血液標(biāo)本采集-醫(yī)學(xué)課件

上課啦浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)院臨床檢驗(yàn)教研室吳曉莉臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)clinicallaboratorytechnology網(wǎng)站

臨床檢驗(yàn)的概念臨床檢驗(yàn)的發(fā)展簡史臨床檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)中的作用

學(xué)習(xí)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)的目的和要求

緒論INTRODUCTION

一、概念（ConceptorDefinition)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中的重要分支，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的主干課程之一“臨床檢驗(yàn)學(xué)”“臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)”

Rick于1986曾撰寫“醫(yī)學(xué)顯微鏡技術(shù)(medicalmicroscopy)”

1995年衛(wèi)生部會議（青島）專家們推薦使用“臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)”臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)借助先進(jìn)的檢測技術(shù)，對來自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查，以簡便、快速的檢測結(jié)果，滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)篩檢疾病的要求二、簡史(History)公元前400年，希臘名醫(yī)Hippocrates感官直覺17世紀(jì)末荷蘭人Leeuwenhook顯微鏡19世紀(jì)末Ehrlich和Romanowsky染色技術(shù)1928年P(guān)apanieolaou脫落細(xì)胞學(xué)現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)從手工檢測步入儀器自動化、電腦化檢測床邊檢測試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化全面的質(zhì)量管理和質(zhì)量保證三、應(yīng)用(Utilization)1．為準(zhǔn)確診斷、及時治療提供證據(jù)

2．為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)3．為預(yù)防疾病提供資料4．為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù)四、臨床檢驗(yàn)的一般方法

目視檢查：直接觀察被檢標(biāo)本理學(xué)檢查：借助物理學(xué)方法化學(xué)檢查：用定性和定量分析的方法顯微鏡檢查：臨檢的主要檢查手段自動化儀器檢查要求

(Request)1．掌握檢驗(yàn)的基礎(chǔ)理論2．掌握檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)技能3．熟悉檢驗(yàn)的方法學(xué)評價4.了解檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考值5.熟悉檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義

第一章血液標(biāo)本采集和血涂片制備第一節(jié)血液標(biāo)本采集和抗凝劑選擇

采血方法靜脈采血皮膚采血真空采血

網(wǎng)站

血量＜0.1ml的檢驗(yàn)項(xiàng)目：RBC計(jì)數(shù)、WBC計(jì)數(shù)、

BPL計(jì)數(shù)、Hb測定等

皮膚采血法Skinpunctureforbloodcollection[采血部位]WHO推薦采取外周血以左手無名指或中指指尖內(nèi)側(cè)1、手指采血：

優(yōu)點(diǎn)：方便→獲較多血量→檢查結(jié)果比較恒定

缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。2、耳垂采血：

優(yōu)點(diǎn)：痛感輕→方便→適用于反復(fù)采集

缺點(diǎn)：血循環(huán)差→受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定

RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。3、其他部位：

拇指、拇趾或足跟采血——半歲以下嬰幼兒皮膚完整處——嚴(yán)重?zé)齻遊采血針]

三棱針或?qū)Ｓ玫摹安裳槨睘楹?，使用前者?yīng)高壓滅菌，一人一針。一、皮膚采血器材（vacuumbloodcollector）

2008-10-21采血器材[注意事項(xiàng)]1、采血部位皮膚完整。2、無菌技術(shù)操作：防采血部位感染，一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。4、多項(xiàng)檢查時，采血次序?yàn)椋築PL計(jì)數(shù)（不擦第一滴血）→RBC計(jì)數(shù)、Hb→WBC計(jì)數(shù)與分類。5、取血用于自動化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入堵塞儀器。

靜脈采血法

(venipunctureforbloodcollection)凡需血量較多的檢查＞0.5ml

如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。[部位]

淺表靜脈均可常用肘部靜脈，不明顯時可用手背、踝部，幼兒可用頸外靜脈。P4網(wǎng)站

[注意事項(xiàng)]1、采血前應(yīng)向病人作適當(dāng)解釋：2、檢查注射器：3、止血帶壓迫時間不能過長：4、抽血時，只能向外抽，不能向內(nèi)推：兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較皮膚采血靜脈采血缺點(diǎn)限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點(diǎn)價廉、快速、操作簡便，標(biāo)本可直接測定標(biāo)本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)三、真空采血法（40年代，美國BD公司）

（vacuumtubeforbloodcollection）套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點(diǎn)：血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，保持血液標(biāo)本的完整性，使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境保護(hù)。缺點(diǎn)：真空采血管價格較高2.真空采血器材

