動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施第一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日第一部分：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施的基本過程一、選擇研究題目1、廣義的選擇2、狹義的選擇3、政府法規(guī)需要正確選題應(yīng)遵守的幾個(gè)基本原則；1、科學(xué)性：是指選題應(yīng)建立在前人的科學(xué)理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，而不是毫無根據(jù)的胡思亂想。2、目的性：指選題應(yīng)具有明確的理論意義和實(shí)踐意義，要能解決具體問題。3、創(chuàng)造性：指選題應(yīng)具有自己獨(dú)到之處，或提出新規(guī)律、新見解、新技術(shù)、新方法，或是對(duì)舊有的規(guī)律、技術(shù)、方法有所修改、補(bǔ)充。4、可行性：是指選題應(yīng)切合研究者的學(xué)術(shù)水平、技術(shù)水平和實(shí)驗(yàn)條件，還要結(jié)合研究者的工作基礎(chǔ)，使實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌麑?shí)施。第二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日二、提出假說假說提出的一般過程：1、觀察和記錄所有相關(guān)的信息（包括研究者已開展的初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果）2、分析和歸類這些信息3、在這些信息的基礎(chǔ)上提出假說假說是預(yù)先假定的答案或解釋，亦既是實(shí)驗(yàn)的預(yù)期結(jié)果。對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究來說，假說是十分必要的。假說是實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)的前提，如果沒有假說，實(shí)驗(yàn)和觀察就失去目標(biāo)。假說關(guān)系著實(shí)驗(yàn)研究的目的性、計(jì)劃性和預(yù)見性。對(duì)假說既應(yīng)努力加以驗(yàn)證，又應(yīng)適時(shí)加以拋棄，重新建立新的假說，再加以驗(yàn)證。這樣才有可能使正確的假說上升為結(jié)論、原理和學(xué)說。研究者開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)在熟悉有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物理論知識(shí)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能的基礎(chǔ)上，積極進(jìn)行邏輯思維，結(jié)合實(shí)際條件，提出創(chuàng)新性課題和大膽的假說。第三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日三、選擇研究材料主要是用于制作實(shí)驗(yàn)需要的動(dòng)物模型常規(guī)品種（系）特殊品種（系）：疾病模型動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因品系等高峰期特殊規(guī)格：F1、乳鼠等外購：外地、外國、非商業(yè)性單位等第四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日四、準(zhǔn)備研究方案1、示意性的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，包含了實(shí)驗(yàn)過程中的各種處理2、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作過程的解說和測(cè)量方法的描述3、簡(jiǎn)述可能對(duì)動(dòng)物造成的不適4、應(yīng)用動(dòng)物的例數(shù)和所用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法都應(yīng)當(dāng)加以說明5、簡(jiǎn)述實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備情況，包括準(zhǔn)備的方法、過程和分析的資料6、實(shí)驗(yàn)中的一些實(shí)際情況：人員需求、實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)人姓名、所需經(jīng)費(fèi)第五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)方法的選定實(shí)驗(yàn)方法按學(xué)科可分為生理學(xué)方法、生物化學(xué)方法、生物物理方法、免疫學(xué)方法等；按性質(zhì)可分為形態(tài)學(xué)方法、機(jī)能學(xué)方法按范圍可分為整體綜合方法和局部分析方法按水平分：整體水平、器官水平、細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平、分子水平和量子水平等。無論選用何種實(shí)驗(yàn)方法，均應(yīng)保證以下幾點(diǎn):可靠性：即切實(shí)可行，穩(wěn)定可靠，是大家公認(rèn)的方法，也即是經(jīng)典方法。優(yōu)越性：指實(shí)驗(yàn)方法既具先進(jìn)的一面，又便于與其它實(shí)驗(yàn)方法相互配合，故也稱先進(jìn)性和協(xié)同性。創(chuàng)造性：即實(shí)驗(yàn)方法的創(chuàng)新和改良。第六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例：外源基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞體內(nèi)移植研究測(cè)定方法：整體水平：測(cè)定體液的生理生化指標(biāo)細(xì)胞和亞細(xì)胞水平：光鏡和電鏡觀察RNA水平：原位雜交法測(cè)定mRNART-PCR法半定量測(cè)定RNA表達(dá)量Northern法定量測(cè)定。蛋白水平：免疫組化與生物體視學(xué)結(jié)合Westernblotting定量測(cè)定Elisa法測(cè)蛋白活性第七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日五、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的條件準(zhǔn)備主要內(nèi)容：準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)儀器、藥品、試劑和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備要求是盡可能使實(shí)驗(yàn)手段和實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化。實(shí)驗(yàn)儀器必須校準(zhǔn)，必須事先熟悉儀器使用方法。a、還要和相關(guān)科室聯(lián)系，達(dá)到部分儀器共享使用的目的。同時(shí)注意某些學(xué)科不太常用的儀器設(shè)備是否存在，是否會(huì)影響實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)；b、測(cè)定動(dòng)物生理、生化、生物電和器官功能指標(biāo)的各種分析儀器和描記儀，如半導(dǎo)體測(cè)溫計(jì)、動(dòng)物血壓表、多導(dǎo)生理記錄儀等設(shè)備。藥品的純度應(yīng)有明確要求，試劑的配制必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，尤其是麻醉劑的使用。器械準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所消毒與器具配套等也要落實(shí)，特殊器械是否準(zhǔn)備：如顯微外科或眼科手術(shù)器械。第八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備購入或領(lǐng)取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物前，應(yīng)進(jìn)行各項(xiàng)計(jì)劃的核實(shí)，檢查各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作，如動(dòng)物籠盒數(shù)量、飼養(yǎng)室衛(wèi)生及消毒情況。購入或領(lǐng)取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，應(yīng)向供應(yīng)部門索取所用動(dòng)物的遺傳背景和微生物控制質(zhì)量資料、以及動(dòng)物品系、年齡、體重、胎次等資料。根據(jù)實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間長短的需要，同時(shí)購入或領(lǐng)取相應(yīng)數(shù)量的飼料和墊料。若是從外地購入動(dòng)物需長途運(yùn)輸時(shí)，還應(yīng)考慮到途中各種因素對(duì)動(dòng)物的影響，如運(yùn)輸環(huán)境的溫度，濕度、飲食。尤其注意途中污染和窒息死亡以及應(yīng)激反應(yīng)等問題。應(yīng)隔離檢疫并提供3周左右的動(dòng)物適應(yīng)期。若是購入或領(lǐng)取清潔級(jí)以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)采用帶有空氣過濾膜的無菌運(yùn)輸罐或帶有濾帽的籠盒運(yùn)輸，嚴(yán)格檢查其密封狀況。術(shù)前準(zhǔn)備：術(shù)前3天單籠飼養(yǎng)，術(shù)前8－24小時(shí)禁食、禁水。第九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日六、預(yù)實(shí)驗(yàn)是在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前對(duì)正式實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)。目的在于檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否完善，實(shí)驗(yàn)方法和步驟是否切實(shí)可行，測(cè)試指標(biāo)是否穩(wěn)定可靠，初步了解實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果的距離，從而為正式實(shí)驗(yàn)提供補(bǔ)充、修正的意見和經(jīng)驗(yàn)，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必不可少的重要環(huán)節(jié)。預(yù)實(shí)驗(yàn)可用少量動(dòng)物進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)方法和觀測(cè)指標(biāo)應(yīng)該和正式實(shí)驗(yàn)一樣，但預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不能歸入正式實(shí)驗(yàn)的最后結(jié)果中一同分析。

