細(xì)胞工程考試復(fù)習(xí)題樣本

資料內(nèi)容僅供您學(xué)習(xí)參考，如有不當(dāng)或者侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系改正或者刪除。細(xì)胞工程復(fù)習(xí)題第一章:緒論1.細(xì)胞工程是指按照一定的設(shè)計(jì)方案,經(jīng)過在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體,創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。廣義的細(xì)胞工程包括所有的生物組織、器官及細(xì)胞離體操作和培養(yǎng)技術(shù)。狹義的細(xì)胞工程則是指細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)和組織培養(yǎng)(tissueculture)都屬于體外培養(yǎng)(invitroculture),是指生物細(xì)胞和組織在離體條件下的生長(zhǎng)和增殖。是細(xì)胞工程的最基本技術(shù)。3.動(dòng)物細(xì)胞工程發(fā)展史1、細(xì)胞融合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的建立,19,Harrison首先培養(yǎng)了蛙胚神經(jīng)管區(qū)細(xì)胞,并觀察到從中長(zhǎng)出的軸突細(xì)胞(神經(jīng)纖維),她的工作被認(rèn)為是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)開始的標(biāo)志;3.細(xì)胞融合技術(shù)的建立和雜交瘤技術(shù)的誕生4、動(dòng)物克隆技術(shù)的建立4動(dòng)物細(xì)胞工程的應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)醫(yī)藥產(chǎn)品(單克隆抗體)2、新品種培育3、試管動(dòng)物與嬰兒4、組織工程5、珍稀動(dòng)物資源的保存與保護(hù)5.將目的基因在器官或組織中進(jìn)行特異性高表示的基因動(dòng)物稱為動(dòng)物生物反應(yīng)器第二章1.動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置無菌操作室(接種室)功能:細(xì)胞篩選、接種、培養(yǎng)基無菌制備要求:密封、防塵、防霉規(guī)劃:更衣間、緩沖間、操作間培養(yǎng)與觀察室功能:細(xì)胞培養(yǎng)、觀察要求:清潔,防塵規(guī)劃:觀察室,培養(yǎng)室制備室功能:培養(yǎng)基的初制備、提取工藝的操作、細(xì)胞培養(yǎng)的上游和下游技術(shù)操作要求:清潔,防塵清洗滅菌室功能:培養(yǎng)皿的清洗、滅菌和無菌純水的制備要求:清潔、防塵儲(chǔ)藏室功能:保存細(xì)胞、無菌培養(yǎng)基、常見液體以及消毒后的器皿等要求:清潔,防塵2.細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)目,用以測(cè)定細(xì)胞增殖和調(diào)整細(xì)胞濃度的一種方法。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原則:”S”型計(jì)數(shù),遵循數(shù)上不數(shù)下數(shù)左不數(shù)右的原則。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是觀察細(xì)胞在一代生存期內(nèi)的增生過程的重要指標(biāo),以培養(yǎng)時(shí)間(d)為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)所做出的曲線。3.細(xì)胞貼壁率又稱接種存活率,用于觀察貼壁附著生長(zhǎng)細(xì)胞,主要反映細(xì)胞的生存能力,和部分底物材料的相容性。4.細(xì)胞活力測(cè)定方法:MTT比色法、CCK-8法5.細(xì)胞培養(yǎng)活體染色方法:1)堿性活性染料:噻嗪類(次甲基藍(lán)、甲苯膠藍(lán))、啞噴類(量焦油藍(lán)、量焦油紫)、吖嗪類(中性紅、詹納斯綠)、三酚苯甲烷類(甲基紫、維克多利亞藍(lán))酸性活性染料:臺(tái)盼藍(lán)、剛果紅、吡咯藍(lán))6.支原體污染的檢測(cè)方法:相差顯微鏡觀察、熒光染色法觀察、電鏡檢測(cè)、培養(yǎng)檢測(cè)7.污染后解決方法::使用抗生素、加溫處理、使用支原體特異性血清、其它方法第四章1.接觸抑制定義:細(xì)胞從接種到長(zhǎng)滿底物表面后,由于細(xì)胞繁殖數(shù)量增多相互接觸后,不再增加。2.