不同檢測系統(tǒng)LDH測定結(jié)果的可比性研究

不同檢測系統(tǒng)LDH測定結(jié)果的可比性研究【摘要】目的探討同一臨床實驗室不同檢測系統(tǒng)間乳酸脫氫酶(LDH)測定結(jié)果是否具有可比性，為血清酶測定的標(biāo)準(zhǔn)化提供實驗數(shù)據(jù)。方法參考NCCLS的EP9-A文件，以日立7170生化分析儀、羅氏原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品組成的檢測系統(tǒng)(已通過ISO/IEC17025實驗室認可）為比較方法，檢測系統(tǒng)1～4為實驗方法，用患者新鮮血清對LDH進行檢測，計算試驗方法(Y)和比較方法(X)之間的相對偏差(SE%)，以CLIA’88規(guī)定的室間質(zhì)量評價允許誤差范圍的1/2為標(biāo)準(zhǔn)，判斷不同檢測系統(tǒng)的可比性。結(jié)果LDH測定結(jié)果各系統(tǒng)的誤差臨床均可以接受。結(jié)論各檢測系統(tǒng)測定LDH結(jié)果具有可比性。當(dāng)同一實驗室同一檢驗項目存在2個以上的檢測系統(tǒng)時，應(yīng)進行方法比對和偏差評估，以保證檢驗結(jié)果的可比性。

【關(guān)鍵詞】乳酸脫氫酶比對試驗

【Abstract】ObjectiveToexplorethecomparabilityoflactatedehydrogenase(LDH)resultsofdifferentbiochemicaldetectingAccordingtoEP9-AfileofNCCLS，differentbiochemicaldetectingsystems，detectingsystem1～4(laboratorymethod)anddetectingsystem5(targetsystem，comparisonmethod，whichincludesHitachi7170biochemicalanalyzer，reagentofRoche，calibratorandcontrollerofRoche，andhasaccreditedbyISO/IEC17025)wereusedtodetectserumLDHtoobtainthecorrelationcoefficientandthelinearequation，thecoefficientandequationwereusedtoevaluatethesystembiasbetweenlaboratorymethodandcomparisoncomparabilityofdifferentinvestigativesystemswasjudgedaccordingtothehalfofCLIA’88ThesystembiasofLDHcouldbeacceptedbetweenseveralinvestigativesystemsandtargetThecomparabilityofLDHresultsin5kindsofdetectingsystemaccordedtoevaluationofclinicaltherearemorethantwosystemsforthesametest，itisnecessarytodomethodcomparisonandbiasestimationinordertoinsurethecomparability.

【Keywords】lactatedehydrogenasemethodcomparison

LDH(lactatedehydrogenase)是一個NAD+的氧化還原酶，用NAD+作為氫受體催化乳酸氧化成丙酮酸。檢測血清酶的方法多樣，如量氣法、比色法、熒光法等，而目前各生化分析儀檢測LDH主要使用的方法是速率法。全自動生化分析儀測定準(zhǔn)確、快速，有利于對臨床的快速診斷和治療。雖然方法一樣，但由于檢測系統(tǒng)［1］(完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、檢驗程序、保養(yǎng)計劃等的組合)不同，測量的結(jié)果會有偏差。為實現(xiàn)LDH測定的溯源性和可比性，對本院(總院和2個分院)5個生化檢測系統(tǒng)LDH測定進行方法比對和偏差評估，現(xiàn)報告如下。

1材料與方法

材料

檢測系統(tǒng)的組成每一檢測項目根據(jù)不同實驗室所使用的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的不同分為5個檢測系統(tǒng)，各檢測系統(tǒng)的組成檢測系統(tǒng)1：島津CL-7200生化分析儀，四川邁克試劑，Randox校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；檢測系統(tǒng)2：羅氏Cobas400生化分析儀，原裝配套試劑，校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；檢測系統(tǒng)3：強生250干生化分析儀，原裝配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；檢測系統(tǒng)4：日立7170生化分析儀，北京中生試劑，校準(zhǔn)品，Randox質(zhì)控品；檢測系統(tǒng)5：日立7170生化分析儀，羅氏原裝試劑，校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