預(yù)實(shí)驗(yàn)一樣要得到倫理委員會(huì)的審批才可實(shí)施。第十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日七、實(shí)驗(yàn)的詳盡方案和實(shí)施1、需要準(zhǔn)備一個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的日程表，寫上簡(jiǎn)單明了的實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)該描述清楚，注明對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系的選擇，動(dòng)物的營養(yǎng)、飼喂方式和時(shí)間的選擇，樣本的采集和安樂死的方式。2、詳細(xì)的草案還應(yīng)該包括實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)技術(shù)等幾個(gè)方面的問題。實(shí)驗(yàn)技術(shù)如給藥途徑和方法、術(shù)式、麻醉方法和深度、復(fù)蘇和搶救措施等。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)收集所有的實(shí)驗(yàn)資料，進(jìn)行各種后續(xù)指標(biāo)的檢測(cè)，包括運(yùn)用數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)的方法分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。4、分析結(jié)果是否證明了原來的假設(shè)。第十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的采血方法尾尖采血：常用于大小鼠，小量采血?？梢远啻尾裳Ｑ劭綮o脈叢采血：常用于大小鼠、沙鼠的采血。摘眼球采血:血量較多，常用于大小鼠、沙鼠腹主動(dòng)脈采血：常用于大小鼠、沙鼠，心臟采血：兔耳緣靜脈或耳中動(dòng)脈、頸動(dòng)脈采血犬：在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血猴：可在指尖、足跟、后肢皮下靜脈、頸靜脈采血豬：小型豬為耳大靜脈、后肢靜脈第十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種采血方法的采血量一、小、大鼠1、剪尾采血此法每鼠可采10次以上。小鼠每次0.1ml。大鼠每次0.4ml。2、眼眶后靜脈叢采血小鼠每次0.2-0.3ml大鼠每次0.5ml2、股動(dòng)脈采血小鼠每次0.5ml小鼠每次0.5ml二、豚鼠耳緣切口采血：0.5ml。心臟采血：足背正中靜脈采血：三、家兔耳緣靜脈采血：5-10ml。耳中動(dòng)脈采血：15ml。心臟采血：20-25ml。四、犬前肢皮下頭靜脈和后肢外側(cè)小隱靜脈采血：10-20ml。頸靜脈采血：心臟采血：第十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的

最大安全采血量與最小致死采血量動(dòng)物種類最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.1

0.3大鼠

1

2豚鼠

5

10家兔

10

40

狗

50

300

猴

15

60第十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日采集體液胸水的采集腹水的采集消化液的采集尿液的采集骨髓液的采集動(dòng)物精液的采集乳汁的采集第十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日尿液的采集代謝籠法：此法較常用于大、小鼠：成熟小鼠尿量1-3ml/24h，大鼠為55-75ml/24h導(dǎo)尿法：常用于雄兔、犬等動(dòng)物，要輕度麻醉，可以采到無污染的尿液。壓迫膀胱法：此法適用于兔、貓、犬等大動(dòng)物。輸尿管插管法膀胱插管法膀胱穿刺法剖腹采尿法反射排尿法：適用于小鼠第十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日病理取材基本要求病理檢查應(yīng)分層次進(jìn)行，先進(jìn)行一般外觀觀察，然后剖檢觀察，再進(jìn)行光鏡詳細(xì)檢查。通常選擇正常與病變交界處組織，即包括病變本身及病變周圍組織。對(duì)照組動(dòng)物相同器官取材時(shí)，選材部位應(yīng)盡量一致。肉眼看不到明顯病變時(shí)，各試驗(yàn)組選取標(biāo)本位置應(yīng)一致。所選組織應(yīng)包括臟器全部層次結(jié)構(gòu)或重要結(jié)構(gòu)，如腎應(yīng)包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。體積大和分葉的器官，應(yīng)視不同組織選取多個(gè)部位，小器官可整體取材并固定，如淋巴結(jié)、扁桃體、甲狀腺等。胃腸標(biāo)本應(yīng)將內(nèi)容物沖洗掉，以免內(nèi)容物影響組織的固定，產(chǎn)生自溶。所取材料應(yīng)盡量保持肉眼標(biāo)本的完整性，不宜過厚或過薄，一般厚約3-5mm，大小為1.5-2cm。切取組織時(shí)不要擠壓，使用鋒利刀具，少用剪刀，勿選用被器械鉗壓過的部位。標(biāo)本取材要熟練，盡可能快的完成整個(gè)過程，特別是易自溶的組織，如腸道、腦、腺體等。剖檢記錄應(yīng)客觀、詳細(xì)，用形象描述而不能用診斷的病名來代替。同一實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物應(yīng)交叉剖檢，嚴(yán)格統(tǒng)一各種條件和操作，盡量避免各種可能的干擾因素。第十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日“安死術(shù)”的概念：即安樂死術(shù)，是指以人道的方法處死動(dòng)物過程。在處死動(dòng)物的過程中盡量減少動(dòng)物的驚慌、焦慮，使其安靜地、無痛苦地死亡。安死術(shù)的常用方法頸椎脫位法：是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的頸椎脫臼，脊髓與腦髓斷開，動(dòng)物無痛苦死亡，大、小鼠最常用。空氣栓塞法：處死兔、貓、犬等較大動(dòng)物常用此法，兔、貓為20-40ml，犬為80-150ml.放血法：一次性放出動(dòng)物大量血液致使死亡，動(dòng)物安靜，痛苦少，臟器無損傷，采集病理切片很有利?？捎糜谛∈蟆⒋笫?、兔、犬等。斷頭法：剪刀剪頭，大量失血死亡。臟器含血量少，適于采樣。藥物法：藥物吸入：吸入有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑。適用于小鼠、豚鼠等小動(dòng)物。藥物有CO2、CO、乙醚、氯仿等。藥物注射：藥物注射致死，適用于豚鼠、兔、犬等較大動(dòng)物。藥物有氯化鉀、巴比妥類麻醉劑等。第十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日采用安死術(shù)必須符合的標(biāo)準(zhǔn)死時(shí)無驚恐、疼痛表現(xiàn)。使其在最短時(shí)間內(nèi)失去意識(shí)迅速死亡。方法可靠且可重復(fù)。對(duì)操作人員安全。采用的方法要與研究要求和目的一致。對(duì)觀察者和操作者的情緒影響最小。對(duì)環(huán)境的影響最小。需要的機(jī)械設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、易操作。處死動(dòng)物地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離并與動(dòng)物房隔開。第十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的給藥方法和途徑一、經(jīng)口給藥自動(dòng)口服給藥：灌胃給藥:二、注射給藥：皮下注射給藥皮內(nèi)注射肌肉注射給藥靜脈注射給藥腹腔注射給藥腦內(nèi)注射：椎管內(nèi)注射：關(guān)節(jié)內(nèi)注射：淋巴囊注射：蛙類常采用此法三、其他途徑給藥（吸入給藥等）第二十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物劑量的換算人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一藥物的耐受性，動(dòng)物比人大，即單位體重的用藥量比人要大。一般可按下列比例換算，每單位體重人的藥量為1，則小鼠、大鼠為25-50，兔、豚鼠為15-20，狗、貓為5-10。第二十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日常用藥物的最大給藥量動(dòng)物項(xiàng)

目

灌

胃

皮下注射

肌肉注射

腹腔注射

靜脈注射

大鼠最大給藥量2mL

lmL0.4mL2mL4mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)

6號(hào)

6號(hào)

6號(hào)

5號(hào)小鼠最大給藥量lmL0.4mL0.4mL

lmL0.8mL

使用針頭9號(hào)(鈍頭)5l/2號(hào)51/2號(hào)51/2號(hào)

4號(hào)豚鼠最大給藥量3mL

LmL0.5mL

4mL

5mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)61/2號(hào)61/2號(hào)

7號(hào)

5號(hào)家兔最大給藥量20mL

2mL

2mL

5mL

10mL

使用針頭10號(hào)導(dǎo)尿管61/2號(hào)61/2號(hào)

7號(hào)

6號(hào)第二十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通常通過吸入和注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）途徑。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）常用麻醉藥的劑量及注射途徑種類戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV豬<45kg>45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM第二十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日麻醉注意事項(xiàng)

麻醉前應(yīng)禁食8h以上麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重注意麻醉劑量麻醉過程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況注意保溫靜脈注射時(shí)必須緩慢，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平第二十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日八、評(píng)估和報(bào)告1、標(biāo)題和實(shí)驗(yàn)者：包括所有參與實(shí)驗(yàn)研究的人員。2、摘要：簡(jiǎn)要介紹實(shí)驗(yàn)研究的目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)論。3、導(dǎo)論：簡(jiǎn)單地介紹相關(guān)的背景知識(shí)、國內(nèi)外類似研究現(xiàn)狀，提出可能的假設(shè)。如果假設(shè)不成立的話陳述一下預(yù)期的結(jié)果。4、材料和方法：5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：通過圖形、表格和文字等將實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示出來，文字要簡(jiǎn)介扼要。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)論：簡(jiǎn)單扼要的得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論，說明假設(shè)被證明的情況和取得的科研成果，為將來的研究提出好的建議。7、致謝8、參考文獻(xiàn)第二十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：遺傳背景、品種品系（近交系、封閉群或是其它特殊遺傳質(zhì)量控制）和正確的命名、模型的制作、動(dòng)物的年齡、性別、體重、微生物控制等級(jí)等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)設(shè)施的類型、溫度、濕度、氣流、光照、籠具類型、飼養(yǎng)密度、墊料、運(yùn)輸和喂養(yǎng)的時(shí)間等。營養(yǎng)：飼料（包括廠商、成分、配方、滅菌、質(zhì)量控制方案等）、采食情況（自由采食、限制飲食還是二者兼有）、飲水情況（自由飲水、自動(dòng)化供應(yīng)、瓶裝、消毒、水質(zhì)）。實(shí)驗(yàn)程序：化學(xué)物質(zhì)、藥品（劑量、廠商、純度、添加劑）、實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間、生理狀況、給藥途徑、樣本的采集、麻醉方法、安樂死方法、標(biāo)本的采集處理和組織器官的保存等。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)計(jì)方法、評(píng)估方法和統(tǒng)計(jì)方法等。如果是在國外還應(yīng)該注明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)方案的審批情況。第二十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日BALB/c（nu-nu）裸鼠20只，18-22g雌雄各半由南方醫(yī)科大學(xué)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供動(dòng)物質(zhì)量許可證：廣實(shí)動(dòng)管第01號(hào)實(shí)驗(yàn)鼠在SPF條件下飼養(yǎng)，飼喂全價(jià)小鼠顆粒飼料，自由采食和飲水實(shí)驗(yàn)方法：*****。實(shí)驗(yàn)第7天，頸椎脫臼處死動(dòng)物，***。動(dòng)物名稱和遺傳背景動(dòng)物數(shù)量和體重性別動(dòng)物來源動(dòng)物質(zhì)量資料實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)條件安死術(shù)第二十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日第二部分：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)組織和管理概論

