紫外可見(jiàn)分光光法演示文稿

紫外可見(jiàn)分光光度法演示文稿當(dāng)前第1頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)紫外可見(jiàn)分光光度法當(dāng)前第2頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)學(xué)習(xí)目的通過(guò)本章學(xué)習(xí)，為后續(xù)藥物分析、中藥分析課程中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定的學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)。學(xué)習(xí)要點(diǎn)

紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理；電子躍遷類(lèi)型，吸收帶的類(lèi)型、特點(diǎn)及影響因素；Lambert-Beer定律；紫外-可見(jiàn)分光光光度計(jì)的基本構(gòu)造；定性定量方法。當(dāng)前第3頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)目錄第一節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法分析條件的選擇第四節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用當(dāng)前第4頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)紫外-可見(jiàn)分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry，UV-Vis)是基于分子中價(jià)電子躍遷所產(chǎn)生的吸收光譜而進(jìn)行分析的方法，又稱(chēng)紫外-可見(jiàn)吸收光譜法。該法波長(zhǎng)范圍一般在190~800nm。特點(diǎn)：①靈敏度較高，一般為10-7~10-4g/ml；②準(zhǔn)確度較好，相對(duì)誤差一般在0.5%，精度高的可達(dá)0.2%；③儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分析速度較快。概述當(dāng)前第5頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)一、紫外-可見(jiàn)吸收光譜（一）電子躍遷的類(lèi)型1、σ→σ*躍遷2、π→π*躍遷3、n→π*躍遷4、n→σ*躍遷5、電荷遷移躍遷6、配位場(chǎng)躍遷第一節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理電子躍遷所需能量及所處波段示意圖σ→σ*＞n→σ*≈π→π*＞n→π*當(dāng)前第6頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)5、電荷遷移躍遷用電磁輻射照射化合物時(shí)，電子從給與體向接受體相聯(lián)系的軌道上躍遷稱(chēng)為電荷遷移躍遷。某些取代芳烴分子同時(shí)具有電子給與體和電子接受體兩部分，可以產(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移吸收光譜。某些過(guò)渡金屬離子與含生色團(tuán)的試劑反應(yīng)所產(chǎn)生的配合物，以及許多無(wú)機(jī)物離子均可產(chǎn)生電荷遷移躍遷。此類(lèi)吸收帶較寬，吸收強(qiáng)度大，一般εmax＞104。（一）電子躍遷的類(lèi)型當(dāng)前第7頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)6、配位場(chǎng)躍遷第4、5周期過(guò)渡金屬水合離子或過(guò)渡金屬離子與顯色劑所形成的配合物在電磁輻射作用下，吸收適當(dāng)波長(zhǎng)的紫外光或可見(jiàn)光，從而獲得相應(yīng)的吸收光譜。配位場(chǎng)躍遷吸收強(qiáng)度較弱，一般εmax＜102。如Ti(H2O)63+水合離子的配位場(chǎng)躍遷吸收帶λmax為490nm。大多數(shù)鑭系和錒系元素離子的4f或5f電子可發(fā)生f→f*躍遷（配位場(chǎng)躍遷），因而在紫外-可見(jiàn)光區(qū)都有吸收。（一）電子躍遷的類(lèi)型當(dāng)前第8頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)9躍遷類(lèi)型出現(xiàn)波段

