臨床藥師微生物室見習(xí)小結(jié)

臨床藥師微生物室見習(xí)小結(jié)臨床藥師微生物室見習(xí)小結(jié)

臨床藥師微生物室見習(xí)小結(jié)

臨床藥師微生物室見習(xí)小結(jié)

微生物室是我此次臨床藥師進(jìn)修的第一站，也是特別重要的第一步，經(jīng)過這一個月的學(xué)習(xí)，我對于一張張藥物敏感性報告后的各個步驟有了更直觀的熟悉，學(xué)習(xí)從臨床檢驗(yàn)的角度看待抗生素的合理使用，

在這一個月的學(xué)習(xí)中，我了解了微生物室常用的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法，熟識抗菌藥物敏感試驗(yàn)方法和特別耐藥機(jī)制的篩選方法，并跟隨帶教老師參加了簡潔的臨床檢驗(yàn)操作及藥敏報告的解讀。同時，熟識了微生物的基本分類，本地區(qū)常見的病原菌及耐藥狀況，以及臨床常見感染性疾病的常見病原菌及耐藥狀況。在老師的急躁教育下，我對于MRSA、、VRE、PRSP、產(chǎn)ESBLs菌等幾種特別病原菌的耐藥狀況及藥物選擇有了更加全面系統(tǒng)的學(xué)習(xí)。這一個月的學(xué)習(xí)讓我受益匪淺。

擴(kuò)展閱讀：微生物實(shí)習(xí)總結(jié)

華南農(nóng)業(yè)高校

201*《微生物學(xué)》教學(xué)實(shí)習(xí)總結(jié)

專業(yè)：課程名稱：實(shí)習(xí)時間：學(xué)號:植物愛護(hù)（微生物工程方向）指導(dǎo)老師：紀(jì)春艷，阮小蕾，卓侃微生物教學(xué)實(shí)習(xí)201*.04.23-04.27（第十周）201*30201*19同學(xué)姓名王明麗班級：09植保微生物2班一、實(shí)習(xí)試驗(yàn)內(nèi)容

（一）土壤微生物的分別、培育及識別

1.試驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容

目的：1）把握從土壤中分別微生物的方法

2）把握常用的分別純化微生物的操作技術(shù)內(nèi)容：1）用稀釋法分別細(xì)菌、放線菌和霉菌2）用平板劃線方法分別微生物3）斜面接種及穿刺接種

2.試驗(yàn)原理

①從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分別與純化，方法有：單細(xì)胞挑取法、平板劃線法和稀釋倒平板法。本試驗(yàn)利用稀釋倒平板從土壤中分別細(xì)菌、放線菌和霉菌?；驹頌椋簩⒑懈鞣N微生物的土壤懸浮液進(jìn)行稀釋后涂布接種到各種選擇培育基平板上，在不同條件下培育，從而使各種微生物在各自的培育基上形成單菌落。單菌落是一個細(xì)胞繁殖而成的集合體，即是一個純培育。

②平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散為單個細(xì)胞，取肯定量的稀釋樣液接種到不同選擇性培育基的平板上，經(jīng)過培育，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)。

3.試驗(yàn)材料

1)培育基已滅菌的牛肉膏、高氏一號、查氏培育基。2)儀器及用具99mL無菌水1瓶，含9mL無菌水的試管6支，80%乳酸，95%乙醇，無菌培育皿，1mL無菌移液管，土壤樣品、天平、稱量紙、鑰匙、試管架、涂布器。4.操作步驟

（一）土壤稀釋分別法分別純化細(xì)菌、放線菌和霉菌1.土壤樣品采集

待測地塊上，若地塊面積小于50平方米，對角線三點(diǎn)采樣，若大于50平方米，對角線五點(diǎn)采樣。一般定點(diǎn)于耕作層0--20cm，先除去表土1--2cm，以無菌鏟采土足量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。

2.無菌操作制備土壤稀釋液

1)制備土壤懸液：稱取土樣1g，快速倒入含有99mL無菌水的三角瓶中，振蕩5~10min，使土樣充分打散，即成10-2的土壤懸液。

2)稀釋：用無菌移液管吸10-2的土壤懸液1mL，吹入9mL無菌水即成10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-3~10-8的稀釋液。留意：操作時管尖不能接觸液面，每一個稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以削減稀釋中的誤差。3.涂布法測定菌落數(shù)的方法

1)涂布法：將0.1~0.2mL菌懸液滴在平板表面中心位置，右手拿無菌涂布器平放于平板表面，將菌液先沿一條直線輕輕來回推動，使之勻稱分布，然后轉(zhuǎn)變方向沿另一垂直線來回推動，平板邊緣可轉(zhuǎn)變方向用涂布器再涂布幾次。

