高效液相色譜儀組成及檢測器種類

高效液相色譜儀組成及檢測器種類第一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六1.儲(chǔ)液瓶（輸液管入口端安裝有過濾器）；2.高壓輸液泵；3.混合器和阻尼器；4.進(jìn)樣器（閥）；5.色譜柱；6.檢測器；7.廢液瓶；8.數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng)

第二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六HPLC儀器結(jié)構(gòu)示意圖貯液器輸液泵梯度裝置進(jìn)樣裝置分離柱控溫裝置檢測器第三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測器，記錄儀將檢測器送出的信號(hào)記錄下來，由此得到液相色譜圖。工作過程：第四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六一、高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)由溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。

第五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六1.溶劑貯存器

溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為1到2L，用來貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動(dòng)相。第六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六2.高壓輸液泵

高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動(dòng)相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中完成分離過程。對泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無脈動(dòng)，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。第七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動(dòng)相粘度和柱滲透無關(guān)。第八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六第九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。第十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六3.梯度洗脫裝置

梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動(dòng)相的強(qiáng)度、極性、pH值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。第十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六僅用弱溶劑僅用強(qiáng)溶劑梯度洗提第十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六梯度洗脫裝置分類一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動(dòng)相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺(tái)泵即可。一類是內(nèi)梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設(shè)置的程序，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統(tǒng)。

第十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六二、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進(jìn)行分離。第十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置,其結(jié)構(gòu)如圖所示：第十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六三、分離系統(tǒng)色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。第十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六柱管材料：耐腐蝕耐壓內(nèi)徑：2.0、3.0、4.1、4.6mm長度：5、10、15、25cm等固定相：顆粒細(xì)、圓、均一、剛性強(qiáng)第十七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六第十八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六一般在分離前備有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分離柱完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經(jīng)過前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過分離柱時(shí)不再洗脫其中固定相，保證分離技的性能不受影響。柱子裝填得好壞對柱效影響很大。對于細(xì)粒度的填料（＜20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。柱溫一般為室溫或接近室溫。第十九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六四、檢測系統(tǒng)檢測器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。對檢測器的要求是：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等。

第二十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六在液相色譜中，有兩種類型的檢測器：一類是溶質(zhì)性檢測器，它僅對被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類檢測器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測器等；一類是總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理和化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)。屬于此類檢測器有示差折光檢測器等。第二十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六㈠紫外光度檢測器第二十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六⒈作用原理依據(jù)被分析試樣組分對待定波長紫外光的選擇吸收性，組分濃度與吸光率的關(guān)系遵守比爾定律。第二十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六⒉工作過程透鏡將光源射來的光束變成平行光，經(jīng)過遮光板變成一對細(xì)小的平行光束，分別通過測量池與參比池，然后用紫外濾片濾掉非單色光，通過雙紫外光敏電阻，根據(jù)輸出信號(hào)差進(jìn)行檢測。第二十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六⒊特點(diǎn)⑴靈敏度高，檢測濃度可達(dá)到10-9g/ml；⑵結(jié)構(gòu)簡單，對溫度和流速不敏感；⑶溶劑的選用受限制。第二十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六㈡熒光檢測器物質(zhì)受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外光波長較長的熒光，可用熒光檢測器檢測，而某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)也可通過化學(xué)衍生轉(zhuǎn)變成能發(fā)射熒光德物質(zhì)而得到檢測。第二十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六優(yōu)點(diǎn)：是一種選擇性強(qiáng)、靈敏度高，比紫外檢測器高23個(gè)數(shù)量級，可達(dá)pg量級或更低，可用于梯度淋洗。缺點(diǎn)：樣品適用范圍有限，定量分析的線性范圍較窄(104-105)。第二十七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期六㈢示差折光檢測器借連續(xù)測定流通池中溶液折射率德方法來測定試樣濃度的檢測器。分為偏轉(zhuǎn)式和反射式兩種類型。是一種通用型檢測器，靈敏度可達(dá)10-7gcm-3。缺點(diǎn)是對溫度變化敏感，不能用于梯