吸收強(qiáng)度化合物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)σ→σ*

＜200nm弱

單鍵C－CC－H飽和烴類(lèi)，對(duì)紫外無(wú)貢獻(xiàn)，但可作溶劑π→π*≈200nm強(qiáng)不飽和鍵C＝CC≡C有共軛雙鍵存在時(shí)，π→π*躍遷所需能量降低，波長(zhǎng)紅移n→π*250～500nm弱C＝OC＝N等必須是雜原子直接連在雙鍵上n→σ*≈200nm弱C－OHC－NH2C－SC－X含有未共用電子對(duì)的基團(tuán)連接在σ鍵上雜原子極性↑，λ紅移雜原子數(shù)目↑，λ紅移電子躍遷類(lèi)型及特點(diǎn)當(dāng)前第9頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、吸收光譜（吸收曲線(xiàn)）2、生色團(tuán)3、助色團(tuán)4、藍(lán)移、紅移5、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)（二）紫外-可見(jiàn)吸收光譜中的常用術(shù)語(yǔ)當(dāng)前第10頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、吸收光譜（吸收曲線(xiàn)）(1)最大吸收波長(zhǎng)（λmax）吸收曲線(xiàn)上的最大吸收峰所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)。(2)最小吸收波長(zhǎng)（λmin）吸收曲線(xiàn)上的最低部位的谷所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)。(3)肩峰（λsh）吸收峰上的曲折處稱(chēng)為肩峰。(4)末端吸收在吸收曲線(xiàn)的最短波長(zhǎng)處呈現(xiàn)強(qiáng)吸收而不成峰形的部分稱(chēng)為末端吸收。當(dāng)前第11頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中含有n→π*、π→π*躍遷的基團(tuán)，能在紫外-可見(jiàn)光范圍內(nèi)產(chǎn)生吸收的基團(tuán)。如C=C、C=O、－N=N－等簡(jiǎn)單的雙鍵或叁鍵，以及C＝O、C＝N、C＝S、N＝O、－NO2等有雜原子滲入的雙鍵或共軛雙鍵。2、生色團(tuán)當(dāng)前第12頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)含有非成鍵電子的雜原子飽和基團(tuán)，本身不能吸收波長(zhǎng)大于200nm的輻射，但與發(fā)色團(tuán)或飽和烴相連時(shí)，能使生色團(tuán)的吸收峰向長(zhǎng)波方向位移并增強(qiáng)其吸收強(qiáng)度的基團(tuán)。如－NH2、－OH、－NR2、－OR、－SH、－SR、－Cl、－Br等。這些基團(tuán)中的n電子能與生色團(tuán)中的π電子相互作用（可能產(chǎn)生p-π共軛），使π→π*躍遷能量降低，躍遷幾率變大。3、助色團(tuán)當(dāng)前第13頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(1)藍(lán)移（紫移、短移）因化合物的結(jié)構(gòu)改變或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向短波方向移動(dòng)的現(xiàn)象

(2)紅移（長(zhǎng)移）因化合物的結(jié)構(gòu)改變或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)的現(xiàn)象4、藍(lán)移、紅移當(dāng)前第14頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(1)增色效應(yīng)由于化合物的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化或外界因素的影響，使化合物的吸收強(qiáng)度增大的現(xiàn)象(2)減色效應(yīng)由于化合物的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化或外界因素的影響，使化合物的吸收強(qiáng)度減小的現(xiàn)象5、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)當(dāng)前第15頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（三）吸收帶依據(jù)電子躍遷和分子軌道類(lèi)型，吸收帶可分為：1、R帶——Radikal(基團(tuán))2、K帶——Konjugation(共軛作用)3、B帶——benzenoid(苯)4、E帶——芳香族化合物特征吸收帶

當(dāng)前第16頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、R帶——Radikal(基團(tuán))由含雜原子不飽和基團(tuán)（C＝O、－NO、－NO2、－N＝N

－）的n→π*躍遷引起。吸收峰處于較長(zhǎng)波長(zhǎng)范圍（250~500nm）內(nèi)，吸收強(qiáng)度中等（ε＜100）。當(dāng)前第17頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、K帶——Konjugation(共軛作用)由共軛雙鍵中π→π*躍遷引起。吸收峰出現(xiàn)在200nm以上，吸收強(qiáng)度大（ε＞105）。隨著共軛雙鍵的增加，吸收峰紅移，吸收強(qiáng)度有所增加。如丁二烯λmax=217nm為K帶。當(dāng)前第18頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)3、B帶——benzenoid(苯)芳香族（包括雜芳香族）特征吸收帶。由苯等芳香族化合物的π→π*躍遷所引起的吸收帶之一。吸收峰出現(xiàn)在230~270nm之間，中心波長(zhǎng)256nm。在極性溶劑中，B帶精細(xì)結(jié)構(gòu)變得不明顯或消失。