使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行生物醫(yī)學(xué)研究計(jì)劃不是一個(gè)人能夠?qū)嵤┑?，是一個(gè)涉及很多人、復(fù)雜的研究過程。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究需要各種人員進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆止ぁ⑴浜?。研究人員設(shè)計(jì)、組織和實(shí)施動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和經(jīng)費(fèi)管理，撰寫研究報(bào)告；有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資格的技術(shù)員按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)操作；動(dòng)物飼養(yǎng)員日常飼喂、管理；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)檢查實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的福利是否得到保障、實(shí)驗(yàn)方法是否人道等。第二十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日一、關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的法律、法規(guī)和相關(guān)要求1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案是否符合國家法律？在很多國家，不是所有關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方案都可以實(shí)施。2、所利用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究機(jī)構(gòu)是否是政府部門認(rèn)可的有權(quán)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的機(jī)構(gòu)。3、研究人員進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施的資格。4、是否有充分的理由解釋使用動(dòng)物進(jìn)行研究的必要性。5、是否有足夠的專業(yè)人員（飼養(yǎng)員、技術(shù)員等）來保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來源是否合法，是否符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各種標(biāo)準(zhǔn)化控制條件。7、是否與當(dāng)?shù)氐膭?dòng)物福利機(jī)構(gòu)有了溝通。8、研究計(jì)劃的進(jìn)行是否得到實(shí)驗(yàn)管理委員會(huì)的批準(zhǔn)。9、是否有完整的實(shí)驗(yàn)記錄。第二十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)（IACUC）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利和倫理管理委員會(huì)第三十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響因素的控制要盡可能滿足下列條件，使實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物的變異降到最小。一、動(dòng)物因素種屬、品種、品系、年齡、體重及性別、生理狀態(tài)、健康狀況二、環(huán)境因素溫、濕度、氣流、潔凈度、光照、噪聲、營養(yǎng)、飼喂、環(huán)境微生物

三、技術(shù)因素實(shí)驗(yàn)季節(jié)、晝夜過程、麻醉深度、手術(shù)技巧、用藥途徑和方法等第三十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日三、相關(guān)規(guī)范、規(guī)程和認(rèn)證

優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范GLP（GoodLaboratoryPractice,GLP)是國際上通用的具有良好的質(zhì)量管理規(guī)范的簡(jiǎn)稱，是藥品安全性評(píng)價(jià)過程中就組織管理、項(xiàng)目實(shí)施、記錄報(bào)告、資料保存等方面所制定的法規(guī)，其目的在于保證藥品安全性評(píng)價(jià)的完整性、可靠性和重復(fù)性。盡管GLP最初目標(biāo)是為了保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在藥物毒性研究中的準(zhǔn)確性，將GLP規(guī)則推廣到其它涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究領(lǐng)域中，有利于這些研究項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)化，增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。當(dāng)然，GLP規(guī)則并不能適合所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，因?yàn)槊恳活愋偷膭?dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)化都有其自身特殊的意義。

藥物安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)包括：?jiǎn)未谓o藥毒性試驗(yàn)、反復(fù)給藥毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、致癌試驗(yàn)、局部毒性試驗(yàn)、免疫原性試驗(yàn)、安全性藥理試驗(yàn)、依賴性試驗(yàn)、毒代動(dòng)學(xué)試驗(yàn)等。第三十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP（StandardOperatingProcedure,SOP）:為有效地實(shí)施和完成某一試驗(yàn)研究中每項(xiàng)工作所擬定的標(biāo)準(zhǔn)和詳細(xì)的書面規(guī)程。針對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究主要的SOP規(guī)范有：對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)、衛(wèi)生、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、觀測(cè)方法、動(dòng)物檢查、數(shù)據(jù)收集和處理等都要有標(biāo)準(zhǔn)的SOP操作規(guī)程。動(dòng)物分組與識(shí)別的SOP、飼養(yǎng)管理SOP、觀察記錄及實(shí)驗(yàn)操作的SOP、動(dòng)物尸檢以及組織病理學(xué)檢查處理的SOP、動(dòng)物尸體及其他廢棄物處理的SOP、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集、編號(hào)和檢驗(yàn)的SOP、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理的SOP、資料檔案管理SOP等第三十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日AAALAC認(rèn)證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理評(píng)估和認(rèn)證協(xié)會(huì)（AssociationforAssessmentandAccreditationofLaboratoryAnimalCare,AAALAC）:非贏利的私人組織，權(quán)威的評(píng)估和認(rèn)證動(dòng)物飼養(yǎng)和使用標(biāo)準(zhǔn)的國際機(jī)構(gòu)，它要求人道、科學(xué)地對(duì)待動(dòng)物。FDA和歐盟強(qiáng)力推薦在有AAALAC認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室開展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。世界500強(qiáng)醫(yī)藥巨頭聯(lián)合申明，他們醫(yī)藥產(chǎn)品的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都將在AAALAC認(rèn)證單位完成。AAALAC認(rèn)證在世界范圍內(nèi)享有很高的聲譽(yù)，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域樹立了高標(biāo)準(zhǔn)的楷模。（目前世界上已有29個(gè)國家的770多個(gè)機(jī)構(gòu)通過了AAALAC認(rèn)證。中國有12個(gè)機(jī)構(gòu)通過了AAALAC認(rèn)證，廣東地區(qū)廣州醫(yī)工院通過Beagle犬認(rèn)證）第三十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日廣西食蟹猴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研發(fā)基地廣西：南寧國家高新區(qū)投資建成了“廣西南寧國際靈長類動(dòng)物模型與醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化示范基地”，是國內(nèi)第一家通過國際資質(zhì)認(rèn)證的靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室第三十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)集中化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)室：進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、采購、飼養(yǎng)、檢疫。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物旅館：除了第一類服務(wù)范圍外，還可以安置、喂養(yǎng)不常用動(dòng)物或需要特殊安置的動(dòng)物。如羊、犬、靈長類等。但是如果進(jìn)行外科手術(shù)、X射線、胃鏡等檢測(cè)時(shí)還需要更換地方進(jìn)行相關(guān)項(xiàng)目檢查。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)集中化的最高形式，基本可以滿足一站式服務(wù)。第三十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日我校的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施第三十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日南方醫(yī)科大學(xué)東莞松山湖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技園第三十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日東莞松山湖科技產(chǎn)業(yè)園區(qū)DongguanSongshanLakeSci.Lake第三十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日五、實(shí)驗(yàn)的時(shí)間安排1、必須留出足夠的時(shí)間購買動(dòng)物。2、必須留出必要的檢疫期。3、充分估計(jì)到動(dòng)物不可預(yù)料的死亡或是自然死亡可能給實(shí)驗(yàn)帶來的影響。4、必須留出足夠的時(shí)間來學(xué)習(xí)和掌握新的技術(shù)。5、必須留出足夠的時(shí)間來準(zhǔn)備特殊的動(dòng)物飼料。6、進(jìn)行必要的預(yù)實(shí)驗(yàn)。7、得到管理部門的許可。8、落實(shí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需的后勤資源保障：如動(dòng)物房、飼養(yǎng)人員、實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)人員、試劑購買、所需配備的特殊設(shè)備（層流架、隔離器等）第四十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日六、與他人協(xié)作研究組人員要保持溝通，及時(shí)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，對(duì)下一步工作進(jìn)行預(yù)計(jì)。出現(xiàn)問題后商量如何調(diào)整實(shí)驗(yàn)進(jìn)程等等。要保證有一個(gè)和諧的研究團(tuán)體，強(qiáng)調(diào)各個(gè)環(huán)節(jié)的協(xié)作性。西藏小型豬器官移植和轉(zhuǎn)基因克隆研究第四十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日七、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的安全性1、正視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)環(huán)境對(duì)動(dòng)物的影響，嚴(yán)格控制各種影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的動(dòng)物疾病，尤其是動(dòng)物傳染病，如小鼠仙臺(tái)病毒、兔腦炎病毒等。2、嚴(yán)格控制各類人獸共患病的發(fā)生，尤其是使用野生動(dòng)物（如靈長類動(dòng)物）時(shí)，由于高等級(jí)動(dòng)物和人類的親緣性更近，其疾病的易感性更強(qiáng)，要特別注意安全保護(hù)。如出血熱、狂犬病、傳染性肝炎、猴皰疹病毒、布魯氏菌病等。3、感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：專門的感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施，如P3實(shí)驗(yàn)室（生物安全防護(hù)3級(jí)實(shí)驗(yàn)室）。第四十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原分類A:

