菌種的使用和管理-課件

菌種的使用和管理

1ppt課件內(nèi)容提要：菌種的質(zhì)量控制和鑒定菌種保藏菌種的使用過程文件及記錄2ppt課件菌種保藏意義目的：保證檢驗中有準備好的菌懸液可以使用。一般需要使用菌懸液的試驗如下：防腐劑效能試驗方法驗證培養(yǎng)基質(zhì)量控制鑒別系統(tǒng)的質(zhì)量控制陽性對照3ppt課件菌種保藏藥品微生物檢驗常用標準菌株枯草芽孢桿菌

Bacillussubtilis[CMCC（B）63501]金黃色葡萄球菌

Staphylococcusaureus[CMCC（B）26003]生孢梭菌

Clostridiumsporogenes[CMCC（B）64941]銅綠假單胞菌

Pseudomonasaeruginosa[CMCC（B）10104]大腸埃希菌

Escherichiacoli[CMCC（B）44102]白色念珠菌

Candidaalbicans[CMCC（F）98001]黑曲霉

Aspergillusniger[CMCC（F）98003]4ppt課件菌種保藏樣品分離菌庫環(huán)境監(jiān)控菌庫標準菌種菌庫CMCC——

中國醫(yī)學菌種保藏中心CMCC（F）或CMCC（B）B—

代表細菌、F—代表真菌ATCC——美國標準菌種收藏所著名的微生物保藏中心，創(chuàng)立于1899年，設(shè)在美國馬里蘭州羅克維爾市。收藏有細菌、真菌、動植物病毒、噬菌體、藻類和原生生物等共計16000株以上的微生物種株。5ppt課件菌種保藏菌種保藏方法不同的微生物受不同的環(huán)境條件影響其特性會發(fā)生改變，故需要確保菌種在合適的儲存條件下保藏。

藥典要求:試驗用菌種應(yīng)采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。

一般的保藏方式如下：冷藏冷凍凍干保藏6ppt課件菌種保藏冷藏2-8℃冰箱保藏，是一種短期、有效儲藏方法。工作菌懸液和稀釋液均用此方法保藏，儲藏時間需要進行相關(guān)的驗證，但必須符合法規(guī)要求。保藏方式可以選擇如下形式：肉湯---營養(yǎng)肉湯等穿刺---一般用于厭氧菌的保藏斜面---營養(yǎng)瓊脂

、改良馬丁培養(yǎng)基劃平板---一般為了得到單顆菌落7ppt課件菌種保藏冷凍一般在低于-70℃冰箱內(nèi)保藏，是一種有效的長期儲藏方法。需要加入保護劑，例如甘油，可以減少冷凍對菌種的傷害。儲藏時間同樣需要進行相關(guān)的驗證。8ppt課件菌種保藏凍干法保藏是一種長期保藏菌種的方法。一般情況下購買的凍干菌種即為此種方法。使用時需要進行溶解、復壯、冷藏。9ppt課件菌種的質(zhì)量控制菌種的質(zhì)量控制效期傳代鑒定標識文件管理10ppt課件菌種的質(zhì)量控制效期確保所有的菌種應(yīng)當在有效期內(nèi)。標簽菌種名稱：沙門氏菌儲藏時間：2009.01.01批號：601844，傳代2：2009.01.01培養(yǎng)基批號：0081230，效期：2012.01.0111ppt課件菌種的質(zhì)量控制傳代試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代）。代的定義：每接種一次即為一代（有在新鮮的培養(yǎng)基上生長過程)傳代示意圖：原始菌種QCS1S2S3第一代12ppt課件菌種的質(zhì)量控制菌種鑒別通過一系列的檢查來確認菌種的純度和活性。鑒別方法:傳統(tǒng)的鑒別方法：菌落形態(tài)、個體形態(tài)、孢子形態(tài)、生化特征等。13ppt課件菌種的質(zhì)量控制培養(yǎng)形態(tài)微觀分析生化鑒定DNA鑒定14ppt課件平板劃線分離法