苯的紫外吸收光譜（異辛烷溶劑中）當(dāng)前第19頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)4、E帶——芳香族化合物特征吸收帶

由苯環(huán)結(jié)構(gòu)中3個(gè)乙烯的環(huán)狀共軛系統(tǒng)的π→π*躍遷所引起。分為E1和E2兩個(gè)吸收帶。E1吸收帶約在184nm，εmax=60000，強(qiáng)吸收帶。E2吸收帶在204nm以上，εmax=8000，強(qiáng)吸收帶。

苯的紫外吸收光譜（異辛烷溶劑中）當(dāng)前第20頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)電子結(jié)構(gòu)化合物躍遷λmax（nm）εmax吸收帶σ乙烷σ→σ*13510000

π乙烯π→π*16510000

π乙炔π→π*1736000

π和n丙酮π→π*約16016000

n→σ*1949000

n→π*27915Rπ-πCH2=CH-CH=CH2π→π*21721000Kπ-π和nCH2=CH-CHOπ→π*21011500K

n→π*31514R芳香族π苯芳香族π→π*約18060000E1

同上約2008000E2

同上255215B一些化合物的電子結(jié)構(gòu)、躍遷和吸收帶當(dāng)前第21頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)221、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜2、影響紫外吸收光譜的主要因素（四）紫外-可見(jiàn)吸收光譜與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系當(dāng)前第22頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)23(1)飽和化合物飽和碳?xì)浠衔镏挥笑译娮?，因此只能產(chǎn)生σ→σ*躍遷，需要能量較大，吸收的波長(zhǎng)通常在150nm左右的真空紫外光區(qū)。含有O、N、S、X等雜原子的飽和化合物，除σ電子外，還有n電子，可發(fā)生n→σ*躍遷，在200nm附近有弱吸收，通常為末端吸收。僅少數(shù)化合物（如烷基碘）的λmax為259nm（εmax=400）。在200~400nm的近紫外區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收（常稱(chēng)為透明）。在紫外吸收光譜分析中常作溶劑。1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜當(dāng)前第23頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)24(2)不飽和烴及共軛烯烴含孤立雙鍵或叁鍵的簡(jiǎn)單不飽和脂肪化合物，可以產(chǎn)生σ→σ*和π→π*兩種躍遷。最大吸收波長(zhǎng)λmax小于200nm。具有共軛體系的不飽和化合物，共軛體系越長(zhǎng)，躍遷時(shí)所需能量越小，吸收峰紅移越顯著。如1,3,5,7,9,11-十二烷基六烯λmax為364nm，εmax為138000。1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜當(dāng)前第24頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(3)羰基化合物羰基化合物含有C=O基團(tuán)，可發(fā)生n→σ*、n→π*和π→π*躍遷。其中n→π*躍遷所需要能量較低，吸收波長(zhǎng)在近紫外光區(qū)或紫外光區(qū)，ε為10~100。醛、酮、羧酸及其衍生物(酯、酰胺、酰鹵等)，均屬于這類(lèi)化合物的吸收類(lèi)型。α、β-不飽和醛、酮，由于C=O和C=C雙鍵共軛，使π→π*躍遷紅移至200nm以上，ε約為104；而n→π*躍遷紅移至310~350nm（ε＜100）。如CH2=CH-CHO，共軛π→π*躍遷λmax為210nm，n→π*躍遷λmax為315nm。1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜當(dāng)前第25頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(4)芳香族化合物苯具有環(huán)狀共軛體系，在紫外光區(qū)，由π→π*躍遷產(chǎn)生E1帶、E2帶和B帶3個(gè)吸收帶。B帶是芳香族化合物的特征。當(dāng)苯環(huán)上引入－NH2、－OH、－CHO、－NO2基團(tuán)時(shí)，苯的B帶顯著紅移，吸收強(qiáng)度增大。如果引入的基團(tuán)帶有不飽和雜原子時(shí)，則產(chǎn)生了n→π*躍遷的新吸收帶。如硝基苯、苯甲醛的n→π*躍遷的吸收波長(zhǎng)分別為330nm和328nm。1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜當(dāng)前第26頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、影響紫外吸收光譜的主要因素分子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和外部環(huán)境等各種因素對(duì)吸收譜帶也有一些，主要表現(xiàn)為譜帶位移、譜帶強(qiáng)度的變化、譜帶精細(xì)結(jié)構(gòu)的改變等。(1)位阻影響(2)跨環(huán)效應(yīng)(3)溶劑效應(yīng)(4)體系pH值的影響當(dāng)前第27頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(1)位阻影響化合物中若有兩個(gè)生色團(tuán)產(chǎn)生共軛效應(yīng)，可使吸收帶長(zhǎng)移。但如果兩個(gè)生色團(tuán)由于立體阻礙妨礙它們處于同一平面上，就會(huì)影響共軛效應(yīng)。二苯乙烯由于順式結(jié)構(gòu)有立體阻礙，苯環(huán)不能與乙烯雙鍵在同一平面上，不易產(chǎn)生共軛，因此反式結(jié)構(gòu)的K帶λmax比順式明顯紅移，且吸收系數(shù)也增加。2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第28頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)

