離基團的氨基酸是酸性氨基酸本文檔共102頁；當前第14頁；編輯于星期三\8點51分(五)側鏈含正性解離基團的氨基酸屬于堿性氨基酸本文檔共102頁；當前第15頁；編輯于星期三\8點51分幾種特殊氨基酸

脯氨酸（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2本文檔共102頁；當前第16頁；編輯于星期三\8點51分半胱氨酸+胱氨酸二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3本文檔共102頁；當前第17頁；編輯于星期三\8點51分三、20種氨基酸具有共同或特異的理化性質兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。等電點(isoelectricpoint,pI)

在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。（一）氨基酸具有兩性解離的性質本文檔共102頁；當前第18頁；編輯于星期三\8點51分pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性離子陽離子陰離子本文檔共102頁；當前第19頁；編輯于星期三\8點51分（二）含共軛雙鍵的氨基酸具有紫外吸收性質色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280nm附近。大多數(shù)蛋白質含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質含量的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收本文檔共102頁；當前第20頁；編輯于星期三\8點51分（三）氨基酸與茚三酮反應生成藍紫色化合物氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍紫色化合物，其最大吸收峰在570nm處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關系，因此可作為氨基酸定量分析方法。本文檔共102頁；當前第21頁；編輯于星期三\8點51分四、蛋白質是由許多氨基酸殘基組成的多肽鏈肽鍵(peptidebond)是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學鍵。（一）氨基酸通過肽鍵連接而形成肽(peptide)本文檔共102頁；當前第22頁；編輯于星期三\8點51分+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵本文檔共102頁；當前第23頁；編輯于星期三\8點51分肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。由十個以內氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。本文檔共102頁；當前第24頁；編輯于星期三\8點51分N末端：多肽鏈中有游離α-氨基的一端C末端：多肽鏈中有游離α-羧基的一端多肽鏈有兩端：多肽鏈(polypeptidechain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結構。本文檔共102頁；當前第25頁；編輯于星期三\8點51分N末端C末端牛核糖核酸酶本文檔共102頁；當前第26頁；編輯于星期三\8點51分（二）體內存在多種重要的生物活性肽

1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)本文檔共102頁；當前第27頁；編輯于星期三\8點51分GSH過氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH還原酶NADPH+H+NADP+GSH與GSSG間的轉換本文檔共102頁；當前第28頁；編輯于星期三\8點51分

體內許多激素屬寡肽或多肽神經肽(neuropeptide)2.多肽類激素及神經肽本文檔共102頁；當前第29頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質的分子結構

TheMolecularStructureofProtein

第二節(jié)本文檔共102頁；當前第30頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質的分子結構包括:

高級結構一級結構(primarystructure)二級結構(secondarystructure)三級結構(tertiarystructure)四級結構(quaternarystructure)本文檔共102頁；當前第31頁；編輯于星期三\8點51分定義:蛋白質的一級結構指在蛋白質分子從N-端至C-端的氨基酸排列順序。一、氨基酸的排列順序決定蛋白質的一級結構主要的化學鍵:肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。本文檔共102頁；當前第32頁；編輯于星期三\8點51分一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學功能的基礎，但不是決定蛋白質空間構象的唯一因素。本文檔共102頁；當前第33頁；編輯于星期三\8點51分二、多肽鏈的局部主鏈構象為蛋白質二級結構蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象

。定義:

主要的化學鍵：氫鍵

本文檔共102頁；當前第34頁；編輯于星期三\8點51分（一）參與肽鍵形成的6個原子在同一平面上參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構型，此同一平面上的6個原子構成了所謂的肽單元(peptideunit)

。本文檔共102頁；當前第35頁；編輯于星期三\8點51分（一）參與肽鍵形成的6個原子在同一平面上參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構型，此同一平面上的6個原子構成了所謂的肽單元(peptideunit)

。本文檔共102頁；當前第36頁；編輯于星期三\8點51分

-螺旋(-helix)