人畜共患病B:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致死病原C:

非致死但可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生疾病或生理功能改變D:條件致病菌E:非病原但可為反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制的指標(biāo)第四十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日第三部分：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的概念二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)“三要素”1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象(subject)2、實(shí)驗(yàn)因素(treatmentfactor)3、實(shí)驗(yàn)效應(yīng)(experimentaleffect)降壓藥高血壓大鼠血壓值處理因素受試對(duì)象實(shí)驗(yàn)效應(yīng)其他因素其他效應(yīng)第四十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日1）

實(shí)驗(yàn)對(duì)象。實(shí)驗(yàn)所用的材料即為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,或稱為受試對(duì)象。實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇的合適與否直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)實(shí)施的難度，以及別人對(duì)實(shí)驗(yàn)新穎性和創(chuàng)新性的評(píng)價(jià)。一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中所需實(shí)驗(yàn)材料的總數(shù)稱為樣本含量。

2）

實(shí)驗(yàn)因素。所有影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的條件都稱為影響因素，實(shí)驗(yàn)研究的目的不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)的要求也不同。影響因素有客觀與主觀，主要與次要因素之分。處理因素或受試因素：根據(jù)研究目確定的欲施加或欲觀察的、并能引起受試對(duì)象直接或間接效應(yīng)的因素，簡(jiǎn)稱處理或因素(factor)。是根據(jù)研究目的確定的主要因素，處理因素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)始終要保持不變非處理因素：對(duì)評(píng)價(jià)處理因素作用有一定干擾，但研究者并不想通過實(shí)驗(yàn)考察其作用大小的因素，常常又稱混雜因素(confounder)。第四十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日確定處理因素時(shí)要注意的幾個(gè)問題：要抓住實(shí)驗(yàn)中的主要因素。要在眾多的因素與水平中抓住主要的、帶關(guān)鍵性的某幾個(gè)因素。例：病毒培養(yǎng)方法改進(jìn)實(shí)驗(yàn)要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定處理因素和非處理因素，一旦確定就不能隨意改動(dòng)。例：冷水浸泡實(shí)驗(yàn)處理因素必須標(biāo)準(zhǔn)化：保證處理因素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的過程中始終如一，保持不變。第四十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日3）

實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)因素取不同水平時(shí)在實(shí)驗(yàn)單位上所產(chǎn)生的反應(yīng)稱為實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)效應(yīng)是反映實(shí)驗(yàn)因素作用強(qiáng)弱的標(biāo)志，它必須通過具體的指標(biāo)來體現(xiàn)。所選定的指標(biāo)，應(yīng)符合下列基本條件：

特異性：指標(biāo)應(yīng)特地反映所觀察事物的本質(zhì)，即能特異地反映某一特定現(xiàn)象，不致與其它現(xiàn)象相混淆?？陀^性：最好選用可用具體數(shù)值或圖形表達(dá)的指標(biāo)（如心電圖、化驗(yàn)檢查等），客觀指標(biāo)是測(cè)量和檢驗(yàn)的結(jié)果，是借助儀器來回答的；而主觀指標(biāo)（如一些定性指標(biāo)）是實(shí)驗(yàn)者自己判斷的，易受主觀因素的影響而造成較大誤差。重復(fù)性：重復(fù)性高的指標(biāo)一般表示無偏性或偏性小、誤差小，能較真實(shí)的反映實(shí)際情況。不選用重現(xiàn)性小的指標(biāo)。

第四十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日

靈敏性；指標(biāo)測(cè)量的技術(shù)方法或儀器靈敏度十分重要。該測(cè)出的變化測(cè)不出，就會(huì)得出“假陰性結(jié)果”，儀器不精密，所得陽性數(shù)值則不真實(shí)。

技術(shù)和設(shè)備的可能性：盡量選用既靈敏客觀，又切合本單位和研究技術(shù)和設(shè)備實(shí)際的指標(biāo)。

指標(biāo)選定必須有根據(jù)；現(xiàn)成（定型）指標(biāo)必須有文獻(xiàn)依據(jù)，自己創(chuàng)立的指標(biāo)必須經(jīng)過專門鑒定。對(duì)一些半客觀（比如讀pH試紙上的數(shù)值）或主觀指標(biāo)的判斷上，一定要事先規(guī)定讀取數(shù)值的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，只有這樣才能準(zhǔn)確地分析自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從而也大大提高了自己實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。第四十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例：慢性酒精性肝損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：過氧化脂質(zhì)反應(yīng)的相關(guān)檢測(cè)：超氧化物歧化酶SOD丙二醛MDA還原型和氧化型谷胱甘肽(GSH)脂質(zhì)過氧化物L(fēng)PO甘油三酯TG肝功能指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷草轉(zhuǎn)氨酶其它可選指標(biāo)：琥珀酸脫氫酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶等酶系活性；總蛋白、總膽固醇等血清生化指標(biāo)；IL-8、TNF等炎性因子。第四十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則

實(shí)驗(yàn)研究主要是通過對(duì)樣本的研究而得出結(jié)論。要將樣本的結(jié)論外推到總體，必須盡量使樣本能夠真實(shí)地代表總體。但是，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種系和個(gè)體差異、實(shí)驗(yàn)環(huán)境差異、儀器的穩(wěn)定性、藥品的純度、樣本的大小等因素都可能產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，影響樣本結(jié)果的代表性。為避免或縮小誤差，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)必須注意誤差控制。為此，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循如下原則：對(duì)照的原則隨機(jī)化原則重復(fù)的原則一致性原則彈性原則最經(jīng)濟(jì)原則第五十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日1、對(duì)照(control)：

對(duì)照的意義在于它可以使處理因素和非處理因素的差異有一個(gè)科學(xué)的對(duì)比。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的非處理因素相同，非處理因素的影響得到抵消，使處理因素的效應(yīng)得以顯露。處理組處理因素+非處理因素處理效應(yīng)+非處理效應(yīng)對(duì)照組

(無)非處理因素(無)非處理效應(yīng)比較結(jié)果處理因素處理效應(yīng) 排除“非處理因素”的影響，從而襯托出“處理因素”的作用。第五十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日對(duì)照組設(shè)置的要求：(1)對(duì)等：除處理因素外，對(duì)照組具備與實(shí)驗(yàn)組對(duì)等的一切非處理因素，具有高度的可比性。(2)同步：對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組設(shè)立之后，在整個(gè)研究進(jìn)程中始終處于同一空間和同一時(shí)間。(3)專設(shè)：任何一個(gè)對(duì)照組都是為相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)組專門設(shè)立的。不得借用文獻(xiàn)上的記載或以往的結(jié)果或其它研究的資料作為本研究之對(duì)照。第五十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日對(duì)照的種類：1、組間對(duì)照空白對(duì)照安慰劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照2、自身對(duì)照第五十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日空白對(duì)照對(duì)照組不施加任何處理因素。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行，但容易引起心理差異，從而影響實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的測(cè)定。只有在處理因素很強(qiáng)，非處理因素很弱的情況下使用。第五十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日安慰劑對(duì)照安慰劑：無藥理作用，其外觀如劑型、大小、顏色、重量、氣味及口味等與試驗(yàn)藥物一致,不為受試動(dòng)物所識(shí)別。例如：以安慰劑為對(duì)照，研究使用艾拉莫德片對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療效果。目的：克服研究者、受試對(duì)象、評(píng)價(jià)者等由于心理因素所形成的偏倚；還可消除疾病自然進(jìn)程的影響。第五十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照對(duì)照組不施加處理因素，但施加某種與處理因素相同的實(shí)驗(yàn)條件。包括操作技術(shù)、被試因素溶媒或其他載體等。凡對(duì)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)產(chǎn)生影響的實(shí)驗(yàn)條件宜采用此法。例如：觀察賴氨酸對(duì)幼年動(dòng)物發(fā)育的影響，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物飼喂含賴氨酸的顆粒飼料，對(duì)照組動(dòng)物飼喂不含賴氨酸的顆粒飼料。含賴氨酸顆粒飼料+非處理因素→賴氨酸效應(yīng)

