霉菌酵母菌及空氣檢測

霉菌酵母菌及空氣檢測第一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二方法一、霉菌和酵母計(jì)數(shù)法霉菌數(shù)的測定是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中所得的霉菌落數(shù)。第二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：一、設(shè)備和材料冰箱：2℃～5℃恒溫培養(yǎng)箱：28℃±1℃均質(zhì)器恒溫振蕩器顯微鏡：10×～100×電子天平：感量0.1g無菌錐形瓶:容量500mL、250mL無菌廣口瓶：500mL無菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)無菌平皿：直徑90mm無菌試管:10mm×75mm無菌牛皮紙袋、塑料袋第三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121℃滅菌20min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。1、馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基馬鈴薯(去皮切塊)300g葡萄糖20.0g瓊脂20.0g氯霉素0.1g蒸餾水1000mL制法：將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸餾水至1000mL。第四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補(bǔ)足蒸餾水至1000mL，分裝后，121℃滅菌20min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。2、孟加拉紅培養(yǎng)基蛋白胨5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氫鉀1.0g硫酸鎂（無水）0.5g瓊脂20.0g孟加拉紅0.033g氯霉素0.1g蒸餾水1000mL制法：第五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二第六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二三、檢驗(yàn)程序檢樣→處理→稀釋→平板分離培養(yǎng)→菌落計(jì)數(shù)→報(bào)告四、操作步驟1、樣品的采集用滅菌工具采集可疑霉變食品250g，裝入滅菌容器內(nèi)送檢。第七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二谷物加工制品（包括熟飯、糕點(diǎn)、面包等）、發(fā)酵食品、乳及乳制品以及其他液體食品，用滅菌工具采集可疑霉變食品250g，裝入滅菌容器內(nèi)送檢。糧食（包括糧庫貯糧，糧店或家庭小量存糧）樣品的采集，可根據(jù)糧囤或糧垛的大小和類型，分層定點(diǎn)取樣，一般可分三層五點(diǎn)，或分層隨機(jī)采取不同點(diǎn)的樣品，充分混合后，取500g左右送檢。小量存糧可使用金屬小勺采取上、中、下各部位的混合樣品。第八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

樣品的稀釋在制備10倍系列稀釋樣品勻液時(shí)，用吸管反復(fù)吹吸5次用吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。第九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），每個(gè)稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個(gè)無菌平皿內(nèi)。2、接種同時(shí)分別取1mL樣品稀釋液加入2個(gè)無菌平皿作空白對照。及時(shí)將冷卻至46℃的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，每皿倒15mL～20mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。3、倒培養(yǎng)基第十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二4、培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，28℃±1℃培養(yǎng)5d，觀察并記錄。5、菌落計(jì)數(shù)肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（CFU）表示。霉菌蔓延生長覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。選取菌落數(shù)在10CFU～150CFU的平板。根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。第十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二6、結(jié)果計(jì)數(shù)（1）計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。（2）若所有平板上菌落數(shù)均大于150CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。（3）若所有平板上菌落數(shù)均小于10CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。（4）若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以小于1計(jì)數(shù)。第十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二7、報(bào)告（1）菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。（2）菌落數(shù)大于或等于100時(shí)，前3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時(shí)也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。（3）稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。第十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二方法二、霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法

