甲型HN流感標(biāo)本采集運(yùn)輸與生物安全教學(xué)課件

甲型HN流感標(biāo)本采集運(yùn)輸與生物安全流感病毒有甲、乙、丙三種至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有16個亞型（H1-H16），神經(jīng)氨酸酶9個亞型（N1-N9）豬流感是一種因甲型流感病毒引起的豬呼吸系統(tǒng)疾病目前，已從豬身上分離到四種主要的亞型：H1N1、H1N2、H3N2和H3N1甲型流感病毒H1N1亞型是目前疫情的主要病原體

一、概述

一、概述人流感病毒亞型

H1N1（季節(jié)）H2N2H3N2豬流感病毒亞型

H1N1H1N2H3N2H3N1不同亞型流感病毒宿主分布

二、標(biāo)本的采集

標(biāo)本采集人員:

醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)生、護(hù)士或當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心流行病學(xué)專業(yè)人員負(fù)責(zé)標(biāo)本采集。標(biāo)本采集對象:

新H1N1流感病毒感染疑似病例、可能病例、臨床診斷病例以及其它需要進(jìn)行新H1N1病毒實(shí)驗(yàn)排查者。

二、標(biāo)本的采集標(biāo)本種類:

病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、氣管吸取物、肺活檢物、肺和氣管組織、急性期和恢復(fù)期血清等.

疑似新A/H1N1感染死亡病例:采集肺、氣管、心、肝、脾、腎和淋巴結(jié)等組織(需征得家屬同意)

二、標(biāo)本的采集咽拭子標(biāo)本采集方法：

用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因?yàn)槟绢^柄棉拭子會抑制PCR實(shí)驗(yàn)）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去。標(biāo)本采集后應(yīng)立即放入適當(dāng)?shù)牟蓸右褐械蜏乇４妗?/p>

推薦使用的采樣液：

PH7.4-7.6的Hank’s液。

二、標(biāo)本的采集采咽拭子的器材和容器

鼻咽拭子

插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，緩慢旋轉(zhuǎn)退出，另一鼻孔使用另一個棉簽，將尾部棄去，擰緊管蓋。二、標(biāo)本的采集注意事項(xiàng)采樣登記表信息是否齊全?裝檢材的容器是否符合要求?

耐低溫、外螺旋口、帶密封墊圈采樣液太多或沒有?三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收標(biāo)本的包裝標(biāo)本運(yùn)輸使用A類包裝：三層包裝,

包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，標(biāo)本分為一式三份；標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；送檢單應(yīng)信息完整，放入另一塑料袋內(nèi)。三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收標(biāo)本的保存呼吸道標(biāo)本：

4℃（短時間）；＞48小時-70℃或以下；不推薦-20℃保存。血清標(biāo)本：

3天內(nèi)4℃

長期-20℃

避免反復(fù)凍融采樣前通知接收和檢測單位三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收標(biāo)本的運(yùn)送：

24小時內(nèi)上送；專人專車；帶冰送樣。三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收原則：不污染環(huán)境，不影響檢測要求：及時、穩(wěn)妥、符合國家規(guī)定標(biāo)本應(yīng)冷藏運(yùn)輸國際上感染性實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的包裝和運(yùn)送的要求

使用螺旋蓋容器+密封塑料袋；同一位患者的2份以上的密封的標(biāo)本可以放在同一個塑料袋內(nèi)并封好，不同患者的標(biāo)本不應(yīng)放在同一個袋里；絕緣容器的內(nèi)部應(yīng)該另外裝一些物品以防止塑料容器在運(yùn)送時發(fā)生移動；四、生物安全三層包裝,帶冰送樣。對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離工作，應(yīng)在BSL3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵循三級個人防護(hù)。國際上感染性實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的包裝和運(yùn)送的要求避免反復(fù)凍融采樣前通知接收和檢測單位甲型流感病毒H1N1亞型是目前疫情的主要病原體如有人員在無防護(hù)情況下暴露于甲型H1N1流感確診病例的臨床標(biāo)本或活病毒，應(yīng)考慮在暴露后的7天時間里使用奧司他韋（達(dá)菲）或扎那米韋《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則（WS233-2002）》要求：及時、穩(wěn)妥、符合國家規(guī)定呼吸防護(hù)裝備—檢測合格的N95呼吸器或更高級別的防護(hù)裝備。包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。病毒分離陰性并不能排除感染甲型H1N1病毒。采咽拭子的器材和容器（Zanamivir）進(jìn)行抗病毒藥物預(yù)防。對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離工作，應(yīng)在BSL3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵循三級個人防護(hù)。標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；流感病毒有甲、乙、丙三種原則：不污染環(huán)境，不影響檢測四、生物安全對實(shí)驗(yàn)室的要求:對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí)驗(yàn)工作，在BSL2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。所有樣本操作均應(yīng)在生物安全柜（BSC）內(nèi)進(jìn)行。并進(jìn)行三級個人防護(hù)。

