第十一章革蘭氏陰性需氧桿菌詳解演示文稿

第十一章革蘭氏陰性需氧桿菌詳解演示文稿當前第1頁\共有52頁\編于星期五\23點優(yōu)選第十一章革蘭氏陰性需氧桿菌當前第2頁\共有52頁\編于星期五\23點第一節(jié)布氏桿菌屬（Brucella）布氏桿菌是多種動物和人布氏桿菌病的病原。該菌不僅危害畜牧生產(chǎn)，而且嚴重損害人類健康，因此在醫(yī)學或獸醫(yī)學領域都極為重視。當前第3頁\共有52頁\編于星期五\23點一、主要生物學特性

（一）形態(tài)及染色

球桿狀或短桿狀，長0.6～1.5μm，多單在。不形成芽孢和莢膜，無鞭毛不運動。革蘭氏染色陰性?？率先旧ú际蠗U菌呈紅色，其他菌呈綠色或藍色。當前第4頁\共有52頁\編于星期五\23點布氏桿菌當前第5頁\共有52頁\編于星期五\23點（二）生長要求與培養(yǎng)特性

生長要求初代分離營養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)基中常需加入血清、血液、肝湯、葡萄糖或泛酸鈣和赤蘚醇等。需氧，適溫37℃，最適pH6.6～7.4。流產(chǎn)布氏桿菌和綿羊布氏桿菌初代分離時尚需5％～10％CO2環(huán)境。當前第6頁\共有52頁\編于星期五\23點培養(yǎng)特性

初次分離時生長緩慢，需5～10d甚至20～30d才能長出菌落，但實驗室傳代保存的菌株，培養(yǎng)48～72h即可生長良好。肝湯肉湯呈輕微渾濁生長，無菌膜。但培養(yǎng)日久，可形成菌環(huán)。血清肝湯瓊脂形成無色透明、隆起、光滑、濕潤、有光澤、邊緣整齊的圓形小菌落。直徑0.5～1.0mm。當前第7頁\共有52頁\編于星期五\23點（三）生化反應

本菌能分解尿素，能產(chǎn)生硫化氫。根據(jù)不同生物型產(chǎn)生硫化氫的情況、脲酶作用時間和對堿性染料抑制作用的敏感性不同，可鑒別不同種型的布氏桿菌。當前第8頁\共有52頁\編于星期五\23點（四）種和生物型

種

型流產(chǎn)布氏桿菌（Br.abortus）1、2、3、4、5、6、7型

馬爾他布氏桿菌（Br.melitensis）1、2、3型豬布氏桿菌（Br.suis）1、2、3、4、5型綿羊布氏桿菌（Br.ovis）1個沙林鼠布氏桿菌（Br.neotomae）1個犬布氏桿菌（Br.canis）1個田鼠布氏桿菌（Br.microti）？牛布氏桿菌（Br.ovis）？海豹布氏桿菌（Br.pinnipediae）

？海豚布氏桿菌（Br.cetacease）

？當前第9頁\共有52頁\編于星期五\23點（五）抗原性布氏桿菌具有A和M兩種表面抗原，兩者的含量在不同的種型間有差異。流產(chǎn)布氏桿菌以A抗原為主，馬爾他布氏桿菌以M抗原為主，而豬布氏桿菌兩種抗原含量相近。A抗原和M抗原分別能與相應的單相抗血清發(fā)生凝集反應?？捎媚囼炶b別兩種不同的抗原。當前第10頁\共有52頁\編于星期五\23點