斜面接種時的無菌操作15ppt課件菌種的質(zhì)量控制標簽每一支菌種或菌液在儲存期內(nèi)均需要有明確的標識。標簽的內(nèi)容應(yīng)包括以下內(nèi)容：冷藏、冷凍日期菌種名稱和編碼批號、效期、傳代代數(shù)菌種名稱：沙門氏菌儲藏時間：2009.01.01批號：601844，傳代2：2009.01.01培養(yǎng)基批號：0081230，效期：2012.01.0116ppt課件菌種的質(zhì)量控制文件管理SOP記錄

能夠證明菌種的整個傳代過程。

包括接收、傳代、使用、銷毀。17ppt課件菌種的質(zhì)量控制注意事項：必須小心處理使用前確認菌種身份根據(jù)生產(chǎn)商說明書復蘇菌種使用接種技術(shù)；不要重復從菌種包裝瓶中移取菌種或重新冷凍菌種。傳代代數(shù)（每接種一次即為一代）18ppt課件菌種的使用過程菌種的采購菌種的接收和儲藏凍干菌種的恢復非凍干菌種的恢復儲備管制備工作菌懸液的制備質(zhì)量控制及菌種編碼菌種傳代示意圖19ppt課件菌種的使用過程

—菌種的采購

所有接收的菌種應(yīng)保證其傳代代數(shù)

（藥典要求使用時不能超過5代）20ppt課件菌種的使用過程

—菌種的接收和儲存

菌種接收時應(yīng)對以下項目進行檢查:包裝完整性菌種名稱菌種編碼批號效期菌種的儲存嚴格按照說明書的要求進行儲藏。所有過程均需要有相應(yīng)的記錄，無記錄表示無任何活動！21ppt課件菌種的使用過程

—凍干菌種的恢復凍干菌種的恢復（原始菌種或叫0代菌種）凍干菌種處于一種深度休眠狀態(tài)，生理特性受到抑制，代謝處于較低狀態(tài)，必須經(jīng)過恢復后才能使用，即將凍干菌種溶解后將其接種于新鮮的營養(yǎng)培養(yǎng)基上，在一定的溫度下培養(yǎng)一段時間。凍干菌種的恢復一般情況下按照說明書的要求進行，如無說明可以參考以下進行：細菌類/酵母類：菌種管外表面消毒（75%酒精）打開，吸取0.3-0.4m營養(yǎng)肉湯溶解后全部吸出，加入適量營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)（細菌30-35℃18-24h；酵母菌20-25℃24-48h）霉菌:打開后，加入適量的無菌水溶解后全部吸出，加入適量的無菌水于20-25℃恢復2-12小時，將菌懸液接種幾個改良馬丁瓊脂斜面上（一般用三角瓶，生長的孢子較多），

于20-25℃7-14天，用含有0.05％吐溫80氯化鈉胨水洗刷到其他無菌試管中。

22ppt課件菌種的使用過程

—非凍干菌種的恢復申請申請非凍干菌種的恢復接種斜面----適用于短期保藏，一般細菌為3個月；真菌為4個月。如果為第一代的菌種，參考凍干菌種進行恢復后制備儲備管進行冷凍保藏。（或僅接種斜面進行傳代）。23ppt課件菌種恢復

干菌種(安瓿)的開啟：24ppt課件菌種的使用過程

—菌懸液的制備申請申請菌懸液的制備菌液的制備：細菌和酵母菌用氯化鈉蛋白胨水進行稀釋；霉菌用0.8％生理鹽水稀釋）標識（唯一性，可以追溯）效期：按照藥典要求，菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2～8℃可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。各實驗室可以根據(jù)自身操作習慣總結(jié)出一套切實可行、快速穩(wěn)定的菌液制備標準程序。25ppt課件菌種的使用申請申請

質(zhì)量控制質(zhì)量控制貫穿于整個傳代過程，只要有傳代發(fā)生，則必須有質(zhì)量控制過程。所有的過程均需要有記錄。

菌種編碼

編碼必須具有唯一性，且可以追溯。例如：凍干菌種編碼ATCC8739/01----ATCC8739表示菌種編碼；01表示接收的第一支