2)接種量和培育基：細(xì)菌：取10-6、10-7、10-8兩管稀釋液各0.2mL，分別接入兩個牛肉膏蛋白胨瓊脂平板中，涂布勻稱。放線菌：取10-2、10-3、10-4兩管稀釋液，在每管中加入10%酚液5~6滴，搖勻，靜置片刻，然后分別從兩管中吸出0.2mL加入高氏1號培育基平板中，涂布勻稱。霉菌：取10-2、10-3、10-4兩管稀釋液各0.2mL，分別接入查氏培育基中，涂布搖勻。

4.培育將接種好的細(xì)菌、放線菌、霉菌平板倒置，即皿蓋朝下放置，于28~30℃中恒溫培育，細(xì)菌培育1~2d，放線菌培育5~7d，霉菌培育3~5d。觀看生長的菌落，用于進(jìn)一步純化分別或直接轉(zhuǎn)接斜面。

5.劃線分別細(xì)菌用接種環(huán)從待純化的菌落或待分別的斜面菌種只沾取少量菌樣，在相應(yīng)培育基平板中劃線分別。劃線的方法多樣，目的是獲得單個菌落。常用的劃線方法有兩種：連續(xù)劃線和分區(qū)劃線。

6.穿刺接種霉菌用接種針將培育出的霉菌挑出，接種到新的查氏培育基上。5.留意事項(xiàng)

1)一般土壤中，細(xì)菌最多，放線菌及霉菌次之，而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中。故從土壤中分別細(xì)菌時，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計(jì)數(shù)。

2)在土壤稀釋分別操作中，每稀釋10倍，最好更換一次移液管，使計(jì)數(shù)精確?????。3)放線菌的培育時間較長，故制平板的培育基用量可適當(dāng)增多。6.試驗(yàn)結(jié)果與分析

①本小組任務(wù)是用涂布法分別土壤中的真菌，選用的是查氏培育基，因細(xì)菌長勢比真菌快，且培育基中未加鏈霉素、抗生素等抑制細(xì)菌生長的物質(zhì)，因此本次試驗(yàn)用于分別的9個培育皿全部長出了細(xì)菌，只有處理濃度為10-4土壤懸液中的一個皿中長出了少量真菌（即霉菌）菌落。②劃線法分別細(xì)菌：其中一個皿劃線重復(fù)，未達(dá)到劃線稀釋的目的，最終沒有長出單菌落，另一個皿雖劃線無重復(fù)，但是劃線次數(shù)較少，也沒有分別出單菌落。

③霉菌分別：接種的地方有霉菌菌落長出，但其他地方也有霉菌菌落，分別結(jié)果不好。（二）水的細(xì)菌學(xué)檢查細(xì)菌總數(shù)的測定1．目的要求

通過試驗(yàn)把握水樣的采集和水樣中細(xì)菌總數(shù)的測定方法。2.試驗(yàn)原理1)水中細(xì)菌總數(shù)的測定

水中的細(xì)菌總數(shù)越多，說明水中有機(jī)物的含量就越高，水體被有機(jī)物污染的程度越重。水中細(xì)菌的種屬繁多，以肯定的培育基平板上生長出來的菌落，計(jì)算出來的水中的細(xì)菌的總數(shù)實(shí)際上是一種近似值。

絕大多數(shù)腐生性和致病性的細(xì)菌，可在肉膏蛋白胨培育基上進(jìn)行生長。因此應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)來測定水樣中的細(xì)菌總數(shù)基本上能代表水樣中細(xì)菌的數(shù)量。

2)水中細(xì)菌總數(shù)的測定和計(jì)算

在肉膏蛋白胨培育基上，1ml水樣，經(jīng)37℃，24h培育后所生長出來的總菌數(shù)。我國飲用水的衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)：在1ml自來水中細(xì)菌總數(shù)不得超過100個。

3.試驗(yàn)器材

培育基：肉膏蛋白胨瓊脂培育基；滅菌水

其他用具：滅菌三角瓶，滅菌培育皿，滅菌試管等4.操作步驟

1)水樣的采集

自來水：水龍頭火焰灼燒3min，再開放水龍頭流水5min后，以滅菌三角瓶接取水樣。湖水：取距水面10-15cm的深層水樣，最好馬上試驗(yàn)，否則放入冰箱中保存。

