溶血性弧菌的檢驗(yàn)課件

一、概述（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。（二）分類

1、按溶血能力分類：（1）甲型（α）溶血性鏈球菌（2）乙型（β）溶血性鏈球菌

（3）丙型（γ）鏈球菌

一、概述2、按血清學(xué)分類主要是根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原進(jìn)行分類，這種方法可靠，但工作復(fù)雜。

根據(jù)族特異性抗原的不同，將乙型（β）溶血性鏈球菌分成ABCDEFGHKLMNOPQRST，共18族在一個(gè)族內(nèi)因表面抗原（即型特異性抗原）不同，又分成若干型。如A族分成60多個(gè)型，B族分為4個(gè)血清型，C族分成13個(gè)血清型。用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。

與人類疾病有關(guān)的大多屬于乙型溶血鏈球菌，其血清型90%屬于A族鏈球菌。

（一）形態(tài)與染色：

1、呈球形或卵圓形，直徑0.5um-1um鏈狀排列（長(zhǎng)短與什么有關(guān)）

2、革蘭氏染色陽(yáng)性，衰老培養(yǎng)物常成陰性

3、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、多數(shù)無(wú)夾膜二、生物學(xué)特性二、生物學(xué)特性

（二）培養(yǎng)特性

1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或?qū)Ｐ詤捬?/p>

2、對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不能良好生長(zhǎng)，（需加血清、血液、腹水等）。大多數(shù)菌株需蘇氨酸、核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。

3、最適溫度37℃PH7.4~7.64、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)（上清下濁）；不溶血菌球，均勻渾濁生長(zhǎng)，如糞鏈菌。

（二）培養(yǎng)特性

5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.5—0.75mm，針尖大小。不同菌型其菌落周圍的溶血現(xiàn)象不同。甲型在菌落周圍出現(xiàn)1-2mm的綠色溶血環(huán)，放冰箱一夜呈透明溶血環(huán)，且溶血環(huán)擴(kuò)大；乙型在菌落周圍有2-3mm的透明溶血環(huán)；丙型菌落周圍不具溶血環(huán)。

二、生物學(xué)特性甲鏈乙鏈丙鏈二、生物學(xué)特性(三)生化特性1、均分糖葡萄糖產(chǎn)酸

2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。

3、能使牛奶產(chǎn)酸而不凝固，不液化明膠。4、乙型溶血鏈球菌山梨醇陰性，不被膽汁溶解、不分解菊糖，可與肺炎雙球菌區(qū)別。4、觸酶陰性可與葡萄球菌區(qū)別。5、A族菌對(duì)桿菌肽敏感，可被其抑制。3、最適溫度37℃PH7.4、觸酶陰性可與葡萄球菌區(qū)別。主要是根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原進(jìn)行分類，這種方法可靠，但工作復(fù)雜。2、食品在加工前就已帶菌、奶牛患化膿性乳腺炎或畜禽局部化膿時(shí)，其奶和肉尸某些部位污染；3、溶血性鏈球菌在血平板中生長(zhǎng)有何特征？S對(duì)氧穩(wěn)定，對(duì)熱和酸敏感。（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶2、溶血性鏈球菌能產(chǎn)生什么毒素和酶？（1）甲型（α）溶血性鏈球菌8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.25mL，混勻，置于36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。一般來(lái)說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：1、均分糖葡萄糖產(chǎn)酸固體檢樣→樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→分純培養(yǎng)→生化鑒定→報(bào)告鏈球菌溶血素O為含有-SH基的蛋白質(zhì)，能破壞白細(xì)胞和血小板，動(dòng)物試驗(yàn)又證實(shí)對(duì)心臟有急性毒害作用，使心臟驟停，抗原性強(qiáng)，感染后2～3周，85%以上病上產(chǎn)生抗“O”抗體。8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.大多數(shù)菌株需蘇氨酸、核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。（1）甲型（α）溶血性鏈球菌8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.二、生物學(xué)特性（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶1、溶血素：有溶解紅細(xì)胞，殺死白細(xì)胞、血小板及毒害心臟的作用，有O和S兩種。鏈球菌溶血素O為含有-SH基的蛋白質(zhì)，能破壞白細(xì)胞和血小板，動(dòng)物試驗(yàn)又證實(shí)對(duì)心臟有急性毒害作用，使心臟驟停，抗原性強(qiáng)，感染后2～3周，85%以上病上產(chǎn)生抗“O”抗體。