二、致病性本菌致布氏桿菌病，可感染60多種動物，包括人類、各種家畜、野生哺乳動物、嚙齒動物、鳥類、爬蟲類、兩棲類和魚類。細菌通過皮膚、口腔、眼結(jié)膜、陰道粘膜等部位侵入體內(nèi)。多數(shù)動物為隱性感染。實驗動物中，豚鼠最易感，小鼠和家兔也可感染。當前第11頁\共有52頁\編于星期五\23點本病特征母畜生殖器官和胎盤發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不孕和多種組織的慢性炎癥（如慢性子宮內(nèi)膜炎、乳房炎、關節(jié)炎等）。公畜睪丸炎、副睪炎幼畜關節(jié)炎當前第12頁\共有52頁\編于星期五\23點流產(chǎn)母牛從陰道排出污灰色或棕紅色有惡臭的分泌物當前第13頁\共有52頁\編于星期五\23點病母牛流產(chǎn)，產(chǎn)出發(fā)育較為完全的死胎當前第14頁\共有52頁\編于星期五\23點病牛流產(chǎn)，產(chǎn)出發(fā)育不全的胎兒，全身腫脹，有出血斑當前第15頁\共有52頁\編于星期五\23點流產(chǎn)的胎兒及胎衣當前第16頁\共有52頁\編于星期五\23點胎衣水腫增厚，呈膠樣浸潤，子葉上有出血當前第17頁\共有52頁\編于星期五\23點感染羊陰囊脹大、水腫當前第18頁\共有52頁\編于星期五\23點病公豬睪丸腫大當前第19頁\共有52頁\編于星期五\23點病豬睪丸萎縮當前第20頁\共有52頁\編于星期五\23點當前第21頁\共有52頁\編于星期五\23點當前第22頁\共有52頁\編于星期五\23點當前第23頁\共有52頁\編于星期五\23點病豬關節(jié)腫脹當前第24頁\共有52頁\編于星期五\23點

三、微生物學診斷布氏桿菌病常表現(xiàn)為慢性或隱性感染，其診斷和檢疫主要依靠血清學檢查及變態(tài)反應檢查。細菌學檢查僅用于發(fā)生流產(chǎn)的動物和其他特殊情況。當前第25頁\共有52頁\編于星期五\23點（一）細菌學檢查

1、病料

流產(chǎn)胎兒的胃內(nèi)容物、胎盤、羊水、陰道分泌物、乳汁和尿液等。

2、診斷方法病料柯氏染色涂片鏡檢分離培養(yǎng)純培養(yǎng)鑒定豚鼠血清抗體當前第26頁\共有52頁\編于星期五\23點（二）血清學檢查1、用已知抗體檢測抗原

用已知抗體檢查病料中的布氏桿菌，或鑒定分離菌是否為布氏桿菌可用：熒光抗體技術反向間接血凝試驗間接炭凝集試驗免疫酶組化法當前第27頁\共有52頁\編于星期五\23點2、用已知抗原檢測抗體

動物感染該菌7～15d出現(xiàn)抗體，檢測抗體是布病診斷和檢疫的主要手段。方法：玻板凝集試驗虎紅平板凝集試驗乳汁環(huán)狀試驗試管凝集試驗補體結(jié)合試驗當前第28頁\共有52頁\編于星期五\23點試管凝集試驗