2)細(xì)菌總數(shù)測定（1）自來水

A、用滅菌管吸取1ml水樣，注入滅菌培育皿中，做兩個皿。

B、分別傾入約15ml已溶化并冷卻到45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培育基，在桌上作平面旋搖，使水樣與培育基充分混勻。

C、另取一空的滅菌培育皿，傾入約15ml肉膏蛋白胨瓊脂培育基，作空白對比。D、培育基凝固后，倒置于37℃中，培育24h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。（2）湖水A、稀釋水樣：

a、取4個滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。b、取1ml水樣注入第一管9ml滅菌水內(nèi)、搖勻。

c、再自第一管取1ml至下一管滅菌水內(nèi)，如此稀釋到第四管，稀釋度分別為10-1、10-2、10-3、10-4。

B、自最終三個稀釋度的試管中各取1ml稀釋水加入空的滅菌培育皿中，每一稀釋度做兩個培育皿。

C、各傾入約15ml已溶化并冷卻到45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培育基，在桌上作平面旋搖，使水樣與培育基充分混勻。D、培育基凝固后，倒置于37℃中，培育24h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

3)菌落計(jì)數(shù)

1、自來水：兩個平板的平均菌落數(shù)即為1ml水樣的細(xì)菌總數(shù)。2、湖水：

（1）先計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)。若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時，則不應(yīng)采納，而應(yīng)以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌苔的大小不到平板的1/2，而其余的一半菌落分布又很勻稱時，則可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌落數(shù)。

（2）首先選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的，當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù)。

（3）若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均在30-300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來打算。若其比值小于2，實(shí)行兩者的平均值，若大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。

（4）若全部稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。

（5）若全部稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。

（6）若全部稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。

5.試驗(yàn)結(jié)果

⑴自來水：對比平板菌落為：0。自來水樣兩平板的菌落數(shù)分別為：3、1。所以1ml水樣的細(xì)菌總數(shù)為2個/ml。

⑵湖水

湖水樣不同稀釋度的平均菌落數(shù)10-2湖水1湖水2平均877.510-3433.510-4396.0由于全部稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，所以根據(jù)稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。湖水中的細(xì)菌總數(shù)為7.5×102個/ml。

6.思索題

1、從自來水水樣細(xì)菌總數(shù)檢測的結(jié)果推斷是否符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)？

答：由于我國飲用水的衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)為：在1ml自來水中細(xì)菌總數(shù)不得超過100，而小組測定的自來水中細(xì)菌數(shù)為2個/ml。所以從自來水水樣細(xì)菌總數(shù)檢測的結(jié)果看，符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

2、你所測的池塘水、河水、湖水的污穢度如何？通過試驗(yàn)?zāi)銓圩o(hù)水資源有何熟悉？答：我組所測的湖水污穢度較高，可能存在誤差。通過試驗(yàn)使我們明白只有愛護(hù)水源，保證其清潔，才能保證我們?nèi)祟愖陨淼睦?，無論是飲食方面，還是環(huán)境方面。

3、試與其他同學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，從中推斷你的試驗(yàn)結(jié)果誤差如何？緣由是什么？答：與其他同學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果相比較，我組自來水水樣細(xì)菌總數(shù)與他組相差不大，但湖水細(xì)菌總數(shù)少一些，可能緣由是用傾注法倒入培育基時，培育基未冷卻至45℃一下，所以高溫殺死了大量細(xì)菌。

4、請回答：干熱滅菌、高壓濕熱滅菌、過濾除菌的原理及適用范圍。

答：1干熱滅菌：通過燒灼或烘烤等方法，使微生物酶、蛋白質(zhì)變性而殺死微生物。干熱滅菌包括：

①烘箱熱空氣法：適用于金屬和玻璃器皿的滅菌，也是唯一可用于油料和粉料物質(zhì)的滅菌方法。

②火焰焚燒法：常使用酒精燈火焰焚燒接種環(huán)、接種針和試管口等經(jīng)焚燒不會損壞的物品。2高壓濕熱滅菌：熱蒸汽對細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)，水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變形，還可以使細(xì)胞膜脂溶解。高壓真氣還可以破壞核酸結(jié)構(gòu)，殺滅那些蛋白質(zhì)外殼變性后仍具有侵染性的病毒。熱蒸汽比空氣穿透力強(qiáng)，能更加有效地殺滅微生物。蒸汽存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w時可放出大量熱量，顧可快速提高滅菌物體的溫度。