+顆粒飼料效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)

顆粒飼料+非處理因素→顆粒飼料效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)第五十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照對(duì)照：用現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法或常規(guī)方法作對(duì)照，如藥理學(xué)研究中，用已知的有效藥物、有效療法或公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)療法作對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)室研究中常用于某種新檢驗(yàn)方法是否能代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究。第五十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日自身對(duì)照在同一個(gè)體身上觀察實(shí)驗(yàn)處理前后某種指標(biāo)的變化，即把實(shí)驗(yàn)處理前的觀察指標(biāo)作為實(shí)驗(yàn)處理后同一指標(biāo)變化的對(duì)照，可有效減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)處理反應(yīng)的影響。例如：機(jī)體對(duì)稱部位自身對(duì)照：研究某治療燒傷新藥的療效，就可選用有對(duì)稱部位被燒傷(如雙前肢或雙后肢等)的受試對(duì)象，一部位用燒傷新藥，另一部位用其它公認(rèn)有效藥物第五十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2、隨機(jī)化(randomization)：除了處理因素外，其它所有可能產(chǎn)生混雜效應(yīng)的非處理因素在各組中（對(duì)照和實(shí)驗(yàn)組）盡可能保持一致，保證和提高各組的均衡性，也是資料統(tǒng)計(jì)分析時(shí)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷的前提。抽樣隨機(jī)

每一個(gè)符合條件的實(shí)驗(yàn)對(duì)象參加實(shí)驗(yàn)的機(jī)會(huì)相同，即總體中每個(gè)個(gè)體有相同的機(jī)會(huì)被抽到樣本中來；保證樣本的代表性。分組隨機(jī)

每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象分配到不同處理組的機(jī)會(huì)相同，保證其他因素在對(duì)比組間的均衡性。實(shí)驗(yàn)順序隨機(jī)

每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象接受處理先后的機(jī)會(huì)相同；使實(shí)驗(yàn)順序的影響也達(dá)到均衡。第五十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日隨機(jī)化的方法抽簽或擲硬幣隨機(jī)數(shù)(randomnumber)：隨機(jī)數(shù)字表和計(jì)算機(jī)(或計(jì)算器)的偽隨機(jī)數(shù)發(fā)生器。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中常用的兩種隨機(jī)化方法：完全隨機(jī)化和分層隨機(jī)化

第六十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日完全隨機(jī)化(completerandomization)直接對(duì)受試對(duì)象進(jìn)行隨機(jī)化分組(1)編號(hào)：將n個(gè)受試對(duì)象編號(hào)，動(dòng)物可按體重大小。(2)取隨機(jī)數(shù)：可從隨機(jī)數(shù)字表或計(jì)算器或計(jì)算機(jī)獲得。每個(gè)受試對(duì)象獲得的隨機(jī)數(shù)可是一位數(shù)，也可是兩位數(shù)或三位數(shù)，一般要求與n的位數(shù)相同。(3)確定組別：根據(jù)受試對(duì)象獲得的隨機(jī)數(shù)決定受試對(duì)象在哪一組。分兩組可按隨機(jī)數(shù)的奇偶；分k組可按隨機(jī)數(shù)除以k后的余數(shù)進(jìn)行分組。

第六十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日完全隨機(jī)

-

例：試將同性別、體重相近的15只動(dòng)物分到A、B、C三組

(1) (2) (3) (4) (5)(6) (7) (8) (9) (10)(11) (12) (13) (14) (15)

88 56 53 27 5933 35 72 67 4777 34 55 45 70B C C A CC B B A BA C A B C1 2 2 0 20 2 0 1 22 1 1 0 1第六十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日先對(duì)可能影響實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果的混雜因素進(jìn)行分層，然后在每一層內(nèi)進(jìn)行完全隨機(jī)化。配對(duì)隨機(jī)化(pairedrandomization)和區(qū)組隨機(jī)化(blockrandomization)可看成是分層隨機(jī)化的實(shí)際應(yīng)用?；静襟E：分層編號(hào)排序：將每層的受試對(duì)象編號(hào)排序，如體重從輕到重，時(shí)間由前至后等。取隨機(jī)數(shù)：同樣可從隨機(jī)數(shù)字表或計(jì)算器或計(jì)算機(jī)獲得。確定組別：根據(jù)每層受試對(duì)象獲得的隨機(jī)數(shù)的大小順序決定受試對(duì)象在哪一組。分層隨機(jī)化(stratifiedrandomization)

第六十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例:為比較四種抗癌藥物(A,B,C,D)的療效，將小鼠體重作為分層或區(qū)組因素，試分配處理。第六十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日3、重復(fù)(repetition)：是消除非處理因素影響的又一重要手段，重復(fù)的目的是使均數(shù)逼真，并穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)差，這樣才使統(tǒng)計(jì)量（樣本指標(biāo)）代表參數(shù)（總體指標(biāo)），統(tǒng)計(jì)推斷才具有可靠的前提。重復(fù)程度表現(xiàn)為樣本含量的大小和重復(fù)次數(shù)的多少?？煽啃哉麄€(gè)實(shí)驗(yàn)的重復(fù):確保實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，以提高實(shí)驗(yàn)的可靠性；用多個(gè)受試對(duì)象進(jìn)行重復(fù)：避免把個(gè)別情況誤認(rèn)為普遍情況，把偶然性或巧合的現(xiàn)象當(dāng)作必然的規(guī)律，通過一定數(shù)量的重復(fù)，使結(jié)論可信；同一受試對(duì)象的重復(fù)觀察:保證觀察結(jié)果的精度。例如，血壓一般都測(cè)3次，以3次的均數(shù)作為最終結(jié)果。第六十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日重復(fù)例數(shù)的決定因素：實(shí)驗(yàn)處理效果的明顯性實(shí)驗(yàn)誤差的大小動(dòng)物個(gè)體變異的大小資料性質(zhì)第一類誤差α第二類誤差β實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的類型第六十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日樣本含量估計(jì)的意義過小，所得指標(biāo)不穩(wěn)定，用以推斷總體的精密度和準(zhǔn)確度差；檢驗(yàn)的功效低，應(yīng)有的差別不能顯示出來，難以獲得正確的研究結(jié)果，結(jié)論也缺乏充分的依據(jù)。過大，會(huì)增加實(shí)際工作的困難，浪費(fèi)人力、物力和時(shí)間。第六十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日重復(fù)例數(shù)的計(jì)算方法：1、一般估測(cè)法小動(dòng)物(大鼠、小鼠、蛙、魚)：每組10-30例,計(jì)量資料每組不少于10例,計(jì)數(shù)資料每組不少于30例；中等動(dòng)物(豚鼠、家兔)每組8-20例,計(jì)量資料每組不少于8例,計(jì)數(shù)資料每組不少于20例；大動(dòng)物(犬、貓、豬、羊等)每組6-20例,計(jì)量資料每組不少于6例,計(jì)數(shù)資料每組不少于20例.第六十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2、假設(shè)檢驗(yàn)時(shí)通過公式計(jì)算或查表：

需明確如下指標(biāo)：①所比較的兩個(gè)總體參數(shù)間的差值，若無法得到參數(shù)的信息，可作預(yù)實(shí)驗(yàn)或?qū)I(yè)上公認(rèn)的差值代替；②總體標(biāo)準(zhǔn)差，常用預(yù)試的樣本標(biāo)準(zhǔn)差來估計(jì)；③第一類誤差的概率(α