-折疊(-pleatedsheet)

-轉角(-turn)無規(guī)卷曲(randomcoil)

（二）α-螺旋結構是常見的蛋白質二級結構蛋白質二級結構本文檔共102頁；當前第37頁；編輯于星期三\8點51分-螺旋本文檔共102頁；當前第38頁；編輯于星期三\8點51分（三）-折疊使多肽鏈形成片層結構本文檔共102頁；當前第39頁；編輯于星期三\8點51分（四）-轉角和無規(guī)卷曲在蛋白質分子中普遍存在-轉角無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結構。本文檔共102頁；當前第40頁；編輯于星期三\8點51分（五）模體是具有特殊功能的超二級結構在許多蛋白質分子中，可發(fā)現(xiàn)二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個有規(guī)則的二級結構組合，被稱為超二級結構。二級結構組合形式有3種：αα，βαβ，ββ。本文檔共102頁；當前第41頁；編輯于星期三\8點51分二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，稱為模體(motif)

。模體是具有特殊功能的超二級結構。本文檔共102頁；當前第42頁；編輯于星期三\8點51分鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體鋅指結構α-螺旋-β轉角（或環(huán)）-α-螺旋模體鏈-β轉角-鏈模體鏈-β轉角-α-螺旋-β轉角-鏈模體模體常見的形式本文檔共102頁；當前第43頁；編輯于星期三\8點51分（六）氨基酸殘基的側鏈對二級結構形成的影響蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成-螺旋或β-折疊，它就會出現(xiàn)相應的二級結構。本文檔共102頁；當前第44頁；編輯于星期三\8點51分三、在二級結構基礎上多肽鏈進一步折疊形成蛋白質三級結構疏水鍵、離子鍵、氫鍵和VanderWaals力等。主要的化學鍵:整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。定義:（一）三級結構是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置本文檔共102頁；當前第45頁；編輯于星期三\8點51分本文檔共102頁；當前第46頁；編輯于星期三\8點51分肌紅蛋白(Mb)N端

