M453營養(yǎng)畢業(yè)論文-14食品質(zhì)量與安全1班陳婉芬翻譯

韶關(guān)學(xué)院課程考核課程名稱：《專業(yè)英語與論文檢索寫作》題目：從猴頭菇的干燥子實體中分離新漆酶翻譯學(xué)生姓名：陳婉芬學(xué)號（院）：英東食品科學(xué)與工程學(xué)院專業(yè)：食品質(zhì)量與安全班級：14食品質(zhì)量與安全1班授課教師姓名及職稱：劉永吉鄒秀容講師完成時間：2017年6月13日從猴頭菇的干燥子實體中分離新漆酶H.X.Wanga,T.B.Ngb,*

a微生物系，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京，中國

b生物化學(xué)系，醫(yī)學(xué)院，香港中文大學(xué)，沙田，新界區(qū)，香港，中國

于2004年6月18日收到

可在線2004年8月3日摘要：具有新型N-末端序列的漆酶，分子量為63kDa，從猴頭蘑菇的干子實體中分離出的對HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(IC50=9.51M)具有抑制活性的作用。采用DEAE-纖維素，CM-纖維素和Q-Sepharose離子交換色譜法和休珀代克斯75快速蛋白質(zhì)液相色譜-凝膠過濾的色譜法。漆酶吸附在DEAE-纖維素和Q-Sepharose上，但未吸附在CM-纖維素上。在pH3-5和50-80℃下觀察到酶的高活性。其活性在pH8和9以及煮沸10分鐘后完全消失。溫度為50℃，pH5.0為最佳活性。?2004ElsevierInc.保留所有權(quán)利。關(guān)鍵詞：漆酶;HIV;蘑菇AnewlaccasefromdriedfruitingbodiesofthemonkeyheadmushroomHericiumerinaceumAbstract:AlaccasewithanovelN-terminalsequence,amolecularmassof63kDa,andinhibitoryactivitytowardHIV-1reversetranscriptase(IC50=9.5lM)wasisolatedfromdriedfruitingbodiesofthemonkeyheadmushroomHericiumerinaceum.AchromatographicprocedureinvolvingionexchangechromatographyonDEAE-cellulose,CM-cellulose,andQ-Sepharoseandfastproteinliquidchromatography-gelfiltrationonSuperdex75wasemployed.ThelaccasewasadsorbedonDEAE-celluloseandQ-SepharosebutunadsorbedonCM-cellulose.HighactivityoftheenzymewasobservedatpH3-5andat50-80℃.ItsactivitywascompletelyabolishedatpH8and9andafterboilingfor10min.Atemperatureof50℃andapHof5.0wereoptimalforitsactivity.?2004ElsevierInc.Allrightsreserved.Keywords:Laccase;HIV;Mushroom目錄摘要 I\o"CurrentDocument"1前言 1離心勻漿，保存得到上清液 1檢測漆酶活性 1分析N-末端氨基酸序列 2測定HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性 2\o"CurrentDocument"結(jié)果 2\o"CurrentDocument"討論 3參考文獻(xiàn) 5從猴頭菇的干燥子實體中分離新漆酶H.X.WangT.B.Ng前言蘑菇富含了各種生物分子，包括凝集素［1,2］，核糖核酸酶［3］，核糖體滅活蛋白［4,5］和多糖。闡述了猴頭蘑菇所含的多糖還具有抗腫瘤活性［6］。然而，關(guān)于其他生物化學(xué)成分還沒有深入了解。漆酶是由木質(zhì)素分解蘑菇產(chǎn)生的一組酶［7,8］。他們發(fā)現(xiàn)在紡織染料，生物傳感器，制漿和污水解毒等方面都發(fā)揮著它的潛在作用［9-14］。盡管或許只有一些蘑菇物種的基因存在眾多的蘑菇物種，但它們有些已被分離出來［15-31］。材料和方法離心勻漿，保存得到上清液將三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液（IM,pH7.4）加入到上清液中，直到三羥甲基氨基甲烷鹽的濃度達(dá)到10mM。將上清液放在5Rcm的DEAE-纖維素（Sigma）柱上進(jìn)行色譜分離，未吸附級分（D1）的用10mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl）緩沖液（pH7.2）洗脫，并丟棄沒有漆酶活性的，而具有漆酶活性的吸附級分（D2）用起始緩沖液中的0.5MNaCl洗脫。用相同的緩沖液洗脫未吸附的蛋白質(zhì)（級分CM1），同時用線性NaCl梯度洗脫吸附的蛋白質(zhì)（級分CM2和CM3）0-1M）的10mMNH4OAc緩沖液（pH4.5）中。