)，既檢驗(yàn)水準(zhǔn)；④檢驗(yàn)效能1－β公式：

n=2б2(tα+tβ)2/δ2n為樣本含量，б為標(biāo)準(zhǔn)差；tα取有顯著性的t分布值，t0.05=1.96；tβ為無顯著性的t分布值，1-β為實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)?zāi)芰?，?dòng)物實(shí)驗(yàn)一般取1-β=0.80，t0.20=0.842；δ為處理組與對(duì)照組均值間的差異，可從預(yù)實(shí)驗(yàn)或文獻(xiàn)資料庫中獲得。第六十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日有些實(shí)驗(yàn)單做一種動(dòng)物還不夠，應(yīng)當(dāng)重復(fù)做幾種動(dòng)物。這不僅可以比較不同動(dòng)物的差別，而且可以在不同動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)新問題，提供新的線索。如動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)，不同動(dòng)物在血管的結(jié)構(gòu)、病變、α-和β-脂蛋白的比例以及膽固醇的水平各有不同，這樣不僅可以比較一些不同動(dòng)物病理變化，也可以根據(jù)這些不同的變化尋找生化指標(biāo)與病變形成的關(guān)系，把實(shí)際工作推進(jìn)一步。第七十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日由于不同種屬動(dòng)物有不同的功能和代謝特點(diǎn)，所以在肯定一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)最好采用兩種以上的動(dòng)物進(jìn)行比較觀察，其中一種應(yīng)該是非嚙齒類動(dòng)物。尤其是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果要外推到人的實(shí)驗(yàn)，所選用的動(dòng)物品種應(yīng)不少于3種，而且其中之一不應(yīng)是嚙齒類動(dòng)物。常用的生物序列是小鼠——大鼠——犬（小型豬或猴）。小鼠大鼠犬猴小型豬第七十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日4、一致性原則：一個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性好壞，關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研究的成敗。應(yīng)充分發(fā)揮具有各種知識(shí)結(jié)構(gòu)和背景的人的作用，群策群力，方可有效地提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性。要求實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組除了處理因素不同之外，實(shí)驗(yàn)對(duì)象、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)時(shí)間、藥品、儀器、設(shè)備、操作人員等等，均應(yīng)力求一致。即：動(dòng)物：品系、體重、年齡、性別、飼料和飼養(yǎng)方式等方面一致環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室溫度、氣壓、濕度、季節(jié)和時(shí)間等環(huán)境條件一致儀器：種類、型號(hào)、靈敏度、精確度、零點(diǎn)漂移、電壓穩(wěn)定性、操作步驟和熟練程度等方面一致藥物：廠商、批號(hào)、純度、劑型、劑量、注射容量和速度、酸堿度、溫度、給藥途徑和給藥順序等方面保持一致。第七十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日5、

彈性原則：即所謂空缺原則，指的是在時(shí)間分配上留有空缺。適當(dāng)?shù)目杖笔欠浅１匾模挥羞@樣才能富有彈性的實(shí)施實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，并不斷地調(diào)整好自己的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。6、最經(jīng)濟(jì)原則：不論什么實(shí)驗(yàn)，都有它的最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時(shí)間的損耗上，必要時(shí)可以預(yù)測(cè)一下自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)出和投入的比值，這個(gè)比值越大越好，當(dāng)然是以你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件為基礎(chǔ)。

第七十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日四、常用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法簡(jiǎn)介1、單組比較設(shè)計(jì)：是指在同一個(gè)體上觀察處理前后某種觀測(cè)指標(biāo)的變化。又稱為自身對(duì)照設(shè)計(jì)。如果施與每個(gè)受試對(duì)象的處理是相互交叉的，又稱為交叉設(shè)計(jì)。自身對(duì)照有3種形式：對(duì)每個(gè)觀察單位進(jìn)行兩次觀察，第一次觀察不給處理，第二次觀察給予處理，兩次結(jié)果的差值作為實(shí)驗(yàn)效應(yīng)對(duì)每個(gè)觀察單位進(jìn)行兩次觀察，第一次是處理A，第二次是處理B，也以兩次結(jié)果的差值作為實(shí)驗(yàn)效應(yīng)將受試對(duì)象隨機(jī)分為兩組，首先第一組給予處理A，第二組給予處理B，之后再換成第一組給予處理B，第二組給予處理A。兩組A處理的結(jié)果作為A的效應(yīng)，兩組B處理的結(jié)果作為B的效應(yīng)，A與B進(jìn)行比較，即交叉分組比較。此法的優(yōu)點(diǎn)是能清除個(gè)體間生物差異，但不適用于在同一個(gè)體上多次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和觀察。還應(yīng)注意有時(shí)陰性對(duì)照前后兩次測(cè)量時(shí)一些指標(biāo)也經(jīng)常出現(xiàn)一定的差異（如體重、血壓等），此時(shí)要注意環(huán)境因素的控制。第七十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2、配對(duì)比較設(shè)計(jì)：指實(shí)驗(yàn)前將動(dòng)物按性別、體重或其它有關(guān)因素加以配對(duì)，以基本相同的兩個(gè)動(dòng)物為一對(duì)，配成若干對(duì)，然后將一對(duì)動(dòng)物隨機(jī)分配于兩組中。兩組動(dòng)物的數(shù)量、體重、性別等情況基本相同，取得均衡后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以減少誤差及動(dòng)物間的個(gè)體差異。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中：常將種屬、性別相同，年齡、體重相近的兩個(gè)動(dòng)物配成對(duì)子。適用于總體同質(zhì)性差，對(duì)間同質(zhì)性不高，對(duì)內(nèi)同質(zhì)性較好。優(yōu)點(diǎn)：減少兩組實(shí)驗(yàn)誤差及動(dòng)物間的個(gè)體差異。抽樣誤差較小、實(shí)驗(yàn)效率較高、所需樣本含量也較小缺點(diǎn)：應(yīng)考慮種屬、品系、性別、年齡與體重、同父母、同胎次出生等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。當(dāng)配對(duì)條件未能嚴(yán)格控制造成配對(duì)失敗或配對(duì)欠佳時(shí)，反而會(huì)降低效率。第七十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例：為研究VitE缺乏飼料對(duì)大鼠肝臟中VitA含量(u/mg)的影響，選取同性別(雌、雄各半)、同月齡(斷乳1個(gè)月)、同體重(50g+2g)等正常大鼠配成10對(duì)，對(duì)每對(duì)中每只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表(或抽簽)隨機(jī)分配到給以正常飼料組和VitE缺乏飼料組，分飼條件相同的不同籠中，經(jīng)1個(gè)月飼養(yǎng)后處死，按每對(duì)分別取肝臟，測(cè)得VitA含量(u/mg)如表。

大鼠對(duì)別正常飼料組VitE缺乏組13.952.6523.803.3533.452.4543.352.6553.702.6563.903.1573.802.9083.051.9093.651.70102.002.50第七十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日3、完全隨機(jī)設(shè)計(jì)；亦稱單因素設(shè)計(jì)，是將每個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象隨機(jī)分配在各組，并從各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較中得出結(jié)論。通常用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。各組樣本含量相等：平衡設(shè)計(jì)各組樣本含量不等：非平衡設(shè)計(jì)優(yōu)點(diǎn)：是設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)的處理都比較簡(jiǎn)單，即使各處理組例數(shù)不等也不影響試驗(yàn)結(jié)果的分析，抗數(shù)據(jù)缺失能力較強(qiáng)。但在例數(shù)較少時(shí)往往不能保證組間的一致性。缺點(diǎn)：只能分析一個(gè)因素，效率不高。對(duì)非實(shí)驗(yàn)因素缺乏有效控制，適用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象同質(zhì)性較好的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。小樣本時(shí)，可能均衡性較差，抽樣誤差較大。對(duì)個(gè)體間同質(zhì)性要求較高，在個(gè)體同質(zhì)性較差時(shí)，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)并不是最佳設(shè)計(jì)。第七十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例：為比較小鼠接種3種不同菌型傷寒桿菌(9D、11C、DSC1)后存活日數(shù)的差異，選擇同品系、性別(雌、雄各半)、體重(土1s)、月齡(土2天)、生理精神狀態(tài)、飼養(yǎng)條件等小鼠30只，依隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3組，在相同條件下接種菌苗，后觀察存活日數(shù)如下表。

