液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（lcms）的原理及應(yīng)用　釣漁翁

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用〔lcms〕的原理及應(yīng)用 _釣漁翁液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(lc/ms)的原理及應(yīng)用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用的原理及應(yīng)用簡介1977LC/MS1978LC/MS1989LC/MS/MS1991APILC/MS1997年，LC/MS/MS2023年美國質(zhì)譜協(xié)會統(tǒng)計的藥物色譜分析各種不同方法所占的比例。1990年，HPLC高達85%，而2023年下降到15%，相反，LC/MS所占的份額從3%提高到大約80%。我們國家目前在這方面可能相當于美國1990年的水平。為此我們還有很長的一段路要走色譜質(zhì)譜的在線聯(lián)用將色譜的分別力量與質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來，實現(xiàn)對簡單混合物更準確的定量和定性分析。而且也簡化了樣品的前處理過程，使樣品分析更簡便。色譜質(zhì)譜聯(lián)用包括氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)，液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用互為補充，分析不同性質(zhì)的化合物。液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)分:氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式〔EI〕得到的譜圖，可與標準譜庫比照。液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問題：不揮發(fā)性化合物分析測定；極性化合物的分析測定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；大分子量化合物〔包括蛋白、多肽、多聚物等〕的分析測定；沒有商品化的譜庫可比照查詢，只能自己建庫或自己解析譜圖?，F(xiàn)代有機和生物質(zhì)譜進展208090譜法通常只能測定分子量500Da以下的小分子化合物。20世紀70年月，消滅了場解吸〔FD〕離子化技術(shù)，能夠測定分子量高達1500~2023Da的非揮發(fā)性化合物，但重復(fù)性差。20世紀80年月初制造了快原子質(zhì)譜法〔FAB-MS〕，能夠分析分子量達數(shù)千的多肽。隨著生命科學(xué)的進展，欲分析的樣品更加簡單，分子量范圍也更大，因此，電噴霧離子化質(zhì)譜法〔ESI-MS〕和基質(zhì)關(guān)心激光解吸離子化質(zhì)譜法〔MALDI-MS〕應(yīng)運而生。GC-MS的EI和CI源，離子化方式有大氣壓電離〔API〕〔包括大氣壓電噴霧電離ESI、大氣壓化學(xué)電離APCI、大氣壓光電離APPI〕與基質(zhì)關(guān)心激光解吸電離。前者常承受四極桿或離子阱質(zhì)量分析器，統(tǒng)稱API-MS。后者常用飛行時間作為質(zhì)量分析器，所構(gòu)成的儀器稱為基質(zhì)關(guān)心激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀〔MALDI-TOF-MS〕。API-MS的特點是可以和液相色譜、毛細管電泳等分別手段聯(lián)用，擴展了應(yīng)用范圍，包括藥物代謝、臨床和法醫(yī)學(xué)、環(huán)境分析、食品檢驗、組合化學(xué)、有機化學(xué)的應(yīng)用等；MALDI-TOF-MS的特點是對鹽和添加物的耐受力量高，且測樣速度快，操作簡潔。質(zhì)譜原理簡介：質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分別，然后測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法。