二苯乙烯順式反式異構(gòu)體的紫外吸收光譜2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第29頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(2)跨環(huán)效應(yīng)跨環(huán)效應(yīng)指非共軛基團(tuán)之間的相互作用。如對(duì)亞甲基環(huán)丁酮在214nm處出現(xiàn)一中等強(qiáng)度的吸收帶，同時(shí)284nm處出現(xiàn)R帶。這是由于結(jié)構(gòu)中雖然雙鍵與酮基不產(chǎn)生共軛體系，但適當(dāng)?shù)牧Ⅲw排列，使羰基氧的孤電子對(duì)與雙鍵的π電子發(fā)生作用，相當(dāng)于n→π*躍遷的R帶向長(zhǎng)波移動(dòng)。對(duì)亞甲基環(huán)丁酮2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第30頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(3)溶劑效應(yīng)n→π*隨溶劑極性的增大，吸收峰向短波移動(dòng)。π→π*

隨溶劑極性的增大，吸收峰向長(zhǎng)波移動(dòng)。

極性溶劑對(duì)兩種躍遷能級(jí)差的影響示意圖2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第31頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)溶劑極性對(duì)異丙叉丙酮的兩種躍遷吸收峰的影響躍遷類(lèi)型正己烷三氯甲烷甲醇水π→π*

230nm238nm237nm243nmn→π*329nm315nm309nm305nm

對(duì)稱(chēng)四嗪的吸收光譜a.蒸氣態(tài)中b.環(huán)己烷中c.水中極性溶劑往往使吸收峰的精細(xì)結(jié)構(gòu)消失2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第32頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(4)體系pH值的影響體系酸堿度對(duì)酸堿性有機(jī)化合物吸收光譜的影響普遍存在。如酚類(lèi)化合物由于體系pH值不同，其解離情況不同，而產(chǎn)生不同的吸收光譜。λmax210.5nm（εmax6200）236nm（εmax9400）270nm（εmax1450）287nm（εmax2600）2、影響紫外吸收光譜的主要因素當(dāng)前第33頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)二、朗伯-比爾定律朗伯-比爾定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。如果濃度c以物質(zhì)的量濃度（mol/L）表示，則公式可以寫(xiě)成其中ε稱(chēng)為摩爾吸收系數(shù)，單位為L(zhǎng)/（mol·cm）。如果濃度c以質(zhì)量百分濃度（g/100ml）表示，則公式可以寫(xiě)成