對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離工作，應(yīng)在BSL3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵循三級個人防護(hù)。四、生物安全個人防護(hù)要求生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本和病毒分離物）推薦的個人防護(hù)裝備（要基于特定場所的風(fēng)險評估）呼吸防護(hù)裝備—

檢測合格的N95呼吸器或更高級別的防護(hù)裝備。鞋套前封式手術(shù)服雙層手套眼部防護(hù)裝備（護(hù)目鏡或面罩）

四、生物安全防護(hù)措施普通環(huán)境采樣穿戴防護(hù)服、醫(yī)學(xué)防護(hù)口罩、乳膠手套、帽子；病人采樣加上隔離衣或圍裙、防護(hù)鞋套、眼罩、N95級或N/P/R-100防護(hù)面罩；穿上防護(hù)用品后應(yīng)注意檢查呼吸道防護(hù)的嚴(yán)密性；脫掉防護(hù)用品時應(yīng)先將污染最嚴(yán)重的部分脫掉，最后摘口罩。四、生物安全實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理原則應(yīng)遵循所在機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程內(nèi)的所有廢棄物處置程序進(jìn)行。

121℃、30分鐘高壓滅菌處理

化學(xué)消毒劑浸泡四、生物安全健康監(jiān)測:

所有參與人員均應(yīng)自測發(fā)熱及其他癥狀。感染甲型H1N1流感病毒的癥狀包括咳嗽、喉嚨痛、嘔吐、腹瀉、頭痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不適，應(yīng)立即向上級報告。如有人員在無防護(hù)情況下暴露于甲型H1N1流感確診病例的臨床標(biāo)本或活病毒，應(yīng)考慮在暴露后的7天時間里使用奧司他韋（達(dá)菲）或扎那米韋（Zanamivir）進(jìn)行抗病毒藥物預(yù)防。四、生物安全生物安全條例和規(guī)定:《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則（WS233-2002）》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489－2004）》目前甲型H1N1主要的檢測方法快速流感抗原檢測

B型流感病毒陽性，可排除新H1N1流感無論A型流感病毒抗原陽性或陰性，不能排除新H1N1流感

目前甲型H1N1主要的檢測方法核酸檢測：Real-timeRT-PCR

檢測（美國CDC建立）RT-PCR檢測（病毒病所國家流感中心建立）目前甲型H1N1主要的檢測方法免疫熒光法

免疫熒光試驗(yàn)可以區(qū)分A和B型流感病毒。免疫熒光試驗(yàn)的結(jié)果取決于臨床標(biāo)本的質(zhì)量，操作技能，對檢測甲型H1N1病毒臨床標(biāo)本的敏感性和特異性未知。因此，免疫熒光試驗(yàn)陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為甲型H1N1感染的最后診斷。病毒培養(yǎng)

用MDCK細(xì)胞和SPF雞胚分離甲型H1N1病毒可以診斷感染，但無法為臨床診斷及時提供結(jié)果。病毒分離陰性并不能排除感染甲型H1N1

病毒。血清學(xué)檢測

血凝抑制實(shí)驗(yàn)標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；國際上感染性實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的包裝和運(yùn)送的要求標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；流感病毒有甲、乙、丙三種生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本穿上防護(hù)用品后應(yīng)注意檢查呼吸道防護(hù)的嚴(yán)密性；普通環(huán)境采樣穿戴防護(hù)服、醫(yī)學(xué)防護(hù)口罩、乳膠手套、帽子；標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；病毒培養(yǎng)