以檢測器檢測到的離子信號強度為縱坐標，離子質(zhì)荷比為橫坐標所作的條狀圖就是我們常見的質(zhì)譜圖。常見術(shù)語:質(zhì)荷比:離子質(zhì)量(以相對原子量單位計)與它所帶電荷(以電子電量m/Z.峰:質(zhì)譜圖中的離子信號通常稱為離子峰或簡稱峰.離子豐度:檢測器檢測到的離子信號強度.基峰:在質(zhì)譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強度最大的離子峰稱作基峰.總離子流圖；質(zhì)量色譜圖；準分子離子；碎片離子；多電荷離子；同位素離子總離子流圖:在選定的質(zhì)量范圍內(nèi)，全部離子強度的總和對時間或掃描次數(shù)所TIC質(zhì)量色譜圖指定某一質(zhì)量(或質(zhì)荷比)的離子其強度對時間所作的圖.利用質(zhì)量色譜圖來確定特征離子，在簡單混合物分析及痕量分析時是LC/MS測定中最有用的方式。當樣品濃度很低時LC/MS的TIC上往往看不到峰，此時，依據(jù)得到的分子量信息，輸入M+1或M+23等數(shù)值，觀看提取離子的質(zhì)量色譜圖，檢驗直接進樣得到的信息是否在LC/MS上都能反映出來，確定LC條件是否適宜，以后進展MRM等其他掃描方式的測定時可作為參考。1.0指與分子存在簡潔關(guān)系的離子，通過它可以確定分子量.液質(zhì)中最常見的準分子離子峰是[M+H][M-H]-.在 ESI 中, 往往生成質(zhì)量大于分子量的離子如M+1,M+23,M+39,M+18...... 稱 準 分 子 離 子 , 表 示為:[M+H]+,[M+Na]+等碎片離子：準分子離子經(jīng)過一級或多級裂解生成的產(chǎn)物離子.碎片峰的數(shù)目及其豐度則與分子構(gòu)造有關(guān),數(shù)目多表示該分子較簡潔斷裂,豐度高的碎片峰表示該離子較穩(wěn)定,也表示分子比較簡潔斷裂生成該離子。Ephedrine,MW=165多電荷離子：指帶有2個或更多電荷的離子,常見于蛋白質(zhì)或多肽等離子.有機質(zhì)譜中,單電荷離子是絕大多數(shù),只有那些不簡潔碎裂的基團或分子構(gòu)造-如共軛體系構(gòu)造-才會形成多電荷離子.它的存在說明樣品是較穩(wěn)定的.承受電噴霧的離子化技術(shù),可產(chǎn)生帶很多電荷的離子,最終經(jīng)計算機自動換算成單質(zhì)/荷比離子。同位素離子由元素的重同位素構(gòu)成的離子稱為同位素離子.各種元素的同位素,根本上依據(jù)其在自然界的豐度比消滅在質(zhì)譜中,這對于利用質(zhì)譜確定化合物及碎片的元素組成有很大便利,還可利用穩(wěn)定同位素合成標記化合物,如:氘等標記化合物,再用質(zhì)譜法檢出這些化合物,在質(zhì)譜圖外貌上無變化,只是質(zhì)量數(shù)的位移,從而說明化合物構(gòu)造,反響歷程等如何看質(zhì)譜圖：確定分子離子,即確定分子量氮規(guī)章：含偶數(shù)個氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是偶數(shù)，含奇數(shù)個氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是奇數(shù)。與高質(zhì)量碎片離子有合理的質(zhì)量差，凡質(zhì)量差在3~8和10~13，21~25之間均不行能，則說明是碎片或雜質(zhì)。確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式高區(qū)分質(zhì)譜可以由分子量直接計算出化合物的元素組成從而推出分子式低區(qū)分質(zhì)譜利用元素的同位素豐度，例:峰強度與構(gòu)造的關(guān)系豐度大反映離子構(gòu)造穩(wěn)定在元素周期表中自上而下，從右至左，雜原子外層未成鍵電子越易被電離，容納正電荷力量越強，含支鏈的地方易斷，這同有機化學(xué)根本全都，總是在分子最薄弱的地方斷裂。不同類型有機物有不同的裂解方式一樣類型有機物有一樣的裂解方式,只是質(zhì)量數(shù)的差異需要閱歷記憶。質(zhì)譜解析的一般步驟(適于低區(qū)分小分子譜圖,假設(shè)已經(jīng)是高區(qū)分質(zhì)譜圖得到元素組成更好)(1)核對獲得的譜圖,扣除本底等因素引起的失真,考慮操作條件是否適當綜合樣品其他學(xué)問：例如熔點，沸點，溶解性等理化性質(zhì)，樣品來源，光譜，波譜數(shù)據(jù)等.