C端本文檔共102頁；當前第47頁；編輯于星期三\8點51分纖連蛋白分子的結構域（二）結構域是三級結構層次上的局部折疊區(qū)分子量較大的蛋白質?？烧郫B成多個結構較為緊密的區(qū)域，并各行其功能，稱為結構域(domain)。本文檔共102頁；當前第48頁；編輯于星期三\8點51分（三）分子伴侶參與蛋白質折疊分子伴侶(chaperon)通過提供一個保護環(huán)境從而加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構。分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨后松開，如此重復進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊。分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚后，再誘導其正確折疊。分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。本文檔共102頁；當前第49頁；編輯于星期三\8點51分伴侶蛋白在蛋白質折疊中的作用本文檔共102頁；當前第50頁；編輯于星期三\8點51分亞基之間的結合主要是氫鍵和離子鍵。四、含有二條以上多肽鏈的蛋白質具有四級結構蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級結構。有些蛋白質分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結構，稱為蛋白質的亞基(subunit)。本文檔共102頁；當前第51頁；編輯于星期三\8點51分由2個亞基組成的蛋白質四級結構中，若亞基分子結構相同，稱之為同二聚體(homodimer)，若亞基分子結構不同，則稱之為異二聚體(heterodimer)。血紅蛋白的四級結構本文檔共102頁；當前第52頁；編輯于星期三\8點51分五、蛋白質的分類根據(jù)蛋白質組成成分:單純蛋白質結合蛋白質=蛋白質部分+非蛋白質部分根據(jù)蛋白質形狀:纖維狀蛋白質球狀蛋白質本文檔共102頁；當前第53頁；編輯于星期三\8點51分六、蛋白質組學（一）蛋白質組學基本概念蛋白質組是指一種細胞或一種生物所表達的全部蛋白質，即“一種基因組所表達的全套蛋白質”。本文檔共102頁；當前第54頁；編輯于星期三\8點51分（二）蛋白質組學研究技術平臺蛋白質組學是高通量，高效率的研究:雙向電泳分離樣品蛋白質蛋白質點的定位、切取蛋白質點的質譜分析（三）蛋白質組學研究的科學意義本文檔共102頁；當前第55頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質結構與功能的關系TheRelationofStructureandFunctionofProtein第三節(jié)本文檔共102頁；當前第56頁；編輯于星期三\8點51分（一）一級結構是空間構象的基礎一、蛋白質一級結構是高級結構與功能的基礎牛核糖核酸酶的一級結構二硫鍵本文檔共102頁；當前第57頁；編輯于星期三\8點51分天然狀態(tài)，有催化活性尿素、β-巰基乙醇去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性本文檔共102頁；當前第58頁；編輯于星期三\8點51分（二）一級結構相似的蛋白質具有相似的高級結構與功能胰島素氨基酸殘基序號A5A6A10B30人ThrSerIleThr豬ThrSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla馬ThrSerIleAla本文檔共102頁；當前第59頁；編輯于星期三\8點51分（三）氨基酸序列提供重要的生物化學信息一些廣泛存在于生物界的蛋白質如細胞色素(cytochromeC)，比較它們的一級結構，可以幫助了解物種進化間的關系。本文檔共102頁；當前第60頁；編輯于星期三\8點51分（四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病例：鐮刀形紅細胞貧血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽鏈HbAβ肽鏈N-val·his·leu·thr·pro·val·glu·····C(146)這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，稱為“分子病”。本文檔共102頁；當前第61頁；編輯于星期三\8點51分肌紅蛋白/血紅蛋白含有血紅素輔基血紅素結構二、蛋白質的功能依賴特定空間結構（一）血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似本文檔共102頁；當前第62頁；編輯于星期三\8點51分肌紅蛋白(myoglobin，Mb)肌紅蛋白是一個只有三級結構的單鏈蛋白質，有8段α-螺旋結構。血紅素分子中的兩個丙酸側鏈以離子鍵形式與肽鏈中的兩個堿性氨基酸側鏈上的正電荷相連，加之肽鏈中的F8組氨酸殘基還與Fe2+形成配位結合，所以血紅素輔基與蛋白質部分穩(wěn)定結合。本文檔共102頁；當前第63頁；編輯于星期三\8點51分血紅蛋白(hemoglobin，Hb)血紅蛋白具有4個亞基組成的四級結構，每個亞基可結合1個血紅素并攜帶1分子氧。Hb亞基之間通過8對鹽鍵，使4個亞基緊密結合而形成親水的球狀蛋白。本文檔共102頁；當前第64頁；編輯于星期三\8點51分Hb與Mb一樣能可逆地與O2結合，Hb與O2結合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數(shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基與氧結合本文檔共102頁；當前第65頁；編輯于星期三\8點51分肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線本文檔共102頁；當前第66頁；編輯于星期三\8點51分協(xié)同效應(cooperativity)一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應。如果是促進作用則稱為正協(xié)同效應(positivecooperativity)如果是抑制作用則稱為負協(xié)同效應(negativecooperativity)本文檔共102頁；當前第67頁；編輯于星期三\8點51分本文檔共102頁；當前第68頁；編輯于星期三\8點51分O2血紅素與氧結合后，鐵原子半徑變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。本文檔共102頁；當前第69頁；編輯于星期三\8點51分變構效應(allostericeffect)蛋白質空間結構的改變伴隨其功能的變化，稱為變構效應。本文檔共102頁；當前第70頁；編輯于星期三\8點51分（三）蛋白質構象改變可引起疾病蛋白質構象疾?。喝舻鞍踪|的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。本文檔共102頁；當前第71頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質構象改變導致疾病的機理：有些蛋白質錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。本文檔共102頁；當前第72頁；編輯于星期三\8點51分瘋牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一組人和動物神經退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折疊正常瘋牛病瘋牛病中的蛋白質構象改變本文檔共102頁；當前第73頁；編輯于星期三\8點51分第四節(jié)蛋白質的理化性質ThePhysicalandChemicalCharactersofProtein本文檔共102頁；當前第74頁；編輯于星期三\8點51分一、蛋白質具有兩性電離的性質蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。當?shù)鞍踪|溶液處于某一pH時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH稱為蛋白質的等電點。蛋白質的等電點(isoelectricpoint,pI)本文檔共102頁；當前第75頁；編輯于星期三\8點51分二、蛋白質具有膠體性質蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子的直徑可達1～100nm，為膠粒范圍之內。顆粒表面電荷水化膜蛋白質膠體穩(wěn)定的因素:本文檔共102頁；當前第76頁；編輯于星期三\8點51分+++++++帶正電荷的蛋白質－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜++++++++帶正電荷的蛋白質－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質不穩(wěn)定的蛋白質顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉本文檔共102頁；當前第77頁；編輯于星期三\8點51分三、蛋白質空間結構破壞而引起變性在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。蛋白質的變性(denaturation)本文檔共102頁；當前第78頁；編輯于星期三\8點51分造成變性的因素:如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等。

