金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)資料課件

生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0.8-1.0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群；無芽孢，不運(yùn)動(dòng)；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征大多數(shù)菌株能生長在6.5-46℃之間（最適溫度30-37℃）能在pH4.2-9.3之間生長（最適pH為7.0-7.5）；大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，而且在單個(gè)菌株中可能也有變化生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征好氧生長的細(xì)胞產(chǎn)生接觸酶；產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白，例如血紅蛋白、纖維蛋白、卵白、酪朊和多肽類如明膠，水解脂類、吐溫類和磷脂蛋白質(zhì)，并釋放脂肪酸；所有的毒株產(chǎn)生凝固酶，人和動(dòng)物來源的菌株通?？赡掏?、人、馬和豬的血漿。致病性金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：

a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；

b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；

c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；

d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；

e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。致病性

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。致病性葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8-10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征防止金黃色葡萄球菌污染食品存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；36±1℃6hr革蘭氏陽性球菌，直徑為0.丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；所有的毒株產(chǎn)生凝固酶，人和動(dòng)物來源的菌株通?？赡掏?、人、馬和豬的血漿。防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。5-46℃之間（最適溫度30-37℃）能在pH4.大多數(shù)菌株能生長在6.防止金黃色葡萄球菌污染食品平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種類型的菌落數(shù)）對于凝固不完全的菌株，可以通過一些其他實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；36±1℃48hr防止金黃色葡萄球菌污染食品防止金黃色葡萄球菌污染食品分布在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。作為人和動(dòng)物的常見病原菌，其主要存在于人和動(dòng)物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。被污染的食物在室溫20℃-22℃放置5小時(shí)以上時(shí)，病菌大量繁殖，并產(chǎn)生腸毒素。葡萄球菌皮膚感染流行病學(xué)季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。流行病學(xué)

金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。流行病學(xué)腸毒素形成條件：存放溫度，在37°C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。耐受力幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過程對金黃色葡萄球菌都有嚴(yán)重的破壞作用腸毒素可耐受100℃30分鐘不被破壞。對于加工過的食品或食品加工設(shè)備而言，此菌或其腸毒素的存在通常作為衛(wèi)生條件差的一種指標(biāo)。污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

防止金黃色葡萄球菌對奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。污染的控制防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成

應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6小時(shí)，并且食用前要徹底加熱。檢測步驟

---增菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌。36±1℃24hr生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征防止金黃色葡萄球菌污染食品可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；36±1℃24hr兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；對于凝固不完全的菌株，可以通過一些其他實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長防止金黃色葡萄球菌污染食品存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；36±1℃6hr36±1℃24hr防止金黃色葡萄球菌污染食品36±1℃48hr用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.好氧生長的細(xì)胞產(chǎn)生接觸酶；殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；檢測步驟

---分離血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。血平板上其典型菌落呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。檢測步驟

---分離BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢測步驟

---分離在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑玉色，邊緣常為淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。偶然會(huì)遇到不分解脂肪菌株，除無混濁帶及透明圈外，其他外觀基本相同。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。B-P平板檢測步驟

---鑒定金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生凝固酶，因此對其鑒別的主要實(shí)驗(yàn)是測定其凝固酶。對于凝固不完全的菌株，可以通過一些其他實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10）+50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36±1℃

24hr

鏡檢營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果定性檢測36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃6hr

BP平板25g樣品+225ml生理鹽水

選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉湯將有生長的管劃線接種36±1℃

48hr

鏡檢營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果MPN/g(mL)定量檢測（MPN法）36±1℃

48hr

36±1℃

24hr

36±1℃

6hr

適用于檢測可能含有少量金黃色葡萄球菌，卻帶有大量競爭菌的樣品梯度稀釋25g樣品+225ml生理鹽水

選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種類型的菌落數(shù)）36±1℃

48hr

鏡檢營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果金葡菌數(shù)/g(mL)定量檢測（平板法）每種類型至少選取一個(gè)菌落36±1℃

24hr

36±1℃

6hr

適用于檢測金黃色葡萄球菌數(shù)不小于10/g（mL）的食品梯度稀釋3M?Petrifilm?

金黃色葡萄球菌快速檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)程序生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0.8-1.0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群；無芽孢，不運(yùn)動(dòng)；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；偶然會(huì)遇到不分解脂肪菌株，除無混濁帶及透明圈外，其他外觀基本相同。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；36±1℃24hr可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。革蘭氏陽性球菌，直徑為0.中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8-10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；36±1℃24hr腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉湯防止金黃色葡萄球菌污染食品好氧生長的細(xì)胞產(chǎn)生接觸酶；36±1℃6hr卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)36±1℃6hr每種類型至少選取一個(gè)菌落36±1℃48hr生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征偶然會(huì)遇到不分解脂肪菌株，除無混濁帶及透明圈外，其他外觀基本相同。產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白，例如血紅蛋白、纖維蛋白、卵白、酪朊和多肽類如明膠，水解脂類、吐溫類和磷脂蛋白質(zhì)，并釋放脂肪酸；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素防止金黃色葡萄球菌污染食品所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種類型的菌落數(shù)）防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。革蘭氏陽性球菌，直徑為0.丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。36±1℃24hr傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。防止金黃色葡萄球菌污染食品生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征防止金黃色葡萄球菌污染食品大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，而且在單個(gè)菌株中可能也有變化分布在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。作為人和動(dòng)物的常見病原菌，其主要存在于人和動(dòng)物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。被污染的食物在室溫20℃-22℃放置5小時(shí)以上時(shí)，病菌大量繁殖，并產(chǎn)生腸毒素。流行病學(xué)腸毒素形成條件：存放溫度，在37°C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。檢測步驟

---鑒定金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生凝固酶，因此對其鑒別的主要實(shí)驗(yàn)是測定其凝固酶。對于凝固不完全的菌株，可以通過一些其他實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10）+50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36±1℃

24hr

鏡檢營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果定性檢測36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃6hr

BP平板0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群；防止金黃色葡萄球菌污染食品36±1℃24hr兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；36±1℃24hr丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過程對金黃色葡萄球菌都有嚴(yán)重的破壞作用利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌。作為人和動(dòng)物的常見病原菌，其主要存在于人和動(dòng)物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)?？稍?5%氯化鈉和40%膽汁中生長在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，而且在單個(gè)菌株中可能也有變化革蘭氏陽性球菌，直徑為0.革蘭氏陽性球菌，直徑為0.生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征血平板上其典型菌落呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、