盡可能推斷出分子離子。假設(shè)和排列可能的構(gòu)造歸屬：高質(zhì)量離子所顯示的，在裂解中失去的中性碎片，如M-1，M-15，M-18，M-20，M-31. 意味著失H，CH3，H2O，HF，OCH3......假設(shè)一個分子構(gòu)造，與參考譜圖比照，或取類似的化合物，并作出它的質(zhì)譜進展比照。有機質(zhì)譜的特點優(yōu)點:定分子量準確，其它技術(shù)無法比。靈敏度高，常規(guī)10-7—10-8g,單離子檢測可達10-12g。(3)快速，幾分甚至幾秒。LC/MS，MS/MS對于難分別的混合物特別有效,其它技術(shù)無法勝任。多功能，廣泛適用于各類化合物。局限性:異構(gòu)體，立體化學(xué)方面區(qū)分力量差。重復(fù)性稍差，要嚴格掌握操作條件。所以不能象低場 NMR，IR等自己動手，須專人操作。有離子源產(chǎn)生的記憶效應(yīng)，污染等問題。(4)價格稍顯昂貴，操作有點簡單。質(zhì)譜儀器：質(zhì)譜儀由以下幾局部組成數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓進樣系統(tǒng) 離子源 質(zhì)量分析器 檢測接收器┗━━━━━╋━━━━━━┛真空系統(tǒng)真空系統(tǒng)質(zhì)譜儀的離子源、質(zhì)量分析器和檢測器必需在高真空狀態(tài)下工作，以削減本底的干擾，避開發(fā)生不必要的離子-分子反響。所以質(zhì)譜反響屬于單分子分解反響。利用這個特點，我們用液質(zhì)聯(lián)用的軟電離方式可以得到化合物的準分子離子，從而得到分子量。由機械真空泵(前極低真空泵)，集中泵或分子泵(高真空泵)組成真空機組，抽取離子源和分析器局部的真空。只有在足夠高的真空下，離子才能從離子源到達接收器，真空度不夠則靈敏度低。進樣系統(tǒng)把分析樣品導(dǎo)入離子源的裝置，包括：直接進樣，GC，LC及接口，加熱進樣，參考物進樣等。離子源使被分析樣品的原子或分子離化為帶電粒子(離子)的裝置，并對離子進展加速使其進入分析器，依據(jù)離子化方式的不同，有機質(zhì)譜中常EI，ESIEI(ElectronImpactIonization):電子轟擊電離—硬電離。CI(ChemicalIonization):化學(xué)電離—核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。FD(FieldDesorption)FABFAB(FastAtomBombardment):快原子轟擊—或者銫離子(LSIMSESI(ElectrosprayIonization):電噴霧電離—屬最軟的電離方式。適宜極性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白質(zhì)分子多肽等)APCI(AtmosphericPressureChemicalIonization):大氣壓化學(xué)電離—同上，更適宜做弱極性小分子。APPI(AtmosphericPressurePhotoSprayIonization):大氣壓光噴霧電離—同上，更適宜做非極性分子。MALDI(MatrixAssistedLaserDesorption):基體關(guān)心激光解吸電離。通常用于飛行時間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合蛋白質(zhì)，多肽等大分ESI，APCI，APPI(API)試驗室現(xiàn)有的離子源:ESIAPCI大氣壓化學(xué)電離源電噴霧〔ESI〕的特點通常小分子得到[M+H]+]+,[M+Na]+或[M-H]-單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，由于質(zhì)譜儀測定質(zhì)/荷比，因此質(zhì)量范圍只有幾千質(zhì)量數(shù)的質(zhì)譜儀可測定質(zhì)量數(shù)十幾萬的生物大分子。電噴霧電離是最軟的電離技術(shù)，通常只產(chǎn)生分子離子峰，因此可直接測定混合物，并可測定熱不穩(wěn)定的極性化合物；其易形成多電荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子；通過調(diào)整離子源電壓掌握離子的碎裂〔CID〕測定化合物構(gòu)造。