①水煮沸法：適用于注射器、解剖用具及家庭餐具的消毒。

②高壓蒸汽鍋法：主要用于各種耐熱耐濕物品的物品，如一般培育基、生理鹽水等各種溶液、工作服及試驗(yàn)器材等。

3過濾除菌：將液體通過某種多孔的材料，使微生物與液體分別。可用于對熱敏感液體的滅菌，如含有酶或維生素的溶液、血清等。還可用于啤酒生產(chǎn)代替巴斯德消毒。

二、實(shí)習(xí)學(xué)習(xí)參觀益力多公司參觀及珠江啤酒集團(tuán)參觀

（一）益力多乳制品制作流程及工藝

原料溶解罐（用熱水將奶粉及糖類溶解成液狀奶）→殺菌機(jī)（殺菌后得到清潔的原料汁）→種菌罐（存儲益力多菌）→培育罐（用益力多菌發(fā)酵，制造發(fā)酵液）→糖漿罐（制造糖漿）→調(diào)和液儲存罐（將糖漿加到發(fā)酵液中制得原料液）→混合機(jī)（將原料液和原料水混合調(diào)配成益力多的味道）→成形機(jī)（制造益力多容器）→灌裝機(jī)（灌裝益力多液）→封蓋機(jī)（封蓋）→收縮包裝機(jī)（5支及50支包裝成形）

（二）微生物與益力多乳制品制作（微生物原理）

乳制品生產(chǎn)過程中利用的微生物是乳酸菌。益力多乳制品主要與干酪乳桿菌代田株（即益力多菌）親密相關(guān)，它利用人們供應(yīng)的底物原料，在相宜的條件下大量生長、繁殖，是一種益生菌。益力多乳制品供應(yīng)的是一種活菌，而不是益力多菌的代謝產(chǎn)物，據(jù)說，在一瓶益力多飲品中就有100億個活性細(xì)菌。益力多菌符合益生菌的7個條件，即：1.能夠耐受胃液、膽汁、以存活的狀態(tài)到達(dá)腸內(nèi)；2.能夠在腸內(nèi)增殖；3.被科學(xué)試驗(yàn)證明能夠改善腸內(nèi)菌群；4.能夠確保平安性；5.原來就是人體腸道菌群的一種；6.存活在食品中并能保持有效的菌數(shù)；7.價廉且簡單處理。產(chǎn)品一般可以改善微生物與酶的平衡或刺激特異性與非特特異性免疫，從而改善腸道菌群構(gòu)成。飲用益力多菌可抑制腸內(nèi)有害菌的增殖，有害菌所產(chǎn)生的各種有害物質(zhì)則相應(yīng)削減。此外，益力多菌產(chǎn)生的乳酸及乙酸能刺激腸道運(yùn)行而改善排便。有討論表明，益力多菌能使體內(nèi)NK細(xì)胞活性化，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，從而提高人體自身對細(xì)胞的功擊和病原體感染的防備力量。

（三）珠江啤酒釀造流程及工藝

麥芽倉（儲存麥芽）→粉碎機(jī)（粉碎麥芽）→糖化鍋（粉碎后的麥芽和肯定量的釀造水混合，麥芽中的蛋白質(zhì)分解成多肽和氨基酸，淀粉分解成麥芽糖、葡萄糖等糖類物質(zhì)的過程）→大米篩選機(jī)→大米粉碎機(jī)（原料與處理）→糊化鍋（大米糊化）→麥芽過濾槽（過濾糊化雜質(zhì)）→煮沸鍋（過濾后的麥汁加入酒花、麥汁澄清劑等輔料，完成煮沸過程，目的是使麥汁達(dá)到肯定濃度，殺死麥汁中全部的酶和致病菌及麥汁中的蛋白質(zhì)絮凝等）→酒花濾除器→回旋沉淀槽（去除麥汁中的熱凝固物，使煮沸后的麥汁清亮透亮?????）→麥汁冷卻器（利用4℃冰水，經(jīng)過薄板換熱器將麥汁冷卻到工藝規(guī)定的溫度）→空氣過濾器→酵母培育及添加罐（培育酵母）→發(fā)酵罐（酵母利用麥汁中碳源和氮源兩大能源物質(zhì)，經(jīng)過有氧呼吸和無氧發(fā)酵，將麥汁中的可發(fā)酵性糖分解成酒精、二氧化碳和其他一系列發(fā)酵副產(chǎn)物的過程）→啤酒添加劑添加罐→緩沖罐硅藻土添加罐→硅藻土過濾罐→硅藻土過濾機(jī)（利用硅藻土對啤酒后期處理）→冷貯存→過濾器→儲酒罐→灌裝→出場

（四）微生物與珠江啤酒釀造（微生物原理）

用于啤酒釀造的微生物為