其中稱(chēng)為百分吸收系數(shù)，單位為100ml/（g·cm）。吸收系數(shù)兩種表示方式之間的關(guān)系是：（一）數(shù)學(xué)表達(dá)式及物理意義當(dāng)前第34頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)例某種從中藥提取物分離純化制得的有效成分，濃度為12.6μg/ml，用1cm吸收池，在最大吸收波長(zhǎng)238nm處測(cè)得其吸光度為0.437，試計(jì)算其（λmax）；若該組分的分子量是264，計(jì)算其ε（λmax）。解：已知c=12.6μg/ml=12.6×10-6×100=1.26×10-3(g/100ml)朗伯-比爾定律公式運(yùn)用當(dāng)前第35頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、化學(xué)因素2、光學(xué)因素（非單色光，雜散光，散射光和反射光，非平行光）（二）偏離朗伯-比爾定律的因素當(dāng)前第36頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)吸光物質(zhì)可因濃度的改變而發(fā)生離解、締合、溶劑化以及配合物生成等變化，使吸光物質(zhì)的存在形式發(fā)生變化，從而偏離朗伯-比爾定律。C6H5COOH＋H2O=C6H5COO－＋H3O＋λmax（nm)273

268εmax

[L/(mol·cm)]

970

560稀釋溶液或改變?nèi)芤簆H值時(shí)，吸收波長(zhǎng)及吸收系數(shù)都會(huì)改變。1、化學(xué)因素當(dāng)前第37頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、光學(xué)因素(1)非單色光(2)雜散光

(3)散射光和反射光(4)非平行光當(dāng)前第38頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)(1)非單色光比爾定律只適用于單色光，實(shí)際用于測(cè)量的都是具有一定譜帶寬度的復(fù)合光，譜帶寬度越小，單色性越好。譜帶寬度應(yīng)選擇曲線(xiàn)較為平坦的最大吸收波長(zhǎng)a處測(cè)定2、光學(xué)因素當(dāng)前第39頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、光學(xué)因素(2)雜散光

從單色器得到的單色光中，還有一些不在譜帶范圍內(nèi)的、與所需波長(zhǎng)相隔甚遠(yuǎn)的光，稱(chēng)為雜散光。它是由于儀器光學(xué)系統(tǒng)的缺陷或光學(xué)元件受灰塵、霉蝕的影響而引起的。在透光率很弱時(shí)，雜散光會(huì)產(chǎn)生明顯的作用。在接近紫外末端吸收處，雜散光的比例相對(duì)增大，從而干擾測(cè)定，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)假峰。當(dāng)前第40頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、光學(xué)因素(3)散射光和反射光吸光質(zhì)點(diǎn)對(duì)入射光有散射作用，吸收池內(nèi)外界面之間入射光通過(guò)時(shí)會(huì)有反射作用。散射和反射作用致使透射光強(qiáng)度減弱。真溶液散射作用較弱，可用空白進(jìn)行補(bǔ)償?；鞚崛芤荷⑸渥饔幂^強(qiáng)，影響結(jié)果測(cè)定，故要求被測(cè)溶液為澄清溶液。當(dāng)前第41頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、光學(xué)因素(4)非平行光傾斜光通過(guò)吸收池的實(shí)際光程將比垂直照射的平行光的光程長(zhǎng)，使吸光度增加，影響測(cè)量值。當(dāng)前第42頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)透光率測(cè)量誤差（ΔT）來(lái)自?xún)x器的噪聲。濃度測(cè)量結(jié)果的相對(duì)誤差（Δc/c）與透光率測(cè)量誤差關(guān)系可由朗伯-比爾定律導(dǎo)出：濃度測(cè)量的相對(duì)誤差取決于透光率T和透光率測(cè)量誤差ΔT的大小。相對(duì)誤差與透光率的關(guān)系（三）透光率測(cè)量誤差當(dāng)前第43頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)一、主要部件光源單色器吸收池檢測(cè)器信號(hào)顯示系統(tǒng)第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)當(dāng)前第44頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（一）光源光源的作用是提供激發(fā)能，使待測(cè)分子產(chǎn)生吸收。1、光源的要求發(fā)射連續(xù)輻射光；有足夠的輻射強(qiáng)度及良好的穩(wěn)定性；輻射強(qiáng)度隨波長(zhǎng)的變化應(yīng)盡可能?。还庠吹氖褂脡勖L(zhǎng)，操作方便。當(dāng)前第45頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（一）光源2、光源的種類(lèi)常用的光源有熱輻射光源（如鎢燈、鹵鎢燈）和氣體放電光源（如氫燈和氘燈）兩類(lèi)。(1)鎢燈和碘鎢燈：340~2500nm，可見(jiàn)光區(qū)內(nèi)輻射強(qiáng)度與工作電壓的4次方成正比。(2)氫燈和氘燈：160~375nm，氘燈比同功率的氫燈光強(qiáng)度大3~5倍。(3)激光紫外光源：高強(qiáng)度、高單色性，氬離子激光器、可調(diào)諧染料激光器。當(dāng)前第46頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)單色器是從光源的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要特點(diǎn)是產(chǎn)生光譜純度高、色散率高且波長(zhǎng)可調(diào)節(jié)。由進(jìn)光狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、聚焦元件和出光狹縫等幾個(gè)部分組成，核心部件是色散元件。（二）單色器