大氣壓化學(xué)電離〔APCI〕特點大氣壓化學(xué)電離也是軟電離技術(shù)，只產(chǎn)生單電荷峰，適合測定質(zhì)量數(shù)小于2023Da的弱極性的小分子化合物；適應(yīng)高流量的梯度洗脫/凹凸水溶液變化的流淌相；通過調(diào)整離子源電壓掌握離子的碎裂。電噴霧與大氣壓化學(xué)電離的比較電離機理：電噴霧承受離子蒸發(fā)，而APCI電離是高壓放電發(fā)生了質(zhì)子轉(zhuǎn)移而生成[M＋H]+或[M-H]-離子。樣品流速：APCI源可從0.2到2ml／min；而電噴霧源允許流量相對較小,一般為0.2-1ml／min.斷裂程度；APCI源的探頭處于高溫，對熱不穩(wěn)定的化合物就足以使其分解.靈敏度：通常認為電噴霧有利于分析極性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更適合于分析極性較小的化合物。多電荷：APCINanoSpray離子源特地設(shè)計的NanoSpray離子源特別適合于做微量的生化樣品，其流速范圍可從5nL／min到luL／min。一滴樣品就可做數(shù)小時的分析。可在最小的樣品消耗量下獲得最大靈敏度。靈敏度可高達 fmole。并可直接與微孔HPLC聯(lián)用。正負離子模式:一般的商品儀器中,ESI和APCI接口都有正負離子測定模式可供選擇。依據(jù)樣品的性質(zhì)選擇，也可兩種模式同時進展質(zhì)量分析器:是質(zhì)譜儀中將離子按質(zhì)荷比分開的局部,離子通過分析器后,按不同質(zhì)荷比(M/ZM/Z質(zhì)量分析器的分類：雙聚焦扇形磁場-電場串聯(lián)儀器(sector).四極質(zhì)譜儀(Q).飛行時間質(zhì)譜儀(TOF).離子阱質(zhì)譜儀〔TRAP〕付利葉變換-離子盤旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS).┏四極+TOF〔Q-TOF〕串列式多級質(zhì)譜儀┫三重四極〔QqQ〕(MS/MS) ┗TOF+TOF進展MS/MS的儀器從原理上可分為兩類第一類儀器利用質(zhì)譜在空間中的挨次，是由兩臺質(zhì)譜儀串聯(lián)組裝而成。即前面列出的串列式多級質(zhì)譜儀。其次類利用了一個質(zhì)譜儀時間挨次上的離子儲存力量，由具有存儲離子的分析器組成，如離子盤旋共振儀〔ICR〕和離子阱質(zhì)譜儀。但不能進展母離子掃描或中性喪失。試驗室現(xiàn)有的質(zhì)量分析器類型：串聯(lián)四極質(zhì)譜儀(MS/MS)：三重四極〔QqQ〕離子源→第一分析器→碰撞室→其次分析器→接收器MS1 MS2Q1 q2 Q3QqQ儀器可以便利的轉(zhuǎn)變離子的動能，因此掃描速度快，體積小，常作為臺式進入常規(guī)試驗室，缺點是質(zhì)量范圍及區(qū)分率有限，不能進行高區(qū)分測定，只能做到單位質(zhì)量區(qū)分?！餐ㄟ^高區(qū)分能得到化合物的分子式〕在液質(zhì)聯(lián)機中使用的碎片化手段，能量都是以碰撞的形式輸送給分子離子，這個能量足以使得處在能量亞穩(wěn)態(tài)分子中的某些化學(xué)鍵斷裂并使一些特定的分子發(fā)生構(gòu)造重排。碰撞誘導(dǎo)解離CID質(zhì)譜：選擇肯定質(zhì)量的離子作為母體離子，進入碰撞室，室內(nèi)充有靶子反響氣體(碰撞氣體：N2、He、Ar、Xe、CH4等)，發(fā)生離子—分子碰撞反響，從而產(chǎn)生‘子離子’，再經(jīng)MS2的分析器及承受器得到子CID(collision-induceddissociation)譜影響CID質(zhì)譜的因素：較大影響的因素有：所用碰撞氣體的種類，壓力，離子的能量，儀器的配置以及離子電荷狀態(tài)由于在不同的儀器上不行能在完全一樣的條件下去分析樣品，任何一個給定的化合物將在不同的條件下給出差異或大或小的質(zhì)譜，尤其是各個離子峰的相對豐度的差異幾乎是無法避開的。因而目前尚難以建立商品化的譜庫供檢索使用，只能進展人工解析或自己建庫。