9D11CDSC125746113862567109775212115664634710第七十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日4、隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)；也稱配伍組設(shè)計(jì)。是配對(duì)比較設(shè)計(jì)的擴(kuò)大。將全部動(dòng)物按體重、性別及其它條件等分為若干組，每組中動(dòng)物體質(zhì)條件相似，再將每個(gè)區(qū)組中的每一只動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)，利用隨機(jī)數(shù)字法將其分配到各組。配對(duì)設(shè)計(jì)的每一“對(duì)子”分別給予兩種處理，而配伍組設(shè)計(jì)中的每一“配伍組”包含多個(gè)受試對(duì)象，分別給予多種處理。適用于總體同質(zhì)性差，部分同質(zhì)性好。優(yōu)點(diǎn)：每個(gè)區(qū)組內(nèi)的k個(gè)受試對(duì)象有較好的同質(zhì)性，因此組間均衡性也較好；比完全隨機(jī)設(shè)計(jì)減少了誤差，因而更容易察覺處理組間的差別，提高了實(shí)驗(yàn)效率。缺點(diǎn)是要求區(qū)組內(nèi)實(shí)驗(yàn)單位數(shù)與處理數(shù)相同，抗數(shù)據(jù)缺失能力較低。若一個(gè)區(qū)組的某個(gè)動(dòng)物發(fā)生意外，那么整個(gè)區(qū)組都得放棄，或不得已采取缺項(xiàng)估計(jì)。第七十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日例：有人用4種不同種系的未成年大鼠做實(shí)驗(yàn)，每一種以同窩雌性大鼠3只，隨機(jī)分配注射3種不同劑量的雌性激素(mg/100g)后，在相同條件下稱其子宮重量(g)，見表：

大鼠種系0.20.40.811611614524268115370111133442358480第八十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日5、拉丁方設(shè)計(jì)：用r個(gè)拉丁字母排成r行r列的方陣，使每行每列中的每個(gè)字母都只出現(xiàn)一次，這樣的方陣叫r階拉丁方，或r×r拉丁方。這種分別按拉丁字母、行和列安排處理因素及影響因素的實(shí)驗(yàn)稱為拉丁方實(shí)驗(yàn)。它必須是3因素試驗(yàn)，且3種因素各有r個(gè)水平。優(yōu)點(diǎn)：可以大大減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)，比配伍組設(shè)計(jì)更進(jìn)一步，是雙向的誤差控制，尤其適合于動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)。缺點(diǎn)是要求處理數(shù)必須等于拉丁方的行（列）數(shù)，一般的實(shí)驗(yàn)不容易滿足此條件，而且數(shù)據(jù)丟失會(huì)增加統(tǒng)計(jì)分析難度。由于每種處理的重復(fù)數(shù)較少，對(duì)差別的估計(jì)可能不夠精確。例：蛇毒的抑瘤實(shí)驗(yàn)：4x4拉丁方實(shí)驗(yàn)12341ABCD2BADC3CDAB4DCBA12341CBAD2DABC3ADCB4BCDAⅠⅡⅢⅣ1CBAD2ADCB3DABC4BCDA1，3兩列對(duì)調(diào)2，3兩行對(duì)調(diào)：基本方隨機(jī)化基本方成份（峰）劑量瘤株瘤株（處理）A（肉瘤180）B（肝肉瘤）C艾氏腹水瘤）D（網(wǎng)狀細(xì)胞瘤）成份（峰）ⅠⅡⅢⅣ劑量（mg/kg）1（0）2（0.03）3（0.05）4（0.075）第八十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日6、正交設(shè)計(jì)：是研究多因素試驗(yàn)的一種設(shè)計(jì)方法。其特點(diǎn)是利用一套規(guī)格化的表格——正交表來安排實(shí)驗(yàn)，適用于多因素、多水平、實(shí)驗(yàn)誤差大、周期長等一類實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)過程中只要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件直接套用正交表即可，而不需要另行編制。正交表在統(tǒng)計(jì)學(xué)書上都可查到。以L9（34）為例說明其意義及使用方法：L代表正交表，右下角9字表示這張表需安排9次實(shí)驗(yàn)。括號(hào)內(nèi)3表示這張表使用于三水平的實(shí)驗(yàn)，指數(shù)4表示最多可以安排4個(gè)因素的實(shí)驗(yàn)。總的來說用這張表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，最多可以安排4個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，一共進(jìn)行9次實(shí)驗(yàn)。第八十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理與分析（一）參數(shù)估計(jì)：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)描述1、算術(shù)平均數(shù)：表示一組觀察值（或變量）的集中趨勢(shì)、中心位置或平均水平的指標(biāo)。2、標(biāo)準(zhǔn)差：表示一組變量值離散程度（dispersion）的指標(biāo)，均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差結(jié)合能更全面地說明一組變量的分布情況。3、率：表示一定條件下某種現(xiàn)象實(shí)際發(fā)生數(shù)與可能發(fā)生數(shù)的比。4、構(gòu)成比：又稱構(gòu)成指標(biāo)，表示事務(wù)或現(xiàn)象內(nèi)部各構(gòu)部分的比重。常稱百分比。第八十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日（二）假設(shè)檢驗(yàn)：顯著性檢驗(yàn)方法1、計(jì)量資料的分析方法：t檢驗(yàn)：生物學(xué)研究中，由于實(shí)驗(yàn)條件和研究對(duì)象的限制，有許多研究的樣本容量很難達(dá)到30，因此常采用小樣本平均數(shù)的t檢驗(yàn)。u檢驗(yàn)法：對(duì)于樣本數(shù)大于30，且能獲知總體方差時(shí)可采用u檢驗(yàn)法。F檢驗(yàn)：而對(duì)于單因素樣本（水平數(shù)k≧3）或兩個(gè)及兩個(gè)以上因素的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)則必須采用F檢驗(yàn)。第八十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2、計(jì)數(shù)資料的分析方法；計(jì)數(shù)資料的顯著性檢驗(yàn)大部分采用χ2檢驗(yàn)。根據(jù)研究目的不同可分為適合性檢驗(yàn)和獨(dú)立性檢驗(yàn)。適合性檢驗(yàn)：檢驗(yàn)?zāi)承誀钣^察次數(shù)與該性狀的理論比率是否符合。獨(dú)立性檢驗(yàn)：是研究?jī)深愒囼?yàn)因子之間是相互獨(dú)立還是相互影響的，也就是對(duì)次數(shù)資料的相關(guān)性進(jìn)行研究。這類數(shù)據(jù)資料的其它分析檢驗(yàn)方法（如四格表精確檢驗(yàn)法）請(qǐng)參閱有關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)專著。3、統(tǒng)計(jì)軟件的應(yīng)用：如SPSS。第八十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日第四部分、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中首要考慮的問題之一。不同實(shí)驗(yàn)的研究目的和要求不同，不同種類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也有其各自的生物學(xué)特點(diǎn)和解剖生理特征。為保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中使用最適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，選擇動(dòng)物應(yīng)遵循以下原則：第八十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日1、相似性原則：是指利用動(dòng)物與人類某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)的相似性選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的是利用動(dòng)物與人類近似的特性通過動(dòng)物的反應(yīng)來推斷人類的病理和生理進(jìn)程特點(diǎn)，尋找預(yù)防及治療方法，因此，動(dòng)物的物種進(jìn)化程度在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)是優(yōu)先考慮的問題。在可能的情況下，應(yīng)盡量選擇在結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝及疾病特征方面與人類相近的動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)。第八十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日組織結(jié)構(gòu)：哺乳動(dòng)物之間有許多組織結(jié)構(gòu)上的相似點(diǎn)，因而其生命功能基本過程也很相似。例：豬，皮膚組織結(jié)構(gòu)與人類相似，其上皮再生、皮下脂肪層、燒傷后的內(nèi)分泌及代謝特點(diǎn)等也都類似人類，故選用小型豬做燒傷實(shí)驗(yàn)研究較為合適。系統(tǒng)機(jī)能：許多動(dòng)物各系統(tǒng)的功能與人類是相似的。例：犬，其具有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，毒理方面的反應(yīng)與人類也比較接近，適于做實(shí)驗(yàn)外科學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、藥理毒理學(xué)、行為學(xué)等方面的研究。蛙和蟾蜍：大腦不發(fā)達(dá)，不能用于高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)研究，但做簡(jiǎn)單的反射弧實(shí)驗(yàn)很合適，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單明了，易于分析。生理特性：兩棲類和爬行類是變溫動(dòng)物，因此不適合做提問調(diào)節(jié)研究；獼猴的生殖生理和人非常接近，月經(jīng)周期和人一樣約28天左右，是研究人類避孕藥的理想動(dòng)物。體液成分：動(dòng)物的血液性狀、糞便、汗和尿液的理化性質(zhì)、成分構(gòu)成也大都具有各自的特點(diǎn)。例如尿液的滲透壓和酸堿度。第八十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日繁殖特性：如家兔的卵巢幾乎連續(xù)不斷地產(chǎn)生卵子，但成熟的卵泡只有經(jīng)過雄兔交配后才能排卵，因此可選用成年雌兔來誘發(fā)排卵，是觀察藥物對(duì)排卵的影響，進(jìn)行避孕藥研究的常用動(dòng)物。解剖特性：骨骼構(gòu)成、臟器構(gòu)成、臟器形態(tài)等方面：例，豬的齒式與人類相似；肉食類和草食類動(dòng)物的腸道長度；魚類、兩棲類、爬行類、鳥類和哺乳類的心臟特點(diǎn)，在形態(tài)和機(jī)能上與人的心臟最類似的是犬。疾病特點(diǎn)：一些帶有自發(fā)性疾病的動(dòng)物，可以局部或全部地反映人類類似疾病過程表現(xiàn)，經(jīng)過遺傳育種的方法，可把這種動(dòng)物培育成疾病的模型動(dòng)物，以供研究。如，遺傳性高血壓大鼠、糖尿病小鼠等。突變系SHR大鼠其自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，并伴有高血壓性心血管病變。猴對(duì)痢疾桿菌敏感，是研究痢疾的最好模型。黑熱病地區(qū)的家犬也感染利朵曼氏原蟲發(fā)病，犬當(dāng)然就成為研究黑熱病的最好實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。第八十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2、特殊性原則：是指利用不同種系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體存在的特殊構(gòu)造或某些特殊反應(yīng)選擇解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵蟮膭?dòng)物。有時(shí)這種選擇是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。恰當(dāng)?shù)厥褂镁哂心承┙馄噬硖攸c(diǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，有時(shí)還能大大地減少實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方面的麻煩，降低操作難度。第九十頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日Example：大鼠無膽囊，不會(huì)嘔吐，不能做膽功能觀察或催吐實(shí)驗(yàn)。狗、貓、猴等動(dòng)物嘔吐反應(yīng)敏感，則宜選用。家兔對(duì)體溫變化十分敏感，宜選做發(fā)熱、解熱和檢查熱原的實(shí)驗(yàn)研究，大鼠、小鼠體溫調(diào)節(jié)不穩(wěn)定，不宜選用。一般動(dòng)物可自身合成維生素C，豚鼠則不能合成，因而可用來做Vc缺乏試驗(yàn)。大鼠垂體——腎上腺系統(tǒng)功能發(fā)達(dá)，應(yīng)激反應(yīng)靈敏，適于作應(yīng)激反應(yīng)和垂體，腎上腺、卵巢等內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)研究。大鼠肝臟的枯否氏細(xì)胞90%有吞噬能力，肝臟再生能力很強(qiáng)，切除60～70%的肝葉，仍有再生力，適于肝外科實(shí)驗(yàn)研究。大鼠對(duì)炎癥反應(yīng)靈敏，特別是踝關(guān)節(jié)對(duì)炎癥反應(yīng)更敏感，適于多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和化膿性淋巴腺炎的研究，也適于中耳疾病和內(nèi)耳炎的研究。