操作按檢疫規(guī)程進行。牛、馬、駱駝血清凝集價1:100時判為陽性，1:50為可疑。羊、豬、狗等血清凝集價1:50為陽性，1:25為可疑?？梢刹⌒笥?～4周后采血重檢，如仍為可疑反應，牛、羊即可按陽性處理；豬、馬則須視情況而定。當前第29頁\共有52頁\編于星期五\23點虎紅平板凝集試驗取被檢血清和虎紅平板抗原各0.03ml，滴加于玻板上，混勻，在4～10min內(nèi)出現(xiàn)任何程度凝集者即為陽性反應。乳汁環(huán)狀試驗為檢查新鮮乳汁中抗體的方法，操作簡便，準確性較高，常被用于畜群布氏桿菌病的監(jiān)測。當前第30頁\共有52頁\編于星期五\23點補體結(jié)合試驗特異性和敏感性均較凝集試驗高，是慢性布氏桿菌病一種可靠的診斷方法，已作為世界各國清除病畜的必要手段。規(guī)定1:10被檢血清阻止溶血在50％以上，即為陽性反應。因補體結(jié)合反應的操作方法復雜，只在特殊情況下才應用。當前第31頁\共有52頁\編于星期五\23點（三）變態(tài)反應檢查變態(tài)反應現(xiàn)象一般在感染后的20～25d出現(xiàn)，因此不宜作早期診斷。本法適合于動物的大群檢疫，主要用于綿羊和山羊，其次為豬。檢測時，將布氏桿菌水解素0.2ml注射于羊尾根皺襞部或豬耳根部皮內(nèi)，24及48h后各觀察反應一次。若注射部發(fā)生紅腫，即判為陽性反應。此法對慢性病例的檢出率較高。當前第32頁\共有52頁\編于星期五\23點四、免疫防治我國目前用的疫苗：M5弱毒活菌苗可用于牛、羊和鹿布病的預防。皮下注射或氣霧免疫。免疫期羊1年半，牛、鹿各為1年。M90弱毒活菌苗同M5弱毒活菌苗。S2弱毒活菌苗可用于豬、羊、牛等動物，甚至可以接種懷孕動物而不引起流產(chǎn)。免疫方法采用飲水、氣霧和皮下注射3種。免疫期豬為1年，牛和羊均為2年。當前第33頁\共有52頁\編于星期五\23點第二節(jié)伯克氏菌屬（Burkholderia）是新建立的一個屬，該屬成員來自假單胞菌屬Ⅱ群，現(xiàn)有30多種細菌，對人畜致病的主要有鼻疽伯克氏菌及偽鼻疽伯克氏菌。當前第34頁\共有52頁\編于星期五\23點一、鼻疽伯克氏菌（B.mallei）鼻疽伯克氏菌，原名鼻疽假單胞菌，慣稱鼻疽桿菌，為馬、騾、驢等單蹄獸鼻疽病的病原體，也能感染人及其他家畜和多種野生動物。此病可呈急性或慢性經(jīng)過，病變特征為皮膚、鼻腔粘膜、肺臟及其他實質(zhì)器官形成典型的鼻疽結(jié)節(jié)和潰瘍。當前第35頁\共有52頁\編于星期五\23點（一）形態(tài)及染色

G－中等大小桿菌，無芽孢、無莢膜、不運動。單獨散在。美藍染色可見異染顆粒，是本菌的形態(tài)特征。當前第36頁\共有52頁\編于星期五\23點（二）生長要求及培養(yǎng)特性

生長要求專性需氧，普通培養(yǎng)基中生長緩慢，加入適量甘油、血紅蛋白、血液、血清或葡萄糖可促進生長，適溫37℃，最適pH為6.4～6.8。當前第37頁\共有52頁\編于星期五\23點培養(yǎng)特性

甘油肉湯均勻渾濁生長，并逐漸形成灰白色粘稠沉淀，10～15d后液面形成灰白色菌環(huán)或菌膜。甘油瓊脂24～48h后，形成灰白色至灰黃色中等大小菌落，直徑2-3mm。

馬鈴薯瓊脂斜面：48h后，可出現(xiàn)棕黃色蜂蜜樣的粘稠菌苔，隨著時間的延長色澤逐漸變深。當前第38頁\共有52頁\編于星期五\23點（三）致病性本菌在自然條件下主要感染馬、騾、驢等單蹄獸，引起鼻疽病。駱駝、犬、貓等家畜以及獅、虎、豹、狼、狐、貂等野獸也可感染。牛、豬、綿羊、山羊及禽類不感染。人類偶爾也可經(jīng)創(chuàng)傷或吸入含菌材料而受感染，并引起致死性疾病。當前第39頁\共有52頁\編于星期五\23點實驗動物貓和倉鼠最易感，豚鼠次之。接種細菌于雄性豚鼠腹腔后可引起典型的睪丸炎，睪丸腫脹化膿而后破潰，此反應稱為：Strauss反應，具有一定診斷價值。