I.采血針2008-10-21

II.持針器2008-10-212008-10-21網(wǎng)站

III.真空采血管2008-10-21血液標(biāo)本采集的質(zhì)量保證一、采血服務(wù)

1.環(huán)境要求

a）空間

b）窗口

2.生物安全

a）防止交叉感染

b）履行環(huán)境消毒

二、患者狀態(tài)要求（自學(xué)）三、采血操作對檢驗(yàn)結(jié)果的影響1.采血時間2.采血部位3.采血體位4.壓脈帶使用5.輸液6.溶血血標(biāo)本溶血：

①注射器和容器：干燥、清潔。②抽血速度不能太快。③抽血時避免產(chǎn)生大量泡沬。④抽血后應(yīng)先拔針頭，再注入。⑤抗凝不能用力振蕩。⑥離心速度不能過高。

一、血液標(biāo)本運(yùn)輸

1.唯一標(biāo)識原則

2.生物安全原則

3.盡快運(yùn)輸原則二、標(biāo)本拒收

血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存與處理三、血液檢驗(yàn)前的預(yù)處理1.分離血清或血漿2.分離細(xì)胞分離后的標(biāo)本：一般應(yīng)置于4℃，保存一個月的標(biāo)本，應(yīng)-20℃冰箱。保存3個月以上的標(biāo)本，分離后應(yīng)該-70℃保存。立即送檢標(biāo)本檢測后的標(biāo)本標(biāo)本信息的保存四、血液標(biāo)本保存

二、抗凝劑選擇1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1：9106mmol/L的濃度和血液1：4化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。ヾ.不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)站

2.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法：草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)(制備正吸漿)。d.不適用于：對凝血因子V保護(hù)功能差，影響PT測定；沉淀物影響自動凝血儀的使用。3.雙草酸鹽抗凝劑

a.抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10（80°C以下烘干）適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）

d.不適于:血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù),電解質(zhì)測定4.肝素（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1：10優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析e.不適用于：WBC和BPL計(jì)數(shù)、血涂片檢查、凝血象檢驗(yàn)。5.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液1：10適用范圍：對血細(xì)胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、

Hct不適用于：影響血小板聚集和白細(xì)胞吞噬功能,

不宜凝血象檢查和血小板功能試驗(yàn)。

物理方法抗凝

脫纖維蛋白：

將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑性狼瘡細(xì)胞檢查。第二節(jié)血涂片制備和細(xì)胞染色血涂片的制備方法血涂片制備的注意事項(xiàng)血液細(xì)胞染色細(xì)胞染色時注意事項(xiàng)一、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：

血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、網(wǎng)織紅、異常細(xì)胞、寄生蟲檢驗(yàn)。

2.血涂片制備步驟：（手工推片法）網(wǎng)站

〈一〉玻片清潔：

1、新玻片處理：有游離堿質(zhì)。

2、用過玻片處理：

3、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，保持清潔、干燥、中性、無油膩。P6〈二〉血涂片制作：揮動使之干燥，而后在血膜上寫編號或病人姓名。

將推玻片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動?！慈涤绊懸蛩兀?/p>

二、血液細(xì)胞染色網(wǎng)站

細(xì)胞染色技術(shù)

（一）染料（天然染料和人工染料）

發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。3.復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料（二）細(xì)胞染色原理：1.物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：

a.染料的化學(xué)成分：助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。b.蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時，

-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。c.周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料。

PH↓→

H＋增多→易與伊紅結(jié)合→染色偏紅

PH↑→

H＋減少→易與美藍(lán)結(jié)合→偏藍(lán)

（三）細(xì)胞染色法的類型

1.普通染色法：經(jīng)物理和/或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合

2.熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡

3.細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等

4.細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分。細(xì)胞免疫化學(xué)染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)）

瑞氏染色法（一）染色原理分兩相進(jìn)行，第一相是酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青

B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。

（二）試劑

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml

磷酸鹽緩沖液（PBS）：

（PH6.4－6.8）磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,

蒸餾水加到1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。網(wǎng)站

1233.染色方法：

a.用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。

b.加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。

c.滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10

分鐘。

d.用清水沖洗，待干后鏡檢。注意事項(xiàng)：

a.血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落

b.染色時間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時間長些效果好。

c.染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。

d.沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時間也不能長。

e.染色過淡，可復(fù)染。

f.染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色

姬姆薩染色法（一）染色原理：基本成分仍然是伊紅和亞甲藍(lán)，改進(jìn)了染料的質(zhì)量，使細(xì)胞核著色好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰，而胞漿和中性顆粒染色較差。（二）試