在除去沒有漆酶活性的未吸附的蛋白質(zhì)（級分Q1）后，在10mMNH4HCO3緩沖液中用線性濃度（0-1M）的NaCl梯度洗脫吸附的蛋白質(zhì)（級分Q2和Q3）。檢測漆酶活性通過測定2,70-氮雜雙［3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸］二銨鹽（ABTS）的氧化來測定漆酶活性［18］。Shin和Lee的方法的檢測。將酶等分試樣在30℃下，在含有1.54mMABTS的1.3ml67mM乙酸鈉緩沖液（pH4.5）中溫育。在電泳結(jié)束時，用考馬斯亮藍(lán)染色凝膠。使用已用分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品（AmershamBiosciences）校準(zhǔn)的休珀代克斯75（Superdex75）HR10/30柱進(jìn)行FPLC凝膠過濾。分析N-末端氨基酸序列使用HPG1000A埃德曼降解單元和HP1000HPLC系統(tǒng)進(jìn)行氨基酸序列分析。測定HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性鑒于蘑菇漆酶這一活動［33］的報告，純化的漆酶被測試了這項活動。根據(jù)Boehringer-Mannheim（德國）的測定試劑盒提供的說明書進(jìn)行HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性測定，該測定法利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成DNA的能力，從模板/引物雜交聚（A）寡聚（dT）15開始。相對于沒有所述蛋白的控制作為，計算分離出的蛋白質(zhì)的抑制活性的抑制百分比差別不大［33,34］。結(jié)果在10mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl）緩沖液（pH7.4）中吸附在DEAE-纖維素上并用0.5MNaCl洗脫的猴頭菇的子實體提取物的部分，隨后在10-mMNH4OAc緩沖液（pH4.5）中未吸附在CM-纖維素上，在Q-Sepharose上分級分離成小的未吸附峰Q1和兩個較大的吸附峰Q2和Q3（圖1）。該酶在煮沸10分鐘后失去其所有活性。漆酶活性在pH3-5范圍內(nèi)沒有顯著變化。當(dāng)pH升至6,然后升至7時，活性突然下降。在pH8和9（圖5）下，沒有明顯的活性。圖1圖5討論猴頭菇漆酶的分子量落在其他蘑菇漆酶報道的分子量范圍內(nèi)［18,31］。猴頭菇漆酶對DEAE-纖維素的吸附符合來自陸地毛利亞土壤和木質(zhì)素的漆酶吸附在DEAE-葡聚糖纖維素上的報告［16,17］，但與雞油菌，巨大口蘑菌絲和散放多孔菌的漆酶無法結(jié)合DEAE-纖維素［30-32］相反。像吸附在陰離子交換劑上的亞硫酸紙漿廢液-鉻凝膠漆酶［18］一樣，猴頭菇漆酶吸附在Q-Sepharose上。與吸附在H-trapSP和MonoS［18］上的雞油菌漆酶和吸附在CM-纖維素上的巨大口蘑菌絲漆酶相比，猴頭菇漆酶在CM-纖維素上未被吸附。從前面的闡述可以看出，不同的蘑菇漆酶可能具有不同的pH和溫度最佳和離子交換器的色譜行為。猴頭菇漆酶具有其自身的特點。參考文獻(xiàn)[1]F.Yagi,M.Miyamoto,T.Abc,T.Minami,K.Tadera,I.J.Goldstein,Purificationandcarbohydrate-bindingspecificityofAgrocybecylindracealectin,Glycoconj.J.14(1997)281-288.H.X.Wang,T.B.Ng,W.K.Liu,V.E.C.Ooi,S.T.Chang,IsolationandcharacterizationoftwodistinctlectinswithantiproliferativeactivityfromtheculturedmyceliumoftheediblemushroomTricholomamongolicum,Int.J.Pept.ProteinRes.46(1995)508-513.H.Kobayashi,N.Inokuchi,T.Koyama,H.Watenabe,M.Iwami,K.Ohgi,M.Irie,PrimarystructureofthenonspecificandadenylicacidpreferentialribonucleasefromthefruitbodiesofLentinusedodes,Biosci.Biotechnol.Biochem.55(1992)2003-2010.H.X.Wang,T.B.Ng,Isolationandcharacterizationofvelutin,anovellow-molecular-weightribosome-inactivatingproteinfromwintermushroom(Flammulinavelutipes)fruitingbodies,LifeSci.68(2001)2151-2158.S.K.Lam,T.B.Ng,Firstsimultaneousisolationofaribosomeinactivatingproteinandanantifungalproteinfromamushroom(Lyophyllumshimeiji)togetherwithevidenceforsynergismoftheirantifungaleffects,Arch.Biochem.Biophys.3939(2001)271-280.C.S.Evans,M.V.Dutton,F.Guillen,R.G.Veness,Enzymesandsmallmolecularmassagentsinvolvedwithlignocellulosedegradation,FEMSMicrobiol.Rev.13(1994)235-240.C.F.Thurston,Thestructureandfunctionoffungallaccases,Microbiology140(1994)19-26.G.Palmieri,P.Giardina,L.Marzullo,B.Desiderio,G.Nitti,R.Cannio,G.Sannia.StabilityandactivityofaphenoloxidasefromtheligninolyticfungusPleurotusostreatus,Appl.Microbiol.Biotechnol.39(1993)632-636.O.Brenna,E.Bianchi,Immobilizedlaccaseforphenolicremovalinmustandwine,Biotechnol.Lett.16(1994)35-40.A.L.Ghindilis,A.Makower,F.F.Bier,F.W.Scheller,Alaccase-glucosedehydrogenaserecycling-enzymeelectrodebasedonpotentiometricmediatorlesselectrocatalyticdetection,Anal.MethodsInstrum.2(1995)129-132.L.Martirani,P.Giardina,L.Marzullo,G.Sannia,ReductionofphenolcontentandtoxicityinoliveoilmillwastewaterswiththeligninolyticfungusPleurotusostreatus,WaterRes.30(1996)1914-1918.G.Palmieri,P.Giardina,B.Desiderio,L.Marzullo,M.Giamberini,G.Sannia,Anewenzymeimmobilizationprocedureusingcopperalginategel:applicationtoafungalphenoloxidase,EnzymeMicrobiol.Technol.16(1993)151-158.I.D.Reid,M.G.Paice,Biologicalbleachingofkraftpulpsbywhite-rotfungiandtheirenzymes,FEMSMicrobiol.Rev.13(1994)369-376.A.Leonowicz,M.Malinowska,PurificationoftheconstitutiveandinducibleformsoflaccaseofthefungusPholiotamutabilisbyaffinitychromatography,ActaBiochim.Pol.29(1982)219226.M.A.Pickard,D.W.Westlake,Purification,propertiesandsubstratespecificityofaninduciblelaccasefromPolyporusversicolor,Can.J.Biochem.48(1970)1351-1358.K.S.Shin,Y.J.Lee,Purificationandcharacterizationofanewmemberofthelaccasefamilyfromthewhite-rotbasidiomyceteCoriolushirsutus,Arch.Biochem.Biophys.384(2000)109-115.M.Cambria,A.Cambria,S.Ragusa,E.Rizzarelli,Production,purificationandpropertiesofanextracellularlaccasefromRigidoporuslignosus,ProteinExpress.Purif.18(2000)141-147.T.Fukuda,H.Uchida,Y.Takashima,T.Uwajima,T.Kawabata,M.Suzuki,DegradationofbisphenolAbypurifiedlaccasefromTrametesvillosa,Biochem.Biophys.Res.Commun.284(2001)704-706.J.Fernandez-Larrea,J.Stahl,IsolationandcharacterizationofalaccasegenefromPodosporraarserina,Mol.Gen.Genet.252(1996)539-551.S.Chen,W.Ge,J.A.Buswell,Biochemicalandmolecularcharacterizatio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