常用的為郝氏霉菌計(jì)測法，本方法適用于番茄醬罐頭。1、設(shè)備和材料折光儀顯微鏡郝氏計(jì)測玻片：具有標(biāo)準(zhǔn)計(jì)測室的特制玻片測微器：具標(biāo)準(zhǔn)刻度的玻片蓋玻片霉菌可以作為一種指示菌，表明加工制品的原料有霉菌所致的腐爛存在。第十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二2、操作步驟檢樣的制備：取定量檢樣，加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為1.3447～1.3460（即濃度為7.9%～8.8%），備用。顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率90～125倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為1.382mm。涂片：洗凈郝氏計(jì)測玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計(jì)測室，以備觀察。第十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二按100個(gè)視野計(jì)，其中發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲體存在的視野數(shù)，即為霉菌的視野百分?jǐn)?shù)。觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察50個(gè)視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)行觀察。結(jié)果與計(jì)算：在標(biāo)準(zhǔn)視野下，發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲其長度超過標(biāo)準(zhǔn)視野（1.382mm)的1/6或三根菌絲總長度超過標(biāo)準(zhǔn)視野的1/6（即測微器的一格）時(shí)即為陽性（+），否則為陰性（-）第十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二第一節(jié)空氣潔凈技術(shù)1.空氣微生物的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及檢測方法室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)規(guī)定撞擊法≤4000cfu/m3;沉降法≤45cfu/皿。（ GB/T17093-1997）高效過濾器、紫外線消毒，空氣熏蒸法（過氧乙酸）空氣檢測技術(shù)和凈化技術(shù)第十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二檢驗(yàn)環(huán)境中空氣微生物檢測沉降法檢測程序采樣器消毒----倒平皿――采樣(30—150L)----恒溫箱(36±1℃，48h）----計(jì)算菌落數(shù)（cfu/m3）根據(jù)平板上所生長的菌落數(shù)計(jì)算出1m3或1L空氣中的細(xì)菌總數(shù)。第十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二空氣中微生物的測定方法滅菌培養(yǎng)皿、天平、稱量紙、恒溫箱、培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)器材——自然沉降法(1)將肉湯蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、查氏瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號瓊脂培養(yǎng)基溶化后，各倒十五個(gè)平板，冷凝。可以同時(shí)檢測空氣中細(xì)菌、放線菌和霉菌濃度。第十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

XXXXX測定空氣微生物的5點(diǎn)采樣法（2）在一定面積的房間內(nèi)，按下圖的5點(diǎn)所示，每種培養(yǎng)基每個(gè)點(diǎn)放三個(gè)平板，打開皿蓋，暴露于空氣中30分鐘或60分鐘后蓋上蓋子。（3）肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培養(yǎng)1天；查氏瓊脂平板和高氏一號瓊脂平板倒置于28℃培養(yǎng)分別培養(yǎng)24~48h各自計(jì)算其菌落數(shù)，觀察菌落形態(tài)、顏色。第二十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二（4）計(jì)算每m3空氣中微生物的數(shù)量。面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中5分鐘相當(dāng)于10升空氣中的細(xì)菌數(shù)。

奧氏公式：5t100A100010×N××C=式中：C—空氣細(xì)菌數(shù)；

A——捕集面積，cm2；

t——暴露時(shí)間，min；

N——菌落數(shù)，個(gè)。計(jì)算的浮游細(xì)菌數(shù)比實(shí)測的浮游細(xì)菌少。原因是此公式?jīng)]有考慮塵埃粒子大小、數(shù)量、氣流情況、人員密度和活動(dòng)情況。第二十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

根據(jù)落菌數(shù)，記錄空氣中微生物的種類和相對數(shù)量，填寫下表，推算出1m3空氣中細(xì)菌數(shù)。

空氣微生物的測定結(jié)果第二十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二例：對火車站候車室進(jìn)行5min檢測，皿底直徑為9mm的平板經(jīng)37℃24h后所生長的菌落數(shù)為76個(gè)；請計(jì)算火車站候車室空氣的微生物濃度，是否超過標(biāo)準(zhǔn)？公共場所空氣微生物標(biāo)準(zhǔn)（GB）9673-1996公共場所類別撞擊法（CFU/m3）沉降法（CFU/m3）商場、書店≤7000≤75醫(yī)院候診室≤4000≤40候車室、候船室≤7000≤75候機(jī)室≤4000≤40第二十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二室外空氣污染：應(yīng)采取預(yù)防為主，防止污染源擴(kuò)散，控制污水回用和生物固體利用中生物氣溶膠的傳播，如在污水曝氣池上安裝隔離塑料膜，改噴灌為滴灌，以減少含菌氣溶膠的傳播。同時(shí)，對再生污水利用前應(yīng)適當(dāng)消毒。室內(nèi)空氣：某些特殊的環(huán)境需進(jìn)行空氣凈化與消毒，如潔凈車間、微生物實(shí)驗(yàn)室、病房、外科手術(shù)室等?？刂剖覂?nèi)空氣微生物污染常用下述幾種方法。2.空氣的凈化與消毒第二十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二在潔凈車間、微生物實(shí)驗(yàn)室等應(yīng)盡量減少人員的數(shù)目和走動(dòng)，減少開關(guān)門的次數(shù)，以防止將地面微生物揚(yáng)起和外界微生物的帶入。對表面應(yīng)進(jìn)行濕式清掃。被污染的器皿及時(shí)滅菌。控制室內(nèi)空氣微生物污染常用下述幾種方法。(1)控制污染來源第二十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二自然對流通風(fēng)開窗通風(fēng)以排除空氣中微生物。湍流通風(fēng)效果優(yōu)于自然通風(fēng)，但遠(yuǎn)不及過濾層流通風(fēng)。過濾層流通風(fēng)過濾器中的過濾介質(zhì)多為醋酸纖維，空氣穿過濾過層，能除去小到0.3μm的粒子，過濾后的空氣沿平行線以均勻速度流動(dòng)，根據(jù)需要可設(shè)計(jì)成垂直式或水平式層流，可用于微生物操作的超凈工作臺、潔凈病房和手術(shù)室。(2)物理通風(fēng)法除菌效果：