變性的本質:——破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質的一級結構。本文檔共102頁；當前第79頁；編輯于星期三\8點51分

應用舉例:臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。此外,防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。

本文檔共102頁；當前第80頁；編輯于星期三\8點51分若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為復性(renaturation)。本文檔共102頁；當前第81頁；編輯于星期三\8點51分天然狀態(tài)，有催化活性尿素、β-巰基乙醇去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性本文檔共102頁；當前第82頁；編輯于星期三\8點51分在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發(fā)生沉淀，但并不變性。蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。

蛋白質沉淀蛋白質的凝固作用(proteincoagulation)本文檔共102頁；當前第83頁；編輯于星期三\8點51分四、蛋白質在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質的OD280與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定。本文檔共102頁；當前第84頁；編輯于星期三\8點51分蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應。蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應稱為雙縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質溶液含量茚三酮反應(ninhydrinreaction)雙縮脲反應(biuretreaction)本文檔共102頁；當前第85頁；編輯于星期三\8點51分第五節(jié)蛋白質的分離純化與結構分析TheSeparationandPurificationandStructureAnalysisofProtein本文檔共102頁；當前第86頁；編輯于星期三\8點51分一、透析及超濾法可去除蛋白質溶液中的小分子化合物應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。透析(dialysis)超濾法利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。本文檔共102頁；當前第87頁；編輯于星期三\8點51分二、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質沉淀方法使用丙酮沉淀時，必須在0～4℃低溫下進行，丙酮用量一般10倍于蛋白質溶液體積。蛋白質被丙酮沉淀后，應立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。鹽析(saltprecipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。本文檔共102頁；當前第88頁；編輯于星期三\8點51分免疫沉淀法：將某一純化蛋白質免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質，可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。本文檔共102頁；當前第89頁；編輯于星期三\8點51分三、利用荷電性質可用電泳法將蛋白質分離蛋白質在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術,稱為電泳(elctrophoresis)

。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。本文檔共102頁；當前第90頁；編輯于星期三\8點51分SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質分子量的測定。等電聚焦電泳，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。幾種重要的蛋白質電泳:本文檔共102頁；當前第91頁；編輯于星期三\8點51分四、應用相分配或親和原理可將蛋白質進行層析分離待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個固態(tài)物質（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質組分在兩相中反復分配，并以不同速度流經固定相而達到分離蛋白質的目的。層析(chromatography)分離蛋白質的原理本文檔共102頁；當前第92頁；編輯于星期三\8點51分離子交換層析：利用各蛋白質的電荷量及性質不同進行分離。凝膠過濾(gelfiltration)又稱分子篩層析，利用各蛋白質分子