臨床常見細(xì)菌的鑒定程序和思路

臨床常見細(xì)菌的鑒定程序和思路第一頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六沒有好的標(biāo)本就沒有好的檢驗(yàn)結(jié)果。我們的工作都是從接收到標(biāo)本開始，那么保證標(biāo)本質(zhì)量為其首要。所以對于標(biāo)本的處理要嚴(yán)格按照標(biāo)本處理手冊來進(jìn)行。包括標(biāo)本的質(zhì)量審定（是否合格），接種合適的培養(yǎng)基，選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件（如溫度，氣體環(huán)境等等）。對于手冊上要求作Gram染色的標(biāo)本要作染色，以對標(biāo)本作出一個(gè)初步的評價(jià)。對于鏡下見有較多膿細(xì)胞的標(biāo)本要盡量找出細(xì)菌，除了Gram染色還可考慮吖啶橙、抗酸和Jimsa等染色。對于這類細(xì)胞多的標(biāo)本作Gram染色時(shí)最好用傳統(tǒng)的Gram染液

充分考慮標(biāo)本的潛在病原菌，對照標(biāo)本接種手冊，選擇適合的培養(yǎng)基接種，選擇適當(dāng)?shù)臍怏w環(huán)境放入孵箱內(nèi)培養(yǎng)。第二頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六細(xì)菌的分析鑒定

第三頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六

觀察培養(yǎng)基中生長的菌落特點(diǎn)：

菌落的大小，是否光滑，菌落邊緣是否整齊，菌落的顏色——如無色似水滴狀、白色、灰色、黃色、以及色澤的深淺，是否透光及透光的強(qiáng)弱，菌落產(chǎn)生光澤，等等；菌落產(chǎn)生的溶血環(huán)的情況——α溶血、β溶血、水溶性溶血、脂溶性溶血和其他的溶血特點(diǎn)；細(xì)菌產(chǎn)生的氣味——如銅綠假單胞菌的“生姜”味，酵母菌的酵母味，芳香黃桿菌的水果糖芳香味等等；第四頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六篩選出有意義的細(xì)菌。對待與體表相通部位的標(biāo)本，排除常居菌和正常菌群的“背景噪音”干擾，以便有效地進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。對于這一點(diǎn)，要求我們對致病菌、潛在病原菌、正常菌群和條件致病菌以及正常菌群地分布及臨床價(jià)值要熟練掌握。沒意義的細(xì)菌得出的結(jié)果沒有意義，會對臨床產(chǎn)生誤導(dǎo)作用。浪費(fèi)試驗(yàn)室的人力物力。有害而無利。第五頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六對培養(yǎng)出細(xì)菌的評價(jià)

考慮是否有污染；結(jié)合標(biāo)本的評價(jià)，評價(jià)細(xì)菌的臨床價(jià)值；結(jié)合標(biāo)本的采集部位；無菌部位標(biāo)本所生長細(xì)菌，要排除污染的可能性；考慮臨床危急程度，掌握及時(shí)報(bào)告的尺度。第六頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六

Gram染色

G+球菌

葡萄球菌鏈球菌觀察溶血情況觀察菌落的大小、特點(diǎn)Gram染色的形態(tài)特點(diǎn)血平板的溶血特點(diǎn)觸酶陽性觸酶（-）、膽汁七葉苷、6.5%NaCL按照葡萄球菌的進(jìn)行進(jìn)一步鑒定學(xué)會使用膠乳試劑快速檢測金黃色葡萄球菌和MRSA要求掌握葡萄球菌凝固酶的試管法測定實(shí)驗(yàn)α溶血掌握MRSA、MRSCoN及其篩選和確認(rèn)試驗(yàn)首先考慮肺炎鏈球菌掌握MRS的耐藥機(jī)理和耐藥性特點(diǎn)注意菌落形態(tài)和染色特點(diǎn)做OPT試驗(yàn)等，注意PRP的問題第七頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六β溶血等鏈球菌①考慮A群乙型鏈球菌，作BAC試驗(yàn)或Latex分群特別考慮標(biāo)本來源……②考慮B群乙型鏈球菌，做CAMP試驗(yàn)或Latex分群特別考慮標(biāo)本來源……③根據(jù)染色特點(diǎn)、菌落在血平板上的溶血特點(diǎn)和菌落大小等考慮——腸球菌進(jìn)一步作膽汁七葉苷、6.5%NaCL要求掌握腸球菌的耐藥性特點(diǎn)④其他特征不明顯的鏈球菌就用板條或Latex分群作系統(tǒng)試驗(yàn)鑒定第八頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六G-桿菌

路標(biāo)：O-F試驗(yàn)OX

++------±+++

腸桿菌科非發(fā)酵菌弧菌科板條系統(tǒng)鑒定板條系統(tǒng)鑒定板條系統(tǒng)鑒定

慨然法第九頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六G-桿菌的特殊耐藥性

ESBLsAmpC酶嗜麥芽第十頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六嗜血桿菌（苛養(yǎng)菌）