Strauss反應當前第40頁\共有52頁\編于星期五\23點（四）微生物學診斷包括細菌學檢查、血清學檢查和變態(tài)反應檢查。在進行大規(guī)模檢疫時主要采用臨床檢查、變態(tài)反應和補反相配合的檢查方法，其中任何一種呈陽性，都定為鼻疽病馬。而細菌學檢查只有在特殊病例才被應用。當前第41頁\共有52頁\編于星期五\23點1、變態(tài)反應檢查是鼻疽診斷和檢疫最常用的方法，所用診斷試劑為鼻疽菌素（mallein）。馬感染鼻疽菌后2～3周,對鼻疽菌素呈現(xiàn)陽性反應，以后隨著病程的發(fā)展反應逐漸增強。病馬保持變態(tài)反的時間有的可達8～10年，甚至終生。因此，該方法在鼻疽診斷、檢疫和流行病學調(diào)查上是一種必不可少的手段。當前第42頁\共有52頁\編于星期五\23點變態(tài)反應診斷點眼反應眼瞼試驗皮下試驗皮膚試驗噴霧診斷其中以點眼法最為常用。為我國檢疫規(guī)程主要采用方法。當前第43頁\共有52頁\編于星期五\23點點眼法是將鼻疽菌素3～4滴滴入馬匹一則眼結(jié)膜囊內(nèi)，分別于點眼后3、6、9及24h觀察反應。如眼結(jié)膜紅腫并排出膿性分泌物，即為陽性反應；結(jié)膜無反應或輕度潮紅、流淚或有少量的粘性分泌物判為陰性。當前第44頁\共有52頁\編于星期五\23點點眼法操作簡便，特異性和檢出率都很高，無論是對急性、慢性以及開放型和隱性感染的馬匹均可檢出。故此法最適合于畜群大批檢疫，尤其是以5～6d的間隔反復點眼，檢出率更高。所以點眼一般連續(xù)3次，每次間隔5～6天。點眼法對騾子的檢出率較低。驢的眼結(jié)膜對鼻疽菌素不敏感，一般檢不出。此外，1～2的幼馬駒眼結(jié)膜對鼻疽菌素也不敏感。當前第45頁\共有52頁\編于星期五\23點馬、騾三次點眼檢出率第一次（%）第二次（%）第三次（%）馬60～709598騾16.960.789.3當前第46頁\共有52頁\編于星期五\23點2、血清學檢查常用補體結(jié)合反應。此法特異性很高，凡補反呈陽性的馬，剖檢時95％～99％都有鼻疽病變。但本反應檢出率較低，只能檢出大多數(shù)活動型鼻疽馬；而對于點眼陽性但無臨床癥狀的馬只能檢出10％～25％左右。因此，補反只能作為鼻疽菌素點眼的一種輔助診斷方法，用來檢出其中的活動型病馬，而不能代替鼻疽菌素點眼試驗。當前第47頁\共有52頁\編于星期五\23點五、免疫防治對于鼻疽免疫，迄今為止還沒有研制出可供實用的有效菌苗。一般防制措施是采用全面檢疫，然后將檢出的開放性鼻疽病馬予以撲殺或隔離治療后劃地使役，將檢出的非開放性陽性病馬劃地隔離使役，并培養(yǎng)健康幼駒以更新畜群。當前第48頁\共有52頁\編于星期五\23點第三節(jié)

假單胞菌屬(Pseudomonas)假單胞菌為專性需氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。本屬細菌種類繁多，廣泛存在于土壤、水、植物及腐物中，多為條件致病菌，與多種食物的腐敗有關。與動物疾病有關的主要有銅綠假單胞菌。當前第49頁\共有52頁\編于星期五\23點一、銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（P.aeruginosa），慣稱綠膿桿菌，因能產(chǎn)生綠色水溶性色素，感染創(chuàng)口時可形成綠色膿汁而得名。本菌分布廣泛，土壤和水中、人畜腸道及皮膚亦有存在是化膿性感染及燒傷感染的常見菌。當前第50頁\共有52頁\編于星期五\23點（一）主要生物學特性革蘭氏陰性桿菌1.5-3.0μm