單色器光路示意圖當(dāng)前第47頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)棱鏡色散與光柵色散（二）單色器1、色散元件(1)棱鏡：利用折射率差別制成。(2)光柵：利用光的衍射與干涉作用制成。每1mm玻璃上刻600~1200條槽。每條刻線(xiàn)相當(dāng)于1條狹縫，光在未刻部分發(fā)生反射，各反射光束間的干涉引起色散。當(dāng)前第48頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（二）單色器2、準(zhǔn)直鏡以狹縫為焦點(diǎn)的聚光鏡。將進(jìn)入單色器的發(fā)射光變成平行光；將色散后的平行單色光聚集于出光狹縫。當(dāng)前第49頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（二）單色器3、狹縫狹縫寬度直接影響單色光的純度。狹縫過(guò)寬，單色光不純；狹縫過(guò)窄，光通量過(guò)小，靈敏度降低。定性分析宜采用較小的狹縫寬度。定量分析宜采用較大的狹縫寬度。當(dāng)前第50頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（二）單色器4、雜散光及其消除雜散光：指出射光束中混有的與儀器所指示的波長(zhǎng)相差較大的光波。雜散光會(huì)嚴(yán)重影響吸光度測(cè)定。雜散光產(chǎn)生的原因：各光學(xué)部件和單色器的外殼內(nèi)壁的反射；大氣或化學(xué)部件表面塵埃的散射；光學(xué)元件霉變、腐蝕。可將單色器用罩殼封閉起來(lái)，罩殼內(nèi)涂有黑體以吸收雜散光。當(dāng)前第51頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)即比色皿，用于盛放待測(cè)溶液的容器。1、光學(xué)玻璃吸收池可見(jiàn)光區(qū)2、熔融石英吸收池可見(jiàn)光區(qū)、紫外光區(qū)用于盛放供試液和參比液的比色皿，應(yīng)厚度相同，兩只比色皿的透光率之差小于0.5%。（三）吸收池當(dāng)前第52頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)將光信號(hào)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)的光電轉(zhuǎn)換元件，其產(chǎn)生的電信號(hào)與照射光強(qiáng)度成正比。要求：在測(cè)量范圍內(nèi)具有高靈敏度；對(duì)輻射能量的響應(yīng)快、線(xiàn)性關(guān)系好、線(xiàn)性范圍寬；對(duì)不同波長(zhǎng)的輻射影響性能相同且可靠；穩(wěn)定性好，噪聲水平低。（四）檢測(cè)器當(dāng)前第53頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、光電池2、光電管3、光電倍增管4、光二極管陣列檢測(cè)器（四）檢測(cè)器當(dāng)前第54頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、光電池硒光電池：敏感光區(qū)300~800nm，易疲勞，壽命短。硅光電池：紫外光區(qū)及可見(jiàn)光區(qū)。（四）檢測(cè)器當(dāng)前第55頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、光電管以一彎成半圓柱形的金屬片為陰極，陰極內(nèi)表面鍍有堿金屬或堿金屬氧化物等光敏層；在圓柱形的中心置一金屬絲為陽(yáng)極，可接受陰極釋放的電子。兩電極密封于玻璃管或石英管內(nèi)并抽真空。紅敏光電管(鍍有銀和氧化銫)可用于625~1000nm波長(zhǎng)。藍(lán)敏光電管(鍍有銻和銫)可用于200~625nm波長(zhǎng)。光電管靈敏度高，光敏范圍寬，不易疲勞。（四）檢測(cè)器