自然對流通風(fēng)為17.4%，

湍流通風(fēng)為46.9%，

過濾層流通風(fēng)為96.7%。第二十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二(3)紫外線照射法

如紫外光照射的強(qiáng)度和時(shí)間得當(dāng)，紫外光可以殺死幾乎所有的傳染因子，它更適用于手術(shù)室、病房、無菌實(shí)驗(yàn)室等處消毒之用。注意定期檢測燈管照射強(qiáng)度，并注意人體的防護(hù)，防止臭氧污染。使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。第二十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二(4)化學(xué)消毒劑消毒

常用的空氣消毒化學(xué)藥品有過氧乙酸、過氧化氫、乳酸、三乙烯乙二醇、丙二醇、次氯酸鈉、甲醛（福爾馬林）等。過氧乙酸的分解產(chǎn)物是乙酸、過氧化氫、水與氧，這些都對人體無害。其缺點(diǎn)是已稀釋的過氧乙酸易分解，宜臨用時(shí)稀釋配制，此外高濃度的過氧乙酸溶液對金屬和紡織品有一定的腐蝕作用。第二十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

噴霧法消毒——用5％~10％過氧乙酸溶液噴霧，如為80m3

的房屋用100~200mL，即可達(dá)到室內(nèi)空氣及物品表面消毒的目的。消毒后應(yīng)密閉lh，經(jīng)通風(fēng)換氣后再進(jìn)入。應(yīng)用過氧乙酸消毒空氣，通常有兩種方式：熏蒸法消毒——將過氧乙酸水溶液置于耐腐蝕的容器中加熱，使其產(chǎn)生過氧乙酸蒸氣和水蒸氣，使室內(nèi)空氣和物品表面達(dá)到消毒目的。過氧乙酸熏蒸用量為0.75~1g/m3

，熏蒸后密閉lh。第二十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二第二節(jié)水中微生物控制技術(shù)

自來水廠常用的方法有：加氯消毒、臭氧消毒、紫外線消毒和微電解消毒。1.目前最常用的是加氯消毒----液氯或漂白粉。

水中加氯后，生成次氯酸（HOCl）和次氯酸根（OCl-）。兩者都有氧化能力，HOCl是中性分子，可能擴(kuò)散到帶負(fù)電的細(xì)菌表面，并滲入細(xì)菌體內(nèi)，借氯原子的氧化作用破壞菌體內(nèi)的酶，而使細(xì)菌死亡，而OCl-帶負(fù)電，難于靠近帶負(fù)電的細(xì)菌，所以雖有氧化能力，但很難起消毒作用。氯加入水中后,一部分被能與氯化合的雜質(zhì)消耗掉,剩余的部分成為余氯。第三十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二(TJ20-76)規(guī)定的余氯量只能保證殺死腸道傳染病菌,即傷寒、霍亂和細(xì)菌性痢疾等幾種疾病。一般說，當(dāng)水的pH值為7左右，鈍化病毒所需的游離性余氯約為殺死一般細(xì)菌的2～20倍，其用量隨病毒的種類而異，并與水溫成反比。殺死赤痢阿米巴需游離余氯3～10mg/L左右，接觸時(shí)間30min。而殺死炭疽桿菌可能需投加更多的氯。