盲樣制備每日常規(guī)工作后收集新鮮血清若干份，制備成1～3份不同濃度的混合血清，分裝于帶蓋的清潔試管內(nèi)。同時選用同一批號的Randox水平2和水平3質(zhì)控血清，按說明書要求復(fù)溶，分裝于帶蓋的清潔試管內(nèi)。質(zhì)控樣本和血清樣本隨機編號，由專人分發(fā)給不同檢測系統(tǒng)，置于當(dāng)天常規(guī)工作中進行測定，連續(xù)20天。

方法因檢測系統(tǒng)5使用的是羅氏原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，參加室間質(zhì)評成績優(yōu)秀，定期校準(zhǔn)，且已通過ISO/IEC17025標(biāo)準(zhǔn)實驗室認可，故以檢測系統(tǒng)5作為比較方法(X)，其余各檢測系統(tǒng)為試驗方法(Y)，進行方法間的對比試驗。試驗前對儀器進行常規(guī)維護與保養(yǎng)，各實驗室按常規(guī)方法進行校準(zhǔn)和質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控在控時進行盲樣測定。每個項目的檢測嚴格按廠商試劑盒的說明書進行。各檢測系統(tǒng)收到盲樣后2h內(nèi)測定完畢，每份樣本只測定1次［2，3］。

數(shù)據(jù)收集與處理(1)不采用已明確有人為誤差的結(jié)果；(2)按EP9-A文件進行方法間離群值檢查；(3)比較方法(X)測定范圍的檢驗：X的分布范圍是否合適，可用相關(guān)系數(shù)(r)做粗略估計，如r≥或r2≥，則認為X范圍合適，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，如r＜，則使用部分個別差異法計算平均偏差；(4)計算線性回歸方程：試驗方法Y=bX+a；(5)計算方法間的系統(tǒng)誤差：根據(jù)臨床使用要求，將各個項目給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc代入回歸方程，計算試驗方法(Y)與比較方法(X)之間的系統(tǒng)誤差(SE)，SE=｜Yc-Xc｜，SE%=SE/Xc×100%。

臨床可接受性能判斷CLIA′88能力驗證計劃的分析質(zhì)量要求規(guī)定LDH的可接受范圍為T±20％，以精密度CV不大于允許誤差的1/3作為日間CV的允許范圍，由方法學(xué)比較評估的SE%不大于允許誤差的1/2屬臨床可接受水平［3］。

統(tǒng)計學(xué)方法不同檢測系統(tǒng)質(zhì)控物結(jié)果的統(tǒng)計采用隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析；不同檢測系統(tǒng)新鮮血清測定結(jié)果的統(tǒng)計采用隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析、可靠性分析、相關(guān)分析和回歸分析。所有數(shù)據(jù)均在Excel2000和軟件包上進行。

2結(jié)果

不同檢測系統(tǒng)LDH的精密度評價根據(jù)Randox水平2和水平3質(zhì)控品連續(xù)20次的盲測結(jié)果，計算LDH均值(x)、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)(CV)來評價不同檢測系統(tǒng)LDH的精密度，結(jié)果見表1。LDH水平2和水平3測定結(jié)果經(jīng)隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析或K個相關(guān)樣本的Friedman雙向評秩方差分析差異均有非常顯著性(P＜)。由表1可以看出，5個不同檢測系統(tǒng)Randox水平2和水平3血清LDH測定的日間CV和總CV均符合臨床要求。

表1不同檢測系統(tǒng)Randox質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)

不同檢測系統(tǒng)新鮮血清LDH測定結(jié)果的比較5個檢測系統(tǒng)新鮮血清LDH測定結(jié)果的方差均齊(P＞)，經(jīng)隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析，各檢測系統(tǒng)間的差異均有非常顯著性(P＜)。結(jié)果見表2。5個檢測系統(tǒng)間新鮮血清LDH測定結(jié)果采用二因素混合模型進行可靠性分析可靠性系數(shù)α為。各檢測系統(tǒng)間的相關(guān)系數(shù)均＞。