光電管檢測(cè)器示意圖當(dāng)前第56頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)3、光電倍增管一種加上多級(jí)倍增電極的光電管。外殼由玻璃或石英制成，陰極表面涂有光敏物質(zhì)，在陰極與陽(yáng)極之間裝有一系列次級(jí)電子發(fā)射極，即電子倍增極。輻射光子撞擊陰極時(shí)發(fā)射光電子，該電子被電場(chǎng)加速并撞擊第一倍增極，撞出更多電子，依次進(jìn)行，最后陽(yáng)極收集到的電子數(shù)是陰極發(fā)射電子的105~106倍。（四）檢測(cè)器

光電倍增管示意圖當(dāng)前第57頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)光電管輸出的電信號(hào)很弱，需經(jīng)過(guò)放大才能以某種方式將測(cè)量結(jié)果顯示出來(lái)，一般的分光光度計(jì)多具有熒屏顯示、結(jié)果打印及吸收曲線(xiàn)掃描等功能。現(xiàn)代的分光光度計(jì)裝備有計(jì)算機(jī)光譜工作站，可對(duì)數(shù)字信號(hào)進(jìn)行采集、處理與顯示，并對(duì)各系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)控制。（五）信號(hào)處理和顯示系統(tǒng)當(dāng)前第58頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、單光束分光光度計(jì)2、雙光束分光光度計(jì)3、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)4、全波長(zhǎng)分光光度計(jì)二、分光光度計(jì)的類(lèi)型當(dāng)前第59頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)在單光束光學(xué)系統(tǒng)中，單色器色散后的單色光進(jìn)入吸收池。經(jīng)單色器分光后形成一束平行光，輪流通過(guò)參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測(cè)定。這種簡(jiǎn)易型分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。（一）單光束分光光度計(jì)當(dāng)前第60頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)光源發(fā)出光經(jīng)單色器分光后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)扇面鏡（切光器）分為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過(guò)參比池，另一束通過(guò)樣品池，光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度，并作為波長(zhǎng)函數(shù)記錄下來(lái)。雙光束分光光度計(jì)一般都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線(xiàn)。由于兩束光同時(shí)分別通過(guò)參比池和樣品池，因而能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。（二）雙光束分光光度計(jì)當(dāng)前第61頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)由同一光源發(fā)出的光被分為兩束，分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長(zhǎng)的單色光。利用切光器使兩束光以一定頻率交替照射同一吸收池，然后測(cè)定兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值ΔA。ΔA=Aλ1－Aλ2=(ε1－ε2)lc（三）雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)當(dāng)前第62頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)只利用1個(gè)吸收池，消除了吸收池及參比池所引起的測(cè)量誤差；用同一光源得到兩束光，可減小因光源電壓變化產(chǎn)生的影響。（三）雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)當(dāng)前第63頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)光電二極管陣列（PDA）是在晶體硅上緊密排列一系列光電二極管檢測(cè)管，光經(jīng)全息光柵表面色散并透射到二極管陣列檢測(cè)器上，被其中的光二極管接受。二極管輸出的電信號(hào)強(qiáng)度與光強(qiáng)度成正比。兩個(gè)二極管中心距離的波長(zhǎng)單位稱(chēng)為采樣間隔。二極管數(shù)目越多，分辨率越高。