我國生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(TJ20-76)規(guī)定,氯接觸30min后,游離性余氯不應(yīng)低于0.3mg/L。集中式給水處理廠的出廠水除符合上述要求外,管網(wǎng)末梢的水的游離性余氯不應(yīng)低于0.05mg/L。0.05mg/L余氯這個(gè)數(shù)字大致相當(dāng)于5萬個(gè)細(xì)菌重量的1000倍,所以即使每升水重新繁殖出5萬個(gè)細(xì)菌,0.05mg/L的余氯還足以殺死它們。第三十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

干燥空氣放電時(shí)，部分氧氣即轉(zhuǎn)化為臭氧，濃度可達(dá)25mg/L左右。只能現(xiàn)場制備，不能像液氯那樣工業(yè)化生產(chǎn)，因此在費(fèi)用上常高于加氯消毒。2.臭氧消毒

優(yōu)點(diǎn)：不會造成異臭異味;

提高溶解氧量;

氧化有機(jī)物等。缺點(diǎn)：沒有余量，也就沒有后續(xù)的殺菌能力。第三十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)過消毒的水化學(xué)性質(zhì)不變，不會產(chǎn)生臭味和有害健康的產(chǎn)物。缺點(diǎn)：因懸浮物和有機(jī)物干擾殺菌效果和費(fèi)用較高，所以只適用于少量清水的消毒，如優(yōu)質(zhì)水及純水的消毒。3.紫外線消毒（有效波長在200～300nm之間）紫外線穿透的水層深度決定于燈輸出的功率（以mW·cm-2計(jì)）。消毒機(jī)理：①短波射線改變細(xì)胞組成，從而促使細(xì)胞突變死亡；②紫外線的照射改變核酸分子的結(jié)構(gòu)從而殺死細(xì)菌。第三十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二

微電解H2O產(chǎn)生活性氧（如O2-、OH-）和H+。O2-和OH-具有強(qiáng)氧化能力，可殺死細(xì)菌及藻類?；钚匝踹€可與水中氯離子作用生成HOC1，更增強(qiáng)了殺菌能力?；钚匝踹€可氧化水中的NH3和NO2-為NO3-。4.微電解消毒

微電解消毒法已應(yīng)用于優(yōu)質(zhì)飲用水的消毒，尤其是桶裝飲用水因?yàn)榧?xì)菌數(shù)量極少，H2O2可起到抑菌和保質(zhì)作用。也用于高層樓頂上水箱水的消毒和清除管道微生物垢。H2O2是活潑的氧化劑，但H2O2不是對所有的微生物都起作用，有很多好氧菌和兼性厭氧菌都具有過氧化氫酶，能將H2O2分解為O2和H2O而使之失效。第三十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二飲用水中消毒劑常規(guī)指標(biāo)及要求消毒劑名稱與水接觸時(shí)間出廠水中限值出廠水中余量管網(wǎng)末梢水中余量氯氣及游離氯制劑（游離氯,mg/L）至少30min4≥0.3≥0.05一氯胺（總氯，mg/L）至少120min3≥0.5≥0.05臭氧（O3，mg/L）至少12min0.30.02如加氯總氯≥0.05二氧化氯（ClO2，mg/L）至少30min0.8≥0.1≥0.02第三十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二國家標(biāo)準(zhǔn)：新標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行時(shí)間為2007年7月1日GB/T5749-2006《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》規(guī)定生活飲用水中微生物指標(biāo)及限制為:細(xì)菌總數(shù)（CFU/mL）不得超過100個(gè)；總大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出；耐熱大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出；大腸埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出。注：MPN表示最可能數(shù)；CFU表示菌落形成單位。當(dāng)水樣檢出總大腸菌群時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群；水樣未檢出總大腸菌群，不必檢驗(yàn)大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。第三十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二第三節(jié)分質(zhì)供水按不同要求提供不同質(zhì)量的自來水深度制取的水——用于烹調(diào)、飲用等，占每天用水量的5%；一般自來水——用于洗碗、洗菜、洗衣等；中水——用于沖廁所。分質(zhì)供水既是解決水污染問題的需要，又是科技經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平的體現(xiàn)。第三十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期二一、分質(zhì)供水方式1.管道分質(zhì)供水深度處理或優(yōu)質(zhì)地下水獨(dú)立封閉管道用戶：社區(qū)、機(jī)關(guān)、學(xué)校質(zhì)量要求：課直接飲用優(yōu)點(diǎn)：可有效監(jiān)控生產(chǎn)過程可即時(shí)監(jiān)測水質(zhì)第三十八頁，共