紅細胞血型及相關(guān)檢測演示文稿

紅細胞血型及相關(guān)檢測演示文稿當前第1頁\共有59頁\編于星期三\10點（優(yōu)選）紅細胞血型及相關(guān)檢測當前第2頁\共有59頁\編于星期三\10點教學目標掌握ABO和Rh血型鑒定、交叉配血試驗原理、方法和質(zhì)量控制熟悉紅細胞不規(guī)則抗體篩查及鑒定方法了解吸收放散試驗當前第3頁\共有59頁\編于星期三\10點一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法（二）鹽水介質(zhì)玻片法（三）微柱凝膠血型定型檢測卡法（四）質(zhì)量保證：試管法、玻片法、卡式（五）方法學評價（六）臨床應用（七）不一致原因及解決方法當前第4頁\共有59頁\編于星期三\10點ABO血型鑒定原理正向定型：已知的特異性抗體（標準血清）檢查紅細胞的未知抗原反向定型：已知的血型的標準紅細胞檢查血清中的未知抗體A抗原B抗原A和B抗原無A和B抗原抗A抗體抗B抗體抗A、抗B抗體無抗A、抗B抗體當前第5頁\共有59頁\編于星期三\10點ABO血型鑒定結(jié)果判斷正向定型（標準血清+被檢者紅細胞）反向定型（標準紅細胞+被檢者血清）結(jié)果判斷抗A抗B

A型紅細胞B型紅細胞O型紅細胞

+--+-A-++--B++---AB--++-O當前第6頁\共有59頁\編于星期三\10點試管法當前第7頁\共有59頁\編于星期三\10點試管法結(jié)果判定紅細胞凝集強度判斷標準當前第8頁\共有59頁\編于星期三\10點瓷板法當前第9頁\共有59頁\編于星期三\10點結(jié)果判定當前第10頁\共有59頁\編于星期三\10點

凝膠技術(shù)的原理

反應室外管壁反應室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液當前第11頁\共有59頁\編于星期三\10點凝膠技術(shù)的原理：A、反應室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細胞在離心力作用下穿越該層，紅細胞與反應室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。當前第12頁\共有59頁\編于星期三\10點原理：凝膠分子篩和親和效應微柱凝膠柱中填充凝膠（葡聚糖），及相應試劑（抗體或抗原）。凝膠分子間的間隙只允許游離紅細胞通過，分子排阻層析原則將發(fā)生凝集反應的紅細胞阻滯于凝膠之內(nèi)，而未凝集的游離紅細胞則穿過微孔運動到管底，從而判定有無凝集反應。當前第13頁\共有59頁\編于星期三\10點