密度抑制:細(xì)胞接觸匯合成片后,雖發(fā)生接觸抑制,但只要營(yíng)養(yǎng)充分,細(xì)胞依然能夠進(jìn)行增殖分裂,數(shù)量仍在增多,但當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大時(shí),培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分的減少,細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,則發(fā)生密度抑制,導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止細(xì)胞永生化也稱不死性,是細(xì)胞獲得持續(xù)生長(zhǎng)增殖能力的特性。而惡性細(xì)胞不但能長(zhǎng)期增殖生長(zhǎng)并有異體接種致瘤性。3.細(xì)胞系(cellline)是指由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化,獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。4.細(xì)胞株(cellstrain)是指細(xì)胞系經(jīng)進(jìn)一步的克隆化,得到的由單一細(xì)胞組成的群體。細(xì)胞系(cellline)是指由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化,獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。5.細(xì)胞培養(yǎng)的常見液體:水--新鮮制備的純水或三蒸水平衡鹽溶液--Hank’s、PBS液等維持滲透壓平衡消化液---胰蛋白酶、EDTA-Na及膠原酶溶液、消化酶抑制液---含血清培養(yǎng)液、大豆胰酶抑制劑pH調(diào)整液----NaHCO3、HEPES溶液抗生素液---青霉素、鏈霉素、卡那霉素和慶大霉素等谷氨酰胺補(bǔ)充液--谷氨酰胺溶液,注意其很不穩(wěn)定6.傳代細(xì)胞培養(yǎng)方法1)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞:消化法傳代、直接吹打或用硅膠軟刮2)懸浮細(xì)胞:直接吹打、自然沉降法細(xì)胞的凍存原則:慢速冷凍、保存溫度低細(xì)胞的復(fù)蘇原則快速解凍細(xì)胞同步化培養(yǎng)方法:1)選擇細(xì)胞同步化:M期細(xì)胞震搖脫落法、離心洗脫法、梯度沉降法2)誘導(dǎo)細(xì)胞同步化法:血清饑餓法(G1)、異亮氨酸營(yíng)養(yǎng)缺乏法(G1)、DNA合成抑制劑阻斷法(S)、秋水仙素阻斷法(M)8.細(xì)胞的凍存要點(diǎn):①消化細(xì)胞(同前),將細(xì)胞懸液收集至離心管中。②1000rpm離心10分鐘,棄上清液。③沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng),計(jì)數(shù),調(diào)整至5×106/ml左右。④將懸液分至凍存管中,每管1ml。⑤將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。⑥貼上標(biāo)簽,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。⑦按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(－30℃1小時(shí))→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。9．細(xì)胞的復(fù)蘇要點(diǎn)①將凍存于液氮中的凍存管取出,迅速放入37-40℃水浴中使其在1min內(nèi)融化。②無菌操作下打開凍存管,將細(xì)胞懸液吸取到培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)足生長(zhǎng)液后,置37℃培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁(約4h)后,換培養(yǎng)液一次。③或取出細(xì)胞懸液至離心管中,補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,500-1000r/min低速離心5min,去上清,用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后裝入培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng),次日后更換一次培養(yǎng)液。④待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后即可傳代。第五章1.