用MDCK細(xì)胞和SPF雞胚分離甲型H1N1病毒可以診斷感染，但無法為臨床診斷及時提供結(jié)果。推薦使用的采樣液：目前甲型H1N1主要的檢測方法國際上感染性實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的包裝和運(yùn)送的要求插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，緩慢旋轉(zhuǎn)退出，另一鼻孔使用另一個棉簽，將尾部棄去，擰緊管蓋。推薦的個人防護(hù)裝備（要基于特定場所的風(fēng)險評估）普通環(huán)境采樣穿戴防護(hù)服、醫(yī)學(xué)防護(hù)口罩、乳膠手套、帽子；包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。避免反復(fù)凍融采樣前通知接收和檢測單位生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本目前甲型H1N1主要的檢測方法對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí)驗(yàn)工作，在BSL2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。RT-PCR檢測（病毒病所國家流感中心建立）免疫熒光法

免疫熒光試驗(yàn)可以區(qū)分A和B型流感病毒。目前甲型H1N1主要的檢測方法脫掉防護(hù)用品時應(yīng)先將污染最嚴(yán)重的部分脫掉，最后摘口罩。病人采樣加上隔離衣或圍裙、防護(hù)鞋套、眼罩、N95級或N/P/R-100防護(hù)面罩；（Zanamivir）進(jìn)行抗病毒藥物預(yù)防。包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收絕緣容器的內(nèi)部應(yīng)該另外裝一些物品以防止塑料容器在運(yùn)送時發(fā)生移動；生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本病毒培養(yǎng)

用MDCK細(xì)胞和SPF雞胚分離甲型H1N1病毒可以診斷感染，但無法為臨床診斷及時提供結(jié)果。三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收標(biāo)本運(yùn)輸使用A類包裝：耐低溫、外螺旋口、帶密封墊圈標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本穿上防護(hù)用品后應(yīng)注意檢查呼吸道防護(hù)的嚴(yán)密性；對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離工作，應(yīng)在BSL3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵循三級個人防護(hù)。病毒分離陰性并不能排除感染甲型H1N1病毒。四、生物安全標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；專人專車；《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》眼部防護(hù)裝備（護(hù)目鏡或面罩）因此，免疫熒光試驗(yàn)陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為甲型H1N1感染的最后診斷。免疫熒光法

免疫熒光試驗(yàn)可以區(qū)分A和B型流感病毒。呼吸防護(hù)裝備—檢測合格的N95呼吸器或更高級別的防護(hù)裝備。穿上防護(hù)用品后應(yīng)注意檢查呼吸道防護(hù)的嚴(yán)密性；標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；因此，免疫熒光試驗(yàn)陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為甲型H1N1感染的最后診斷。目前甲型H1N1主要的檢測方法耐低溫、外螺旋口、帶密封墊圈血凝抑制實(shí)驗(yàn)標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；目前甲型H1N1主要的檢測方法三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收對新甲型H1N1流感病毒疑似病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí)驗(yàn)工作，在BSL2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。一、概述三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收H1N1H1N2H3N2H3N1包裝容器有生物安全危害標(biāo)識。普通環(huán)境采樣穿戴防護(hù)服、醫(yī)學(xué)防護(hù)口罩、乳膠手套、帽子；耐低溫、外螺旋口、帶密封墊圈生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本Real-timeRT-PCR檢測（美國CDC建立）RT-PCR檢測（病毒病所國家流感中心建立）標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；三、標(biāo)本包裝、保存、運(yùn)送與接收如有不適，應(yīng)立即向上級報告。要求：及時、穩(wěn)妥、符合國家規(guī)定24小時內(nèi)上送；所有樣本操作均應(yīng)在生物安全柜（BSC）內(nèi)進(jìn)行。血凝抑制實(shí)驗(yàn)因此，免疫熒光試驗(yàn)陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為甲型H1N1感染的最后診斷。免疫熒光試驗(yàn)的結(jié)果取決于臨床標(biāo)本的質(zhì)量，操作技能，對檢測甲型H1N1病毒臨床標(biāo)本的敏感性和特異性未知。標(biāo)本運(yùn)輸使用A類包裝：4℃（短時間）；標(biāo)本上標(biāo)明編號、種類、姓名及采樣日期，再放入塑料袋內(nèi)；要求：及時、穩(wěn)妥、符合國家規(guī)定標(biāo)本運(yùn)輸使用A類包裝：目前甲型H1N1主要的檢測方法不推薦-20℃保存。采樣登記表信息是否齊全?流感病毒有甲、乙、丙三種呼吸防護(hù)裝備—檢測合格的N95呼吸器或更高級別的防護(hù)裝備。生物安全等級三級個人防護(hù)（包括操作臨床標(biāo)本三層包裝,《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》所有樣本操作均