大氣壓電離技術(shù)中產(chǎn)生的離子為偶數(shù)電子離子，其主要的碎片應(yīng)由化學(xué)鍵的誘導(dǎo)斷裂和重排反響來產(chǎn)生，所以在EI質(zhì)譜解析中總結(jié)出CID檢測接收器：接收離子束流的裝置，有：電子倍增器、光電倍增器、微通道板數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)將接收來的電信號放大、處理并給出分析結(jié)果及掌握質(zhì)譜儀個局部工作。從幾伏低壓到幾千伏高壓。LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化接口的選擇：ESI適合于中等極性到強極性的化合物分子，特別是那些在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個質(zhì)子的大分子〔如蛋白質(zhì)〕APCI不適合可帶多個電荷的大分子，其優(yōu)勢在于弱極性或中等極性的小分子的分析。正、負離子模式的選擇：選擇的一般原則為：正離子模式：適合于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對樣品加以酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時可優(yōu)先考慮使用正離子模式。負離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙胺對樣品進展堿化。樣品中含有較多的強伏電性基團，如含氯、含溴和多個羥基時可嘗試使用負離子模式。流淌相的選擇常用的流淌相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以參加易揮發(fā)酸堿pHLC／MS接口避開進入不揮發(fā)的緩沖液，避開含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必需＜lmmol/l?！阐}分太高會抑制離子源的信號和堵塞噴霧針及污染儀器〕含甲酸〔或乙酸〕＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸銨＜105mmol/l。送樣前肯定要摸好LCMS要求。流量和色譜柱的選擇不加熱ESI的最正確流速是1—50ul／min，應(yīng)用4.6mm內(nèi)徑LC柱時要求柱后分流，目前大多承受l—2.1mm內(nèi)徑的微柱，TIS源最lml／min200—400ul／minAPCI的最正確流速～lml／min，常規(guī)的直徑4.6mm柱最適宜。為了提高分析效率，常承受＜100mm的短柱〔此時UV圖上并不能獲得完全分別，由于質(zhì)譜定量分析時使用MRM的功能，所以不要求各組分沒有完全分別〕。這對于大批量定量分析可以節(jié)約大量的時間。關(guān)心氣體流量和溫度的選擇霧化氣對流出液形成噴霧有影響，枯燥氣影響噴霧去溶劑效果，碰撞氣影響二級質(zhì)譜的產(chǎn)生。操作中溫度的選擇和優(yōu)化主要是指接口的枯燥氣體而言，一般情況下選擇枯燥氣溫度高于分析物的沸點20℃左右即可。對熱不穩(wěn)定性化合物，要選用更低的溫度以避開顯著的分解。選用枯燥氣溫度和流量大小時還要考慮流淌相的組成，有機溶劑比例高時可承受適當?shù)偷臏囟群土髁啃∫稽c的。樣品的預(yù)處理：為什么要進展樣品的預(yù)處理：從保護儀器角度動身，防止固體小顆粒堵塞進樣管道和噴嘴，防止污染儀器，降低分析背景，排解對分析結(jié)果的干擾。要求獲得最正確的分析結(jié)果，從ESI電離的過程分析：ESI電荷是在液滴的外表，樣品與雜質(zhì)在液滴外表存在競爭，不揮發(fā)物〔如磷酸鹽等〕防礙帶電液滴外表揮發(fā)，大量雜質(zhì)防礙帶電樣品離子進入氣相狀態(tài)，增加電荷中和的可能。樣品的預(yù)處理常用方法a〕超濾b〕溶劑萃?。}c〕固相萃取d〕灌注〔Perfusion〕凈化／去鹽e〕色譜分別反相色譜分別親和技術(shù)分別f〕甲醇或乙腈沉淀蛋白g〕酸水解，酶解h〕衍生化化合物鑒別全掃描方式〔Q1掃描〕全掃描數(shù)據(jù)采集可以得到化合物的準分子離子，從而可推斷出化合物的分子量，用于鑒別是否有未知物，并確認一些推斷不清的化合物，如合成化合物的質(zhì)量及構(gòu)造。子離子分析〔MS/MS〕子離子，用于構(gòu)造推斷(得到化合物的二級譜圖即碎片離子)和選擇離子對作多種反響監(jiān)測〔MRM〕。