細(xì)胞融合:定義:指用自然或人工方法、使兩個(gè)或更多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過程,又稱為體細(xì)胞雜交。2.細(xì)胞融合的方法:PEG介導(dǎo)的融合、細(xì)胞電融合、病毒介導(dǎo)的融合3,.特異性雜交瘤細(xì)胞的篩選原理:經(jīng)過選擇性培養(yǎng)后生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,僅有部分是分泌預(yù)定特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。可取上清液,根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體類型及所需靈敏度等具體情況來加以選擇。單抗的制備:1)過程動(dòng)物免疫與親本細(xì)胞的選擇、2)細(xì)胞融合:淋巴細(xì)胞雜交瘤的制備、3)雜交瘤細(xì)胞的篩選:有限稀釋法等4)單克隆抗體的制備和凍存5)單克隆抗體的純化抗體制備有兩種方法增量培養(yǎng)法小鼠腹腔接種法雜交瘤技術(shù)的原理及流程:用抗原免疫小鼠-----免疫牌細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)------骨髓瘤細(xì)胞-----------在PEG作用下融合成雜交瘤細(xì)胞-------------選擇培養(yǎng)基(HAT培養(yǎng)基);未融合的的細(xì)胞死亡,雜交瘤細(xì)胞存活------------------陽性克隆的篩選及克隆化--------------克隆擴(kuò)增及大量制備McAb雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的3個(gè)技術(shù)關(guān)鍵:1)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的特性2)細(xì)胞融合技術(shù)3)雜交瘤細(xì)胞的篩選7單抗純化方法鹽析凝膠過濾離子交換層析親和層析法辛酸沉淀法第六章1.胚胎工程(embryoengineering)以生殖細(xì)胞和胚胎細(xì)胞為對(duì)象進(jìn)行的操作,利用人工方法影響、改變動(dòng)物胚胎品質(zhì)發(fā)育和進(jìn)程的一種生物技術(shù)。主要技術(shù)包括體外受精、胚胎切割、胚胎移植等。2.精子獲能:精子離開精巢后,無使卵受精的能力,它必須經(jīng)過在附睪中成熟及在雌性生殖道內(nèi)停留一段時(shí)間,才具有使卵受精的能力,這種現(xiàn)象稱精子獲能。3.頂體反應(yīng)定義:精子在同卵子表面接觸或與卵膜分泌的物質(zhì)相遇后,精子的頂體就會(huì)發(fā)生一系列的變化。4.體外受精(IVF):就是將哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞從母體取出,在體外進(jìn)行精卵結(jié)合的過程。5.胚胎移植(embryotransfer,ET)一般是針對(duì)早期胚胎而言,它是指附植前的早期胚胎很容易由子宮中取出,經(jīng)過人為處理,能夠再送入子宮的過程,這是胚胎生物工程的基本技術(shù)。6.同期發(fā)情:胚胎移植時(shí),供體胚胎必須與受體子宮內(nèi)膜發(fā)育狀態(tài)高度同步化,才能獲得好效果,這個(gè)過程稱為同期發(fā)情7.多精受精的阻止:透明帶反應(yīng)、受精膜的形成8.胚胎的收集:A手術(shù)法收集胚胎:1)輸卵管沖胚(順向沖胚、逆向沖胚);2)子宮角沖胚B非手術(shù)法收集胚胎:二路法、三路法第七章1.干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞,干細(xì)胞具有兩種特性:能夠產(chǎn)生表現(xiàn)型與基因型和自己完全相同的子細(xì)胞;同時(shí)還能分化成為多種特定功能的體細(xì)胞。2.干細(xì)胞有幾個(gè)主要特征:干細(xì)胞本身不是終末分化細(xì)胞;干細(xì)胞能無限增殖分裂;干細(xì)胞可連續(xù)分裂幾代,也可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài);干細(xì)胞分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞只能有兩種命運(yùn)——保持為干細(xì)胞或分化為特定細(xì)胞。3.干細(xì)胞的分類:很據(jù)分化潛能大小分:全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、專能干細(xì)胞根據(jù)來源來分:胚胎干細(xì)胞ESC、成體組織來源的干細(xì)胞ASC4.ES細(xì)胞生物學(xué)特性:細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及核型、細(xì)胞的高度分化潛能、堿性磷酸酶的表示、胚胎階段特異性細(xì)胞表面抗原的表示5.