十二、體內(nèi)哺乳動物骨髓細(xì)胞微核試驗

十二、體內(nèi)哺乳動物骨髓細(xì)胞微核試驗noamanoerw:s1 圍和。用的測。2 規(guī)范性引用文件GB14924 驗飼準(zhǔn)DGuidelinesrgfChemicals（No.481，Adopted:21,July197）3 定義微核（Micronucleus：染色單體或染色體的無著絲點斷片，或因紡錘體受損而丟失的整個染色體，在細(xì)胞分裂后期，仍然遺留在細(xì)胞質(zhì)中。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的包胞核核。4 理凡能使染色體發(fā)生斷。各種類型的骨髓細(xì)胞都可形成微核，但有核細(xì)胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。嗜多染紅細(xì)胞是分裂后期的紅細(xì)胞由幼年發(fā)展為成熟紅細(xì)胞的一個階段，此時紅細(xì)胞的主核已排出，因胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，姬姆薩染色呈灰藍(lán)色，成熟紅細(xì)胞的核糖體已消失，，骨髓中嗜多試。5 試的原則通過適當(dāng)?shù)耐緩绞箘游锝佑|受試物，一定時間后處死動物，取出骨髓，制備涂片，經(jīng)固定、染色，在顯微鏡下計數(shù)含微核的嗜多染紅細(xì)胞。6 儀器器械顯剖血射載片（2×5、。7 劑1 （）于5溫浴溫n活的血保冰箱冷室里。72 姆Ga液：Ga染料 38g甲醇7mL甘油2mL125配制：將染料和少，至375mL和油合，置37溫h周。3 L磷酸鹽緩沖液pH7.）成分：氫NaPO4H2O）磷鉀（2PO4）加蒸至配制：將上述兩種成分溶于蒸餾水中。以H驗H。4 ia應(yīng)用液

107g1.84g100mL取一份Giemsa與6份1/5oL鹽合臨。8 實動物和養(yǎng)環(huán)境為25g~30g。也可選用成年大鼠，體重為150g~200g。及符定。9 劑量分組一般取物D0的1/1500量關(guān)曲。的D0于g體重時取5g/kg為設(shè)3個劑個劑量組10作為4mg體重。根據(jù)試的性（溶和/脂性確試所的，常水植物淀。10 毒徑方式染毒途徑視實驗?zāi)康亩ǎㄗh采用經(jīng)口灌胃方式。采用h兩次受試物隔2h后h取。11法1 骨髓取，髓。2 片將骨髓液滴在載玻片一端的小牛血清液滴里，仔細(xì)混勻。一般來講，兩節(jié)胸骨髓液涂一張片子為宜。然后，約2cm~3cm。在空氣中晾干。若立即染色，上。3 定將干燥的涂片放入甲醇液中固定5n不。4 色將固入Gia應(yīng)用色10min~15min，然后立即用1/15mol/L酸緩液洗。5 片用濾紙及時擦干染片背面的水滴，再用雙層濾紙輕輕按壓染片，以吸附染片上殘留的水126盡明n光脂蓋寫。6 數(shù)先用低倍鏡，后用高倍鏡粗略檢查，選擇細(xì)胞分布均勻，細(xì)胞無損，著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，再在油浸鏡下計數(shù)。雖然不計數(shù)含微核的有核細(xì)胞，但需用有核細(xì)胞形態(tài)染色完好做好判斷的。本法觀察含微核的嗜多染紅細(xì)胞。嗜多染紅細(xì)胞呈灰藍(lán)色，成熟紅細(xì)胞呈淡桔紅色。微呈滑核色。每只動物至數(shù)100個分率（‰）表示之。若一個嗜多染紅細(xì)胞中出現(xiàn)兩個或兩個以上微核，仍按一個有微核細(xì)胞計數(shù)。12 處結(jié)斷1處理報告各組微核細(xì)胞率的均法如Poinn分布u比溶。2 果定據(jù)ODGuidelinesrgfs的準(zhǔn)相比，統(tǒng)計學(xué)上有顯應(yīng)。13 驗告：（1）化；（2）動物種屬和品系、；（3）實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、；（4）劑量徑；（5）試驗方步學(xué)定；（6）結(jié)果：以列表方式