S為小分子多肽，相對(duì)分子質(zhì)量較小，故無(wú)抗原性。S對(duì)氧穩(wěn)定，對(duì)熱和酸敏感。血平板所見透明溶血是由“S”所引起，能破壞白細(xì)胞和血小板，給動(dòng)物靜注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起腎小管壞死。

二、生物學(xué)特性（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶2、致熱外毒素：曾稱紅疹毒素(Erythrotoxin)或猩紅熱毒素(Scarletfevertoxin)，是人類猩紅熱的主要致病物質(zhì)，為外毒素。主要有A族鏈球菌產(chǎn)生。小劑量可使局部產(chǎn)生紅疹，大劑量引起全身性紅疹，并伴有發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、周身不適等。

3、透明質(zhì)酸酶：又稱擴(kuò)散因子，可溶解組織間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵襲力。4、鏈激酶：又稱溶纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用。5、殺白細(xì)胞素：在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)可產(chǎn)生?？墒拱准?xì)胞失去動(dòng)力，變?yōu)榍蛐?，最后膨脹破裂?/p>

二、生物學(xué)特性（五）抵抗力抵抗力一般不強(qiáng)，60℃30min即被殺死，對(duì)常用消毒劑敏感。

乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。青霉素是溶血鏈球菌感染的首選藥物。(六)流行病學(xué)與致病性

溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會(huì)對(duì)人類進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。二、生物學(xué)特性一般來(lái)說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：

1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時(shí)造成食品的污染；

2、食品在加工前就已帶菌、奶牛患化膿性乳腺炎或畜禽局部化膿時(shí)，其奶和肉尸某些部位污染；

3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)。化膿性鏈球菌)

三、微生物檢驗(yàn)

（一）檢驗(yàn)程序液體檢樣

固體檢樣→樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→分純培養(yǎng)→生化鑒定→報(bào)告（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)1、采樣：食品：按常規(guī)

2、增菌培養(yǎng)：葡萄糖肉浸液肉湯：一般情況36±1℃24h

匹克氏肉湯：在污染嚴(yán)重時(shí)用

（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)

4、分純培養(yǎng)：血平板37℃24h

5、鏡檢：革蘭氏染色，陽(yáng)性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。三、微生物檢驗(yàn)

（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)6、生化鑒定：

（1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）

吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。三、微生物檢驗(yàn)三、微生物檢驗(yàn)

（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)

6、生化鑒定：

（2）桿菌肽敏感試驗(yàn)將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，37℃18h，出現(xiàn)抑菌帶為陽(yáng)性，據(jù)此可推測(cè)為乙型溶血性鏈球菌。

（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)7、報(bào)告：

根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗(yàn)可報(bào)告：有乙型溶血性鏈球菌生長(zhǎng)。

三、微生物檢驗(yàn)

思考題1、鏈球菌的溶血現(xiàn)象有哪幾個(gè)類型，各類型的溶血特征如何？2、溶血性鏈球菌能產(chǎn)生什么毒素和酶？

3、溶血性鏈球菌在血平板中生長(zhǎng)有何特征？

（一）檢驗(yàn)程序液體檢樣5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.(六)流行病學(xué)與致病性3、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、多數(shù)無(wú)夾膜2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.1、采樣：食品：按常規(guī)葡萄糖肉浸液肉湯：一般情況36±1℃24h3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)（1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）主要是根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原進(jìn)行分類，這種方法可靠，但工作復(fù)雜。（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.在一個(gè)族內(nèi)因表面抗原（即型特異性抗原）不同，又分成若干型。（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶1、按溶血能力分類：2、溶血性鏈球菌能產(chǎn)生什么毒素和酶？主要是根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原進(jìn)行分類，這種方法可靠，但工作復(fù)雜。丙型菌落周圍不具溶血環(huán)。一、概述（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。（二）分類