組織工程是指應(yīng)用工程學(xué)和生命科學(xué)的原理和方法來研究正?；虿±頎顩r下哺乳動(dòng)物組織的結(jié)構(gòu)、功能和生長(zhǎng)的機(jī)制,研究開發(fā)能夠修復(fù)、維持或改善損傷組織的人工生物替代物的一門學(xué)科。第八章1.核移植定義:將供體細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中,使后者不經(jīng)精子穿透等有性過程即可被激活、分裂并發(fā)育,使得核供體的基因得到完全復(fù)制。2.核移植目的:生殖性克隆、治療性克隆3.治療性克隆技術(shù)途徑包括以下幾個(gè)步驟:首先取病人體細(xì)胞核,移植到去核的成熟受體卵母細(xì)胞;在早期胚胎形成后,從中分離獲得人ES細(xì)胞;對(duì)ES細(xì)胞進(jìn)行基因修飾和定向分化研究;4)將定向分化后的細(xì)胞移植給病人。4.核移植技術(shù)的一般程序:核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備、核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備、核移植、激活、重構(gòu)胚胎的培養(yǎng)、胚胎移植、體細(xì)胞克隆動(dòng)物的鑒定5.核移植原理:1)胚胎、胚胎干細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞、成體細(xì)胞的每一個(gè)細(xì)胞核具有相同的遺傳物質(zhì)。2)已經(jīng)發(fā)生分化的胚胎細(xì)胞核移植到成熟的卵母細(xì)胞中,因?yàn)樘厥庖蜃幼饔?使植入核基因表示被重新編程或調(diào)整,將”發(fā)育鐘”撥回到受精狀態(tài),即恢復(fù)”全能性”(totipotent)。3)已經(jīng)分化的細(xì)胞經(jīng)過去分化培養(yǎng)后,同樣具有潛在發(fā)育潛能,能夠恢復(fù)全能性。6.核移植技術(shù)存在的問題A成功率低,為1-5％B理論研究滯后技術(shù)研究C體細(xì)胞克隆后代可能出現(xiàn)老化現(xiàn)象D核移植技術(shù)環(huán)節(jié)尚需要不斷完善第十一章1.植物組織培養(yǎng):在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中,培養(yǎng)離體植物組織(器官或細(xì)胞)并誘導(dǎo)使其長(zhǎng)成完整植株的技術(shù)。2.植物組織培養(yǎng)的類型:愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng):懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)3.植物細(xì)胞的全能性:植物細(xì)胞具有該植物體全部遺傳的可能性,在一定條件下如同受精卵一樣,具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。兩個(gè)含義:1)植物細(xì)胞無論是體細(xì)胞還是生殖細(xì)胞,均具有該物種全部的遺傳信息2)每個(gè)植物細(xì)胞均具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力4.細(xì)胞分化:細(xì)胞后代在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。5.脫分化(dedifferentiation):細(xì)胞分化是可逆的,分化的細(xì)胞在一定條件下,能夠轉(zhuǎn)變?yōu)榕咝誀顟B(tài),重新獲得分裂能力,稱為脫分化。6.愈傷組織:在人工培養(yǎng)基上由外植體上形成的一團(tuán)無序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。7.細(xì)胞再分化:即脫分化后的分生細(xì)胞(愈傷組織)在特定的條件(離體培養(yǎng))下,重新分化為各種類型的細(xì)胞,并進(jìn)一步發(fā)育成完整植株。8.再分化經(jīng)過兩種不同途徑實(shí)現(xiàn)(1)器官發(fā)生方式:外植體---脫分化------愈傷組織-----再分化----不定芽----轉(zhuǎn)管----不定根-------再生植株(2)無性胚胎方式:外植體----脫分化-----愈傷組織----再分化----胚狀體----------再生植株9.植物激素配比模式:高——有利于根的形成和愈傷組織的形成適,適中———有利于根的分化、低——有利于芽的形成第十二章1.