第九十一頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日不同藥物或化合物在不同種系動(dòng)物上引起的反應(yīng)有時(shí)存在很大差異，如嗎啡對(duì)家犬、兔、猴、大鼠和人主要作用是中樞抑制，而對(duì)小鼠和貓主要作用是興奮。苯胺及其衍生物對(duì)家犬、貓和豚鼠能引起與人相似的病理變化，產(chǎn)生變性血紅蛋白，但對(duì)家兔則不易產(chǎn)生變性血紅蛋白，在鼠則完全不產(chǎn)生。這在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)必須注意。不同品系動(dòng)物，對(duì)同一刺激的反應(yīng)差異很大，在選擇時(shí)也必須注意。如C57BL小鼠對(duì)腎上腺皮質(zhì)激素的敏感性比DBA及BALB/C小鼠高12倍。DBA小鼠對(duì)音響刺激非常敏感，可發(fā)生聽源性痙攣，而C57BL小鼠卻根本不會(huì)出現(xiàn)這種反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)充分了解動(dòng)物特性，選擇敏感性強(qiáng)、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果干擾小的動(dòng)物品系。第九十二頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日3、標(biāo)準(zhǔn)化原則：是指選擇和使用與研究?jī)?nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。只有選用經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，才能排除微生物、潛在疾病等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，使實(shí)驗(yàn)具有重復(fù)性、一致性和忠實(shí)性。（1）遺傳學(xué)控制要求選擇何種遺傳群體動(dòng)物，應(yīng)根據(jù)不同課題內(nèi)容而定。近交系動(dòng)物遺傳純合度高，個(gè)體差異小，特征穩(wěn)定，對(duì)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)一致性好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確可靠。以群體為研究對(duì)象的研究課題，如人類遺傳學(xué)研究，藥物篩選和毒性實(shí)驗(yàn)中要選擇與人群基因型及表現(xiàn)型相似的動(dòng)物類別，封閉群則更為合適。

F1代生活力強(qiáng)，帶有兩個(gè)親本品系的特性，個(gè)體間的遺傳型和表型一致，是理想的品系，但價(jià)格較貴。第九十三頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日（2）微生物控制要求：普通級(jí)動(dòng)物具有價(jià)廉、易獲得、飼養(yǎng)設(shè)施簡(jiǎn)便、容易管理等特點(diǎn)，但用于研究所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的反應(yīng)性差，微生物控制難度也大，一般用于示教和預(yù)實(shí)驗(yàn)。清潔級(jí)動(dòng)物：較為常用，適用于大多數(shù)科研工作，但趨勢(shì)是取消。SPF動(dòng)物是正常的健康無病模型，可排除疾病或病原的干擾，適用于所有科研實(shí)驗(yàn)、生物制品和藥品生產(chǎn)及檢定，是國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。涉及具有國際交流意義的重大課題，最好選用SPF動(dòng)物。無菌和悉生動(dòng)物是一種超常生態(tài)模型，非常規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，僅適用于特殊實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹Ｈ缥⑸锱c宿主、微生物之間的關(guān)系。第九十四頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日普通動(dòng)物、SPF動(dòng)物與無菌動(dòng)物特點(diǎn)比較━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

普通動(dòng)物

SPF動(dòng)物

無菌動(dòng)物━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

傳染病

有或可能有

無

無

寄生蟲

有或可能有

無

無

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

有疑問

明確

明確

應(yīng)用動(dòng)物數(shù)

多(或大量)

少數(shù)

少數(shù)

統(tǒng)計(jì)價(jià)值

不準(zhǔn)確

可能好

好

長期實(shí)驗(yàn)

困難

可能好

可能好

自然死亡率

高

低

很低

長期實(shí)驗(yàn)存活率

約40%

約60%

約100%

實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確設(shè)計(jì)

不可能

可能

可能

實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論價(jià)值

低

高

很高━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━第九十五頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日各種實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品質(zhì)相匹配：選用與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、技術(shù)條件、實(shí)驗(yàn)方法等條件相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物。既要避免高精尖的儀器、試劑、技術(shù)方法等與低規(guī)格、非標(biāo)準(zhǔn)化、反應(yīng)性能低的動(dòng)物相配，又要防止低性能測(cè)試手段、非標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)施等與高級(jí)別、高反應(yīng)性能的動(dòng)物相配，造成不必要的資源的浪費(fèi)。這種匹配的協(xié)調(diào)性反映在生物反應(yīng)性、實(shí)驗(yàn)技術(shù)構(gòu)成、動(dòng)物品系、體型、年齡、性別、行為特質(zhì)等。第九十六頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日4、規(guī)格化原則：是指選擇與實(shí)驗(yàn)要求一致的動(dòng)物規(guī)格。由于不同動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)存在著個(gè)體差異，選擇時(shí)，除了注意動(dòng)物的種類及品系外，還應(yīng)考慮動(dòng)物的年齡、體重、性別、生理及健康狀況等，符合規(guī)格，這也是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性和可重復(fù)性的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。第九十七頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日犬與人的年齡對(duì)應(yīng)年齡對(duì)應(yīng)(年)犬12345678910111213141516人1524283440424448

5256

606468

7276801）年齡不同品種和品系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物其壽命各不同，有的以日,有的以月,有的以年計(jì)算。如果對(duì)犬和小鼠均觀察一年，所反應(yīng)的發(fā)育過程是不同的，即使同樣是犬，不同的年齡階段所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也不盡相同。所以選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，應(yīng)注意到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人之間的年齡對(duì)應(yīng)，以便進(jìn)行分析和比較。第九十八頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的年齡對(duì)照表第九十九頁，共一百一十頁，編輯于2023年，星期日2）體重動(dòng)物的體重與年齡有一定的關(guān)系，也可按體重推算年齡，例如昆明小鼠6周齡時(shí)雄性約32g，雌性約28g；Wistar