分離培養(yǎng)基：流感嗜血桿菌分離平板（巧克力）；菌落形態(tài)——無色或淺灰色似水滴；G-細(xì)小桿菌或初代分離時(shí)為G-細(xì)長桿菌。作衛(wèi)星試驗(yàn)，鑒定是否為流感嗜血桿菌；掌握藥敏試驗(yàn)方法和步驟。測定Beta內(nèi)酰胺酶的方法和臨床意義。第十一頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六充分了解新版NCCLS藥敏試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，將其貫徹于試驗(yàn)工作之中。其中包含了抗生素藥敏試驗(yàn)的紙片法和稀釋法執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。其中對細(xì)菌特殊耐藥性作了明確解釋并對其耐藥性的確認(rèn)試驗(yàn)也做出了執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。第十二頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六特殊細(xì)菌耐藥的特點(diǎn)MRS的耐藥特點(diǎn)：嚴(yán)格按照NCCLS的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)來篩選和確證葡萄球菌是否為MRS。要能區(qū)分MRSCoP和MRSCoN確證試驗(yàn)中的差別。了解MRS的耐藥機(jī)理是什么？它的耐藥特點(diǎn)什么？對其結(jié)果的評價(jià)；RxESBLs的耐藥特點(diǎn)：嚴(yán)格按照NCCLS的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)來篩選和確證腸桿菌科細(xì)菌是否為ESBLs。掌握ESBLs的篩選和鑒定試驗(yàn)，了解其耐藥機(jī)理，掌握其耐藥特性。對其結(jié)果作出臨床評價(jià)；Rx：對青霉素類、頭胞類及氨曲南耐藥，即使體外試驗(yàn)為敏感。第十三頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六超廣譜?-內(nèi)酰胺酶

(Estended-spectrum?-latamases,ESBLs)ESBLs是質(zhì)粒介導(dǎo)的，為TEM-1，TEM-2和SHV-1的突變酶，包括TEM-3到TEM-26，SHV-2SHV-6共近60種，與TEM-1，TEM-2和SHV-1相比，僅有1到4個(gè)氨基酸的不同，由在分子質(zhì)粒編碼的，質(zhì)粒分子量大約在23Kbs到100Kbs之間，能夠被酶抑制劑所抑制，屬于A類酶(分子生物學(xué)分類)?？梢酝ㄟ^結(jié)合試驗(yàn)轉(zhuǎn)給敏感菌，ESBLs又分為他啶型和噻肟型，在我國主要為噻肟型?，F(xiàn)已在世界各地引起多次醫(yī)院感染爆發(fā)流行。產(chǎn)ESBLs代表菌株為大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌。第十四頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六PRP的耐藥特點(diǎn)：按照NCCLS的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)來篩選和確證肺炎鏈球菌是否為PRP。PRP的耐藥機(jī)理。PRP的耐藥特性。對其結(jié)果作出臨床評價(jià)。Rx：對于青霉素中介或耐藥的菌株，不推薦做氨芐西林，氨芐西林/舒巴坦，頭胞克羅，頭胞他美，頭胞克肟，頭胞唑肟，氯碳頭胞和美羅培南的藥敏試驗(yàn)，因?yàn)槟壳吧袩o可靠的判定標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)該告訴醫(yī)生PRP對這些藥的敏感率較低?！谑屙摚捕?，編輯于2023年，星期六腸球菌（E.C）的耐藥特性注意VRE的檢測，Van6ug/ml,>1菌落=耐藥，通過MIC測定和動力試驗(yàn)產(chǎn)生的色素來區(qū)別獲得性耐藥（VanA,VanB）和那些對van中等水平耐藥的E.C

握E.C的耐藥特性以及充分了解氨基甙類高耐篩選的意義。對其結(jié)果作出正確的臨床評價(jià)；Rx第十六頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六①

了解AmpC酶的耐藥特性；Rx②

沙門氏菌和志賀氏菌警告：不應(yīng)報(bào)告選用1、2代頭孢及氨基甙類，因?yàn)轶w外活性表現(xiàn)有活性，但臨床無效。③

利福平不能單獨(dú)用于化療。否則易產(chǎn)生耐藥性；④

了解一些細(xì)菌的特殊的耐藥譜。如嗜麥芽窄食單胞菌，屎腸球菌等等；第十七頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六①

要具備藥理學(xué)知識，充分了解抗生素，以幫助我們對藥敏結(jié)果作出正確的分析；②

c2.

G+桿菌G-球菌G-桿菌第十八頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期六①

了解AmpC酶的耐藥特性；Rx②

沙門氏菌和志賀氏菌警告：不應(yīng)報(bào)告選用1、2代頭孢及氨基甙類，因?yàn)轶w外活性表現(xiàn)有活性，但臨床無效。③

利福平不能單獨(dú)用于化療。否則易產(chǎn)生耐藥性；④

了解一些細(xì)菌的特殊的耐藥譜。如嗜麥芽窄食單胞菌，屎腸球菌等等；第十九頁，共二十二頁，編輯于2023年，星期