快速繁殖:利用離體培養(yǎng)技術(shù),將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng),在短期內(nèi)獲得大量遺傳形狀一致的個(gè)體的方法。也稱微繁、快速繁殖。2.微繁技術(shù)具有以下特點(diǎn):一是繁殖周期短,可加快培育某些難繁殖、繁殖速度低、珍貴或?yàn)l危等類植物;二是繁殖數(shù)量大,集約化培養(yǎng)使每平方米面積,每年可生產(chǎn)數(shù)以萬計(jì)的株苗,增殖速度大大提高;三是能夠經(jīng)過消毒,在無菌條件下進(jìn)行,特別適合一些易感染病毒的植物,如馬鈴薯等;四是不受季節(jié)和環(huán)境條件的限制,適于工廠化生產(chǎn),擴(kuò)大規(guī)模,降低成本。五、雜合植物材料的大量繁殖。六、單獨(dú)繁殖雄株或雌株。3.快速繁殖程序:外植體→清洗→消毒→接種→愈傷組織→不定芽的形成→不定根的形成→馴化移栽。4.外植體(explant):由活體(invivo)植物體上切取下來的,用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等。5.不定芽:除頂芽和腋芽以外,任何其它器官或組織產(chǎn)生的芽稱為不定芽6.繼代培養(yǎng):更換新鮮培養(yǎng)基來繁殖同種類型的材料(愈傷組織、芽)。7.不定芽的三種途徑:1.腋芽形成途徑。2.器官發(fā)生途徑。3.胚狀體形成途徑。三種途徑優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)比較:1)腋芽途徑容易成苗,對(duì)培養(yǎng)基要求不高,后代遺傳性較為穩(wěn)定,但取材受到一定限制,僅限于具有明顯頂端分生組織和次生分生組織的物種。2)器官發(fā)生途徑和胚狀體發(fā)生途徑,對(duì)培養(yǎng)基要求高,器官發(fā)生條件苛刻。繁殖數(shù)量不如腋芽途徑高,可是來源豐富。8.微莖尖培養(yǎng)法脫毒原理:感染病毒植株的體內(nèi)病毒的分布并不均勻,病毒的數(shù)量隨植株部位及年齡而異,越靠近莖頂端區(qū)域的病毒的感染深度越低,生長(zhǎng)點(diǎn)(約0.1～1.0mm區(qū)域)則幾乎不含或含病毒很少、這是因?yàn)榉稚鷧^(qū)域內(nèi)無維管束,病毒只能經(jīng)過胞間連絲傳遞,趕不上細(xì)胞不斷分裂和活躍的生長(zhǎng)速度。9.植物脫毒方法:微莖尖培養(yǎng)法、珠心組織培養(yǎng)法、熱處理法第十三章1.單倍體:植物減數(shù)分裂后形成的雌雄配子,其染色體數(shù)只有體細(xì)胞的一半,將這具有單套染色體的細(xì)胞稱為單倍體細(xì)胞2.單倍體育種:將具有單套染色體的單倍體植物,經(jīng)人工染色體加倍,使其成為純和二倍體,從中篩選優(yōu)良個(gè)體,直接繁育成新品種,或具有單一優(yōu)良性狀的個(gè)體,作為雜交育種的原始材料。3.看護(hù)培養(yǎng)法:取出花粉,制成每ml含有20個(gè)花粉粒的細(xì)胞懸浮液?？醋o(hù)培養(yǎng)時(shí),把花藥放在瓊脂培養(yǎng)基表面上,然后在每個(gè)花藥上覆蓋一小塊圓片濾紙。用移液管吸取1滴已準(zhǔn)備好的花粉粒懸浮液,滴在每個(gè)小圓片濾紙上培養(yǎng),在25℃和一定光照強(qiáng)度下,大約一個(gè)月長(zhǎng)出細(xì)胞群4.幼胚培養(yǎng)的途徑有3條:1、正常胚胎發(fā)育途徑2、脫分化形成愈傷組織3早熟萌發(fā)產(chǎn)生畸形苗第十五章1.體細(xì)胞胚(胚狀體):離體培養(yǎng)下沒有經(jīng)過受精過程,但經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程所形成的胚的類似物,統(tǒng)稱為體細(xì)胞胚。2.體細(xì)胞胚胎有以下幾方面的界定:①體細(xì)胞胚是離體培養(yǎng)的產(chǎn)物,只限于在離體培養(yǎng)范圍使用,以區(qū)別于無融合生殖胚;②體細(xì)胞胚起源于非合子細(xì)胞,以區(qū)別于合子胚;③體細(xì)胞胚經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程,以區(qū)別于離體培養(yǎng)中器官發(fā)生形成個(gè)體的途徑。3.體細(xì)胞胚發(fā)育特點(diǎn):1)與器官發(fā)生的途徑比:體細(xì)胞胚發(fā)育再生植株有兩個(gè)明顯的特點(diǎn)。一是體細(xì)胞胚具有雙極性二是體細(xì)胞胚形成后與母體的維管束系統(tǒng)聯(lián)系較少,即出現(xiàn)所謂的生理隔離現(xiàn)象。

2)與合子胚相比:①體細(xì)胞胚一般沒有真正的胚柄只有類似胚柄的結(jié)構(gòu),而合子胚在發(fā)育初期具有明顯的胚柄。②體細(xì)胞胚的子葉常不規(guī)范,有時(shí)具有兩片以上的子葉。而合子胚的子葉是相當(dāng)規(guī)范的,能夠作為分類的依據(jù)。③與相同植物比較,體細(xì)胞胚的體積明顯小于合子胚。