1、按溶血能力分類：（1）甲型（α）溶血性鏈球菌（2）乙型（β）溶血性鏈球菌

（3）丙型（γ）鏈球菌

（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn)3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)

4、分純培養(yǎng)：血平板37℃24h

5、鏡檢：革蘭氏染色，陽(yáng)性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。三、微生物檢驗(yàn)排列（長(zhǎng)短與什么有關(guān)）2、對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不能良好生長(zhǎng)，（需加血清、血液、腹水等）。（1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）4、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)（上清下濁）；溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)。4、鏈激酶：又稱溶纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用。（1）甲型（α）溶血性鏈球菌一般來(lái)說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：4、分純培養(yǎng)：血平板37℃24h上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。小劑量可使局部產(chǎn)生紅疹，大劑量引起全身性紅疹，并伴有發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、周身不適等。（1）甲型（α）溶血性鏈球菌3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)可使白細(xì)胞失去動(dòng)力，變?yōu)榍蛐?，最后膨脹破裂?、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。主要有A族鏈球菌產(chǎn)生。（2）桿菌肽敏感試驗(yàn)5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.如A族分成60多個(gè)型，B族分為4個(gè)血清型，C族分成13個(gè)血清型。2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。一般來(lái)說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：5、鏡檢：革蘭氏染色，陽(yáng)性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。25mL，混勻，置于36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。1、采樣：食品：按常規(guī)（2）乙型（β）溶血性鏈球菌根據(jù)族特異性抗原的不同，將乙型（β）溶血性鏈球菌分成ABCDEFGHKLMNOPQRST，共18族4、鏈激酶：又稱溶纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用。溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)。S對(duì)氧穩(wěn)定，對(duì)熱和酸敏感。不溶血菌球，均勻渾濁生長(zhǎng)，如糞鏈菌。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5um-1um鏈狀4、乙型溶血鏈球菌山梨醇陰性，不被膽汁溶解、不分解菊糖，可與肺炎雙球菌區(qū)別。2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。(六)流行病學(xué)與致病性S為小分子多肽，相對(duì)分子質(zhì)量較小，故無(wú)抗原性。（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶1、呈球形或卵圓形，(六)流行病學(xué)與致病性（一）檢驗(yàn)程序液體檢樣大多數(shù)菌株需蘇氨酸、核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。主要有A族鏈球菌產(chǎn)生。1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或?qū)Ｐ詤捬醺鶕?jù)族特異性抗原的不同，將乙型（β）溶血性鏈球菌分成ABCDEFGHKLMNOPQRST，共18族3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異?？墒拱准?xì)胞失去動(dòng)力，變?yōu)榍蛐危詈笈蛎浧屏?。?）甲型（α）溶血性鏈球菌4、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)（上清下濁）；25mL，混勻，置于36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。（1）甲型（α）溶血性鏈球菌3、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、多數(shù)無(wú)夾膜1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時(shí)造成食品的污染；（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。4、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)（上清下濁）；3、分離培養(yǎng)：血平板，37℃24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)5、鏡檢：革蘭氏染色，陽(yáng)性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。6、生化鑒定：（1）甲型（α）溶血性鏈球菌1、采樣：食品：按常規(guī)5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。（2）乙型（β）溶血性鏈球菌（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶在一個(gè)族內(nèi)因表面抗原（即型特異性抗原）不同，又分成若干型。（