子離子譜圖與錐體電壓斷裂譜圖〔源內(nèi) CID〕可能格外相像，所不同的是子離子質(zhì)譜圖只有一種質(zhì)量通過MS1，因此也全部碎片離子都是由我們所選定的母離子所產(chǎn)生的，所以我們更信任由MS/MS產(chǎn)生的譜圖的純度。用大氣壓電離質(zhì)譜儀可以得到分子量信息正離子方式常消滅如下離子:-Na22Da.higherthanM+H-K38Da.higherthanM+H-Li6Da.higherthanM+H-NH417Da.higherthanM+H-ACN40Da.higherthanM+H2M+H,2M+Na負離子方式常消滅如下離子:-TFA114Da.higherthenM-H(113and227background)-Acetate60Da.higherthenM-H-Formic46Da.higherthenM-H-Cl36Da.higherthanM-H影響分子量測定的因素1〕pH的影響：正離子方式pH要低些，負離子方式pH除對離子化有影響外，還影響LC的峰形。2〕氣流和溫度：當水含量高及流量大時要相應(yīng)增加。溶劑和緩沖液流量：流速適當高可以提高出峰的靈敏度。溶劑和緩沖液的類型：通常正離子用甲醇好，負離子乙腈好些選擇適宜的液相色譜類型：正相、反相、選擇適宜的色譜柱適宜的電壓：DP電壓高時，樣品在源內(nèi)分解或碎裂；高DP電壓時回使多電荷離子比例低，多聚體也削減樣品構(gòu)造和性質(zhì)雜質(zhì)的影響：溶劑的純度、水的純潔程度等。當成分簡單，雜LC樣品濃度不夠，有時需要濃縮分子量測定中的誤判溶劑中的雜質(zhì)來自于塑料添加劑的峰樣品容器不干凈，常見外表活性劑的峰進樣系統(tǒng)污染樣品在源內(nèi)碎裂，形成碎片離子LC-MSm/z50-150,溶劑離子，[(H2O)nH+，n=3-112]m/z102,H+乙腈+乙酸,C4H7NO2H+,102.0549m/z149,管路中鄰苯二甲酸酯的酸酐,C8H4O3H+,149.0233m/z288,2mmm/z279,管路中鄰苯二甲酸二丁酯C16H22O4H+,279.1591m/z316,2mmm/z384,瓶的光穩(wěn)定劑產(chǎn)生的離子m/z391,管路中鄰苯二甲酸二辛酯,C24H38O4H+,391.2843m/z413,鄰苯二甲酸二辛酯+鈉,C24H38O4Na+,413.2668m/z538,乙酸+氧+鐵〔噴霧管〕,Fe3O(O2CCH3)6,537.8793分子量測定失敗的緣由流淌相不適宜不揮發(fā)性鹽的影響c〕成分簡單，雜質(zhì)太多d)樣品濃度不夠e〕pH值不適宜f〕樣品在源內(nèi)分解或碎裂目標化合物分析〔1〕選擇離子監(jiān)測〔SIM〕SIM用于檢測或目標化合物，比全掃描方式能得到更高的靈敏度。這種數(shù)據(jù)采集的方式一般用在定量目標化合物之前，而且往往需要化合物的性質(zhì)。假設(shè)幾種目標化合物用同樣的數(shù)據(jù)采集方式監(jiān)測，那么可以同時測定幾種離子.〔3〕母離子掃描母離子分析可用來鑒定和確認類型的化合物，盡管它們的母離子的質(zhì)量可以不同，但在分裂過程中會生成共同的子離子，這種掃描功能在藥物代謝爭論中格外重要。中性喪失掃描中性喪失掃描分析可用來鑒定和確認類型的化合物，例如生兒遺傳疾病篩查中某些檢測工程。也可以幫助進展未知物構(gòu)造推斷，例如有中性喪失 18Da的意味著-H2O，28-CO，30-HCOH，32-CH3OH，44-CO2各種掃描方式的原理解釋：Q1FullScan(Start–Stop)(Q1Q1alwaysusedassingleMSanalyzerUsedprimarilyforident.ofprecursorionSIM-SelectedIonMonitoring(選擇離子監(jiān)測)UsedtooptimizeanalyzerforspecificionsSIMusedforquantitativeanalysesQ1SIMusedto“optimize”precursorionMaximizesignalinpreparationforMS/MSProductIonScan(子離子掃描)Afteridentification,theprecursorionissentintothecollisioncellandfragmentedbyCIDQ1isfixed,Q3sweepsagivenmassrangeUsedforstructuralelucidationFirststeptodevelopingquantitativemethodm3+scannedm1+fixedExampleofProductIonSpectrumEphedrine,MW=165PrecursorIonScan(母離子掃描)Q1sweepsagivenmassrange,Q3isfixedUsedtodeterminethe“origin”ofparticularproduction(s)createdinthecollisioncellFrequentlyusedfordrugmetaboliteidentification(commonproductionobservedinthemetabolites)藥物代謝爭論藥物代謝與藥物動力學(xué)爭論技術(shù)上的最重大進展是LC-MS-MS的使用，電噴霧〔ESI〕和大氣壓化學(xué)電離〔APCI〕以及大氣壓光電離〔APPI〕是其主要的離子源，由于具有高靈敏度〔ng/ml~pg/ml〕，高選擇性〔檢測特定的碎片離子〕、高效率〔每天可檢測幾百個生物樣品和對藥物構(gòu)造的廣泛適用性，對液態(tài)樣品和混合樣品的分別力量高，可通過二級離子碎片查找原型藥物并推導(dǎo)其構(gòu)造， LC-ESI-MS-MS已廣泛地應(yīng)用于藥物代謝爭論中一期生物轉(zhuǎn)化反響和二期結(jié)合反響產(chǎn)物的鑒定、簡單生物樣品的自動化分析以及代謝物構(gòu)造闡述等，已在世界上大型制藥企業(yè)中取代HPLC而占據(jù)了主導(dǎo)地位，其測試的樣品量占總量的70%以上。自然產(chǎn)物自然藥物的爭論目前中藥開發(fā)爭論有兩條途徑。一條途徑是從單一植物中提取一種有效成分(單體化合物)或提取物開發(fā)成藥。另一途徑則是中藥復(fù)方制劑的開發(fā)爭論。承受現(xiàn)代多種儀器聯(lián)用技術(shù)，特別是高效液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)，可對其十幾種乃至幾十種化學(xué)成分進展指紋圖譜分別鑒定。再從指紋圖譜中選擇四、五種指標成分(有效成分或特征成分)進展定量，可以確定出簡化的指紋圖譜和指標成分，又是最合理的中藥復(fù)方質(zhì)量掌握的方法，是爭論中藥簡單體系，尤其是復(fù)方的有力工具。國內(nèi)外很多學(xué)者已進展了復(fù)方丹參、清開靈、瀉心湯、人參或黨參制劑等中藥中的主要成分的分析。臨床診斷和疾病生物標志物的分析歐美等目前已廣泛承受HPLC/MS/MS法用于臨床診斷以及疾病生物標志物的爭論、檢測，具有專一性好、靈敏度高、本錢低、分析快速，經(jīng)濟效益可觀等特點。目前可進展生兒遺傳疾病篩選〔PKU、MCAD等四十種左右〕、生兒性激素變異的檢測、男女激素的監(jiān)測、老年癡呆癥的早期診斷、抗排異藥物的檢測、磷酸脂的檢測、血紅蛋白變異檢測、糖化血紅蛋白〔糖尿病早期檢測〕、某些心臟病、癌癥疾病篩查如乳腺癌等等〔Biomarker法、通過鑒定DNA損傷程度測定〕、藥物劑量監(jiān)測、藥物相互作用監(jiān)測、地區(qū)性突發(fā)性中毒病人的毒物檢測等。殘留、法醫(yī)學(xué)和環(huán)境樣品測定專家指出，中國入世后，食品工業(yè)最大的問題就是“安全壁壘“，這將給中國的進出口和國內(nèi)企業(yè)帶來極大的威逼。美國食品與藥品管理局(FDA)、歐盟、日本、韓國等主要貿(mào)易國和地區(qū)公布了在進口動物源性食品中制止使用的藥物名單，提高了最高限量標準。這就要求中國加強農(nóng)、畜、水產(chǎn)品中的農(nóng)藥、獸藥等殘留的掌握和檢測。同樣隨著人類對生存環(huán)境的倍加關(guān)注，要求對環(huán)境中各種污染物、有害或有毒物以及法庭科學(xué)中毒物、濫用藥物等進展更加嚴格的監(jiān)控。而配以ESI、APCI和APPI離子化技術(shù)的LC/MS/MS以分析速度快、靈敏度高、特異性好等特點廣泛應(yīng)用與殘留和毒物分析。目前已成功地進展數(shù)百種農(nóng)藥、獸藥、抗生素、興奮劑類殘留和毒物、毒素如氯霉素、磺胺類、硝基呋喃類、毒品、多環(huán)芳烴等等化合物的檢測。下面講解應(yīng)用例如高效液相色譜――電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定