④體細(xì)胞胚沒有休眠而是直接形成植株。合子胚在胚胎發(fā)育完全進(jìn)入子葉期以后,經(jīng)過一系列的物質(zhì)積累和脫水就進(jìn)入休眠。4.狹義人工種子:是指植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體,包裹在含有養(yǎng)分和具有保護(hù)功能的物質(zhì)中,并在適宜條件下能夠發(fā)芽出苗的顆粒體。廣義人工種子:是在胚狀體或微芽(頂芽、腋芽)、微型變態(tài)器官(小鱗莖等)之外加上必要的營(yíng)養(yǎng)成分(人工胚乳)后,用具有一定通透性而無毒的材料將其包裹起來,形成的與天然種子相似的顆粒體。5.人工種子的分類

一)根據(jù)包被情況劃分為三類:1、裸露的或休眠的繁殖體如微鱗莖,微塊莖等。它們?cè)诓患影坏那闆r下也具有較高的成株率。2、人工種皮包被的繁殖體一些體細(xì)胞胚、原球莖等不能過度干燥,但只需要用人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài),如胡蘿卜體細(xì)胞胚。3、水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中,再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水,從而維持良好的發(fā)芽能力。二)根據(jù)繁殖體的類型劃分為兩類:1、以體細(xì)胞胚為繁殖體的人工種子2、以微器官為繁殖體的人工種子6.人工種子的制備:

制作流程(以體細(xì)胞胚為例)

外植體的選擇和消毒→愈傷組織的誘導(dǎo)→體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)→體細(xì)胞胚的同步化→體細(xì)胞胚的分選→體細(xì)胞胚的包裹(人工胚乳)→包裹外膜(人工種皮)7.人工種子的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用1、與利用試管苗相比,具有更多的優(yōu)點(diǎn):人工種子能夠直接播種、能夠存儲(chǔ)避免移栽困難、能夠長(zhǎng)距離運(yùn)輸。2、與田間制種相比,能夠節(jié)省制種用地,且不受季節(jié)限制,能夠?qū)崿F(xiàn)工廠化生產(chǎn),同時(shí)還避免了種子攜帶病原菌的危險(xiǎn);3、在無性繁殖植物中,有可能建立一種高效快速的繁殖方法。

4、能夠?qū)?yōu)異雜種種子不經(jīng)過有性制種而快速獲得大量種子,特別是對(duì)于那些制種困難的植物更具有主要的適用意義5、對(duì)于一些不能正常產(chǎn)生種子的特殊植物材料如三倍體、非整倍體、工程植物等,有可能經(jīng)過人工種子在短期內(nèi)加大繁殖應(yīng)用。8.人工種子的局限性①繁殖體的誘導(dǎo)及其可能發(fā)生變異;②人工胚乳和人工種皮還存在缺陷③發(fā)芽技術(shù)尚待解決;④人工種子工廠化生產(chǎn)配套設(shè)施、及種子成本過高等。第十六章1.植物原生質(zhì)體的分離方法:1、機(jī)械分離法2、酶解分離法2.影響植物原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素1)材料選擇:離體培養(yǎng)植株(試管苗)、田間或溫室的植株,其葉片、葉柄、莖段等均可作為原生質(zhì)體分離材料,但一定要用幼嫩的植株。2)滲透壓穩(wěn)定劑常見的穩(wěn)定劑有兩類:1)糖溶液系統(tǒng)2)鹽溶液系統(tǒng)3)細(xì)胞質(zhì)膜穩(wěn)定劑常見質(zhì)膜穩(wěn)定劑有:葡萄糖硫酸鉀、MES、CaCl2·2H2O、KH2PO4等。4)酶的種類和組合原生質(zhì)體分離主要取決于酶的種類、濃度及組合。主要用的酶有:纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶5)pH值、溫度、光照3.原生質(zhì)體純化方法:過濾法、離心法、飄浮法4.原生質(zhì)體培養(yǎng)的意義A為細(xì)胞融合提供培養(yǎng)方法B為遺傳轉(zhuǎn)化提供受體C利用培養(yǎng)變異選育新品種D用于細(xì)胞器的分離與轉(zhuǎn)移E用于理論研究第十七章1.染色體工程是按照預(yù)先的設(shè)計(jì),添加、消除或替代同種或異種染色體的全部或一部分,從而達(dá)到定向改變生物遺傳性狀或選育新品種的目的。2.人工加倍方法1、化學(xué)誘導(dǎo)法:秋水仙素、細(xì)胞松弛素B2生物學(xué)的方法:3.多倍體倍性鑒定1、核體積測(cè)量法——細(xì)胞核的大小與染色體數(shù)目成比例2、DNA含量測(cè)定3、染色體計(jì)數(shù)法-最直觀、最準(zhǔn)確4.多倍體的優(yōu)勢(shì):形