表2不同檢測系統(tǒng)血清LDH測定結(jié)果的比較

注：*與檢測系統(tǒng)5比較

各檢測系統(tǒng)可接受性能的評價以檢測系統(tǒng)5作為目標(biāo)檢測系統(tǒng)，將不同LDH的醫(yī)學(xué)決定水平代入各自相應(yīng)的回歸方程，用以判斷各檢測系統(tǒng)的臨床可接受性能，結(jié)果見表3。LDH回歸方程為：(1)系統(tǒng)1(Y)－系統(tǒng)5(X)：y=+；(2)系統(tǒng)2(Y)－系統(tǒng)5(X)：y=；(3)系統(tǒng)3(Y)－系統(tǒng)5(X)：y=；(4)系統(tǒng)4(Y)－系統(tǒng)5(X)：y=。

表3不同檢測系統(tǒng)LDH測定的可接受性能評價

3討論

LDH是一種細胞質(zhì)酶，存在于所有組織中，甚至在微小的組織損傷后會滲漏入血漿中，在許多病理情況下引起血漿LDH水平升高?？侺DH升高不能作為特異器官損傷的標(biāo)志，在肝膽疾病的診斷中不如氨基轉(zhuǎn)移酶，其主要作用是檢測輕微的組織損傷。

隨著檢驗醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，檢驗技術(shù)的不斷分支，檢測項目的不斷增多，檢驗質(zhì)量的控制變得越來越重要，ISO/IEC17025或ISO15189實驗室認可已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗室發(fā)展的必經(jīng)之路［5，6］。ISO15189文件指出：“當(dāng)同樣的檢驗應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點進行，或以上各項均不同時，應(yīng)有確切機制以驗證在整個臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗結(jié)果的可比性”。應(yīng)按適合于程序和設(shè)備特性的規(guī)定周期驗證［4］。要使每一項檢驗項目的結(jié)果符合質(zhì)量要求，除了要有標(biāo)準(zhǔn)及嚴格的質(zhì)量控制外，還必須要對使用的檢測系統(tǒng)做嚴格的選擇和評價，確定它的不精密度、不準(zhǔn)確度、患者結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度、分析干擾、參考范圍和其他需說明的性能。

根據(jù)NCCLS(EP5-A)要求［1］，由表1可以看出本院檢驗科3個實驗室5個檢測系統(tǒng)LDH測定的精密度符合臨床要求。LDH可靠性系數(shù)α(αLDH=)接近1，表明測定結(jié)果穩(wěn)定性及一致性好，受隨機誤差影響的程度小，穩(wěn)定性臨床可以接受。各檢測系統(tǒng)間檢測LDH的相關(guān)系數(shù)均＞，說明各系統(tǒng)測定數(shù)據(jù)分布范圍可以用于回歸統(tǒng)計，可以用它們?nèi)ス烙嫹椒ㄩg的系統(tǒng)誤差，并以醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差來判斷方法間是否具有可比性。表2表明5個檢測系統(tǒng)的LDH測定結(jié)果只有系統(tǒng)3和系統(tǒng)5差異最小(P＝)，因為系統(tǒng)3和系統(tǒng)5均為可溯源的羅氏檢測系統(tǒng)，具有最好的一致性。表1及表2表明我院檢驗科不同檢測系統(tǒng)檢測LDH各系統(tǒng)間總體上雖然差異有顯著性，但臨床均可以接受。筆者沒有完全按照NCCLS(EP5-A)規(guī)定精密度評價和NCCLS(EP9-A)方法學(xué)比較試驗設(shè)計規(guī)定去完成比對試驗［2～4］，嚴格按照NCCLS文件執(zhí)行是今后努力的方向。

【參考文獻】

1馮仁豐.臨床檢驗管理技術(shù)基礎(chǔ).上海：上?？茖W(xué)文獻出版社，2003，5-8，32-34，106-136.

2ofHealthandHuman，medicaidandCLIAprogram：regulationsimplementingthe