（四）全波長(zhǎng)分光光度計(jì)當(dāng)前第64頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)全波長(zhǎng)分光光度計(jì)同時(shí)檢測(cè)透過(guò)樣品復(fù)色光。它具有靈敏度高、噪音低、線(xiàn)性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可用作高效液相色譜檢測(cè)器。（四）全波長(zhǎng)分光光度計(jì)當(dāng)前第65頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（一）光學(xué)性能1、輻射波長(zhǎng)2、儀器的測(cè)量范圍3、儀器的重復(fù)性及準(zhǔn)確度4、雜散光三、光學(xué)性能與儀器校正當(dāng)前第66頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、輻射波長(zhǎng)(1)波長(zhǎng)范圍：指儀器所能測(cè)量的波長(zhǎng)范圍，通常為200~800nm。(2)光譜帶寬：指在最大透光強(qiáng)度一半處曲線(xiàn)的寬度，通常為6nm以下。(3)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：儀器所顯示的波長(zhǎng)數(shù)值與單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間的誤差，規(guī)定紫外光區(qū)≤±1nm，500nm附近≤±2nm。(4)波長(zhǎng)重復(fù)性：重復(fù)使用同一波長(zhǎng)，單色光實(shí)際波長(zhǎng)的變動(dòng)值，通?！?nm。三、光學(xué)性能與儀器校正當(dāng)前第67頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、儀器的測(cè)量范圍透光率表示：-1.0%~200.0%吸光度表示：-0.5A~3.000A3、儀器的重復(fù)性及準(zhǔn)確度光度重復(fù)性：指同樣情況下重復(fù)測(cè)量透光率的變動(dòng)，通?！堋?.5%。光度準(zhǔn)確度：指以透光率測(cè)量值的誤差表示。透光率滿(mǎn)量程誤差為≤±0.5%（鉻酸鉀溶液）三、光學(xué)性能與儀器校正當(dāng)前第68頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)4、雜散光通常以測(cè)光信號(hào)較弱的波長(zhǎng)處所含雜散光的強(qiáng)度百分比為指標(biāo)。藥典規(guī)定：220nm處NaI（1g/100ml）透光率＜0.8%，340nm處Na2NO2（5g/100ml）透光率＜0.8%。三、光學(xué)性能與儀器校正當(dāng)前第69頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、波長(zhǎng)的校正常用汞燈（237.83nm、253.65nm等）或氘燈（486.02nm、656.10nm）中的較強(qiáng)譜線(xiàn)進(jìn)行校正。高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器。2、吸光度的校正使用重鉻酸鉀的硫酸溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，來(lái)檢定分光光度計(jì)吸光度的準(zhǔn)確度。3、雜散光的檢查測(cè)定規(guī)定濃度的碘化鈉或亞硝酸鈉溶液在規(guī)定波長(zhǎng)處的透光率來(lái)進(jìn)行檢查。（二）儀器校正當(dāng)前第70頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)一、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇1、定量分析中，測(cè)定波長(zhǎng)一般選擇在被測(cè)組分最大吸收波長(zhǎng)處。2、如果被測(cè)組分有幾個(gè)最大吸收波長(zhǎng)時(shí)，可選擇不易出現(xiàn)干擾吸收、吸光度較大而且峰頂比較平坦的最大吸收波長(zhǎng)。3、若干擾物質(zhì)在最大吸收波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收，可選用非最大吸收處的波長(zhǎng)。第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法分析條件的選擇當(dāng)前第71頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)所選擇的溶劑應(yīng)易于溶解樣品而不與樣品發(fā)生作用，且在測(cè)定波長(zhǎng)區(qū)間內(nèi)吸收小，不易揮發(fā)。常用溶劑的截止波長(zhǎng)二、溶劑的選擇溶劑截止波長(zhǎng)（nm）溶劑截止波長(zhǎng)（nm）水200環(huán)己烷200乙腈210正己烷22095%乙醇210二氯甲烷235乙醚210三氯甲烷245異丙醇210四氯化碳265正丁醇210苯280甲醇215丙酮330當