結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三臨床檢驗教研室當前第14頁\共有59頁\編于星期三\10點微孔板法當前第15頁\共有59頁\編于星期三\10點（四）質(zhì)量保證試管法標記加樣量、加樣順序溶血是一種陽性反應玻片法標記正定型顯微鏡陰性確認當前第16頁\共有59頁\編于星期三\10點微柱凝膠血型定型檢測卡血清標本應完全取出纖維蛋白，血漿標本建議EDTA-K2或枸櫞酸鹽康寧先加紅細胞懸液，再加血漿或抗體試劑紅細胞懸液和血漿各加50ul按照說明書操作（四）質(zhì)量保證當前第17頁\共有59頁\編于星期三\10點（五）方法學評價試管法：常用，廣泛，較玻片法靈敏，結(jié)果準確，反應時間短，結(jié)果不能保存，人為因素大玻片法：操作簡單、無需特殊儀器，適用于血型普查；靈敏度差，反應時間長，不能用于反定型，結(jié)果不能保存，人為因素影響大，易發(fā)生血液污染微柱凝膠血型定型檢測卡法：特異性強、靈敏度高，結(jié)果準確，保持時間長，標本和試劑用量少，操作可以標準化、自動化，減少了醫(yī)源性污染，但需要專門離心設(shè)備和試劑卡，成本較高當前第18頁\共有59頁\編于星期三\10點輸血治療的首要步驟組織器官移植新生兒溶血病ABO正反定型的臨床意義當前第19頁\共有59頁\編于星期三\10點ABO正反定型不符分析基本程序首先重復試驗重新采集獻血者與受血者血液標本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標本紅細胞應用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細胞當前第20頁\共有59頁\編于星期三\10點錯加試劑或標本技術(shù)和操作受血者紅細胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細胞與血清間比例不適當溶血現(xiàn)象未能識別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯誤血清異常紅細胞致敏近期輸血疾病導致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進行大量血漿置換治療當前第21頁\共有59頁\編于星期三\10點RhD定型及其常見問題1.Rh定型RhD定型，試管法最經(jīng)典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認IgM抗-D陰性三個廠家IgG抗-D進行確認抗人球蛋白法進行確認三種IgG抗-D試劑均為陰性，報RhD陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性，報弱D當前第22頁\共有59頁\編于星期三\10點概念：檢測受血者和供血者血液中是否含有不相配合的成分，是輸血前確保受血者輸血安全必不可少的試驗包括：主側(cè)配血和次側(cè)配血主側(cè)是受血者血清與供血者紅細胞相配的一側(cè)次側(cè)是受血者紅細胞與供血者血清相配的一側(cè)。三、交叉配血試驗當前第23頁\共有59頁\編于星期三\10點交叉配血的主次側(cè)當前第24頁\共有59頁\編于星期三\10點（一）鹽水介質(zhì)交叉配血試驗本質(zhì)凝集反應，直接凝集試驗檢測IgM類抗體方法：試管法ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無凝集及溶血，表示無輸血禁忌，可以輸血當前第25頁\共有59頁\編于星期三\10點鹽水介質(zhì)配血方法患者獻血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽性陰性當前第26頁\共有59頁\編于星期三\10點（二）抗球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗抗人球蛋白試驗：又稱Coombs試驗，是一種檢查不完全抗體的敏感方法分類：直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗當前第27頁\共有59頁\編于星期三\10點抗球蛋白試驗原理Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細胞凝集。直接試驗：是檢查被檢紅細胞上有無不完全抗體間接試驗：是檢查血清中游離的不完全抗體當前第28頁\共有59頁\編于星期三\10點直接Coombs試驗抗人免疫球蛋白自身抗體當前第29頁\共有59頁\編于星期三\10點間接Coombs試驗抗人免疫球蛋白同種異型抗體當前第30頁\共有59頁\編于星期三\10點2不完全抗體可以結(jié)合在紅細胞表面,但是不能和兩個紅細胞同時結(jié)合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時和兩個不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細胞連接在一起抗人球蛋白交叉配血法示意圖當前第31頁\共有59頁\編于星期三\10點抗球蛋白配血方法患者獻血者主側(cè)次側(cè)37℃37℃水浴30分鐘三洗

當前第32頁\共有59頁\編于星期三\10點抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白離心看結(jié)果陽性陰性抗球蛋白試劑上海市血液中心血當前第33頁\共有59頁\編于星期三\10點結(jié)果判讀直接抗球蛋白試驗陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽性陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管不凝集，需要做陰性確認后判定結(jié)果（無凝集的被檢管中加入IgG抗-D致敏紅細胞后離心，出現(xiàn)凝集判陰性，否則重新試驗陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管凝集，結(jié)果不可信不發(fā)報告，分析原因重做當前第34頁\共有59頁\編于星期三\10點間接抗球蛋白試驗陽性對照管呈現(xiàn)凝集反應，陰性對照管未呈現(xiàn)凝集反應，被檢管呈現(xiàn)凝集反應為陽性結(jié)果，被檢者血清內(nèi)含有抗體，如果自身對照無凝集，同種抗體；如果被檢者結(jié)果陰性，被檢者血清中未被查出意外抗體。陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管出現(xiàn)凝集，實驗失敗。結(jié)果判讀當前第35頁\共有59頁\編于星期三\10點抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細胞洗滌已凝集紅細胞質(zhì)量不抗凝標本漏加試劑紅細胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細胞過多或過少血清濃度過大孵育時間和溫度不當前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗鹽水保存不當紅細胞直抗陽性當前第36頁\共有59頁\編于星期三\10點（三）低離子聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗

是一種快速、簡便、紅細胞不完全抗體的方法多數(shù)IgG抗體能夠被檢出，但IgG抗-K抗體除外漢族至今未發(fā)現(xiàn)K抗原陽性，也未檢出抗-K抗體當前第37頁\共有59頁\編于星期三\10點聚凝胺介質(zhì)試驗技術(shù)紅細胞表面帶有大量的負電荷，懸浮在電解質(zhì)溶液中，會吸引大量陽離子，紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，形成zeta電位。當前第38頁\共有59頁\編于星期三\10點紅細胞表面電荷及其相互之間的距離當前第39頁\共有59頁\編于星期三\10點原理聚凝胺技術(shù)首先利用低離子溶液（LIM）降低介質(zhì)的離子強度，減少紅細胞周圍的電子云再加入聚凝胺溶液，溶解后產(chǎn)生很多正電荷，中和紅細胞表面帶有的負電荷，紅細胞zeta電位降低，縮短紅細胞距離，產(chǎn)生非特異性聚集最后加入懸浮液，具有中和聚凝胺陽離子的作用，使正常紅細胞的非特異性凝集散開，特異性凝集仍然存在當前第40頁\共有59頁\編于星期三\10點1紅細胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉當前第41頁\共有59頁\編于星期三\10點1紅細胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時與兩個紅細胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完全抗體的結(jié)合，紅細胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體當前第42頁\共有59頁\編于星期三\10點聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻血者主側(cè)次側(cè)室溫放置1分鐘Polybrene上海市血液中心血主次側(cè)均加聚凝胺當前第43頁\共有59頁\編于星期三\10點聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細胞非特異性凝集陽性陰性重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果當前第44頁\共有59頁\編于星期三\10點注意事項不能使用含枸櫞酸鈉和肝素抗凝標本按比例加樣，非特異凝集60秒內(nèi)觀察結(jié)果出現(xiàn)不配合試驗時，抗球蛋白重復，結(jié)果不一致時以抗球蛋白試驗結(jié)果為準一般使用血清對Kell系統(tǒng)檢測不理想按照說明書當前第45頁\共有59頁\編于星期三\10點方法學評價鹽水介質(zhì)法：適用于ABO血型交叉配血，操作簡單、快速，不能檢出不相配合的IgG類抗體抗球蛋白試驗：結(jié)果準確，檢測不完全抗體最可靠的方法，操作繁瑣費事，試劑較貴低離子聚凝胺介質(zhì)法：應用廣泛、快速、準確，可檢測IgM、IgG類抗體，需特殊試劑，操作復雜。當前第46頁\共有59頁\編于星期三\10點臨床應用可以發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯誤，如A亞型發(fā)現(xiàn)亞型配血不合的情況發(fā)現(xiàn)其他血型抗體或不規(guī)則抗體當前第47頁\共有59頁\編于星期三\10點四、紅細胞抗體篩查與鑒定《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》

第四章第17條：“凡遇以下情況必須按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定做抗體篩選試驗：1.交叉配血不合的；2.對有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者當前第48頁\共有59頁\編于星期三\10點為什么要開展輸血前的“抗體篩選”檢查

1.目前已知紅細胞有30個血型系統(tǒng)（近300個抗原）。紅細胞抗原的多樣性決定了抗體的多樣性，檢測抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可確保絕大多數(shù)病人的輸血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引發(fā)的溶血。當前第49頁\共有59頁\編于星期三\10點2.臨床有的病人出現(xiàn)慢性（遲緩性）溶血反應，易忽視或引不起臨床醫(yī)師視。（理論上講，成年人每輸1U的濃縮紅細胞，在不丟失、不被破壞（溶血）的前提下，應能提升Hb5-10g/L(0.5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4URBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后（1周內(nèi)）Hb仍舊下降到原來水平，甚至更低。這種情況，就要考慮是否有慢性溶血反應存在。）3.利于早期發(fā)現(xiàn)和確認具有臨床意義的抗體，充足的時間來選擇相配合的血，避免患者病情的延誤。當前第50頁\共有59頁\編于星期三\10點什么叫“不規(guī)則抗體篩查”檢查？

1.不規(guī)則抗體的含義：除ABO系統(tǒng)外，其它系統(tǒng)產(chǎn)生的抗不符合Landsteiner規(guī)則，稱為不規(guī)則抗體或意外抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。

2.“不規(guī)則抗體篩查”的含義：用具備有臨床意義的血型抗原的O型紅細胞，檢測病人血清（含多種抗體）；如果出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，則提示病人有不規(guī)則抗體存在，可判為“抗體篩選”陽性。當前第51頁\共有59頁\編于星期三\10點不規(guī)則抗體的篩查和鑒定患者血清+試劑篩選紅細胞鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)酶介質(zhì)法當前第52頁\共有59頁\編于星期三\10點篩選細胞要求抗體篩選用紅細胞懸液（1#、2#、3#）試劑紅細胞必須含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb，所選用的2-3個O型紅細胞的抗原還應是互補的，純合子基因所表達的抗原更有利于相應抗體的檢出

當前第53頁\共有59頁\編于星期三\10點不規(guī)則抗體鑒定不規(guī)則抗體篩查陽性后，進行抗體鑒定，明確抗體的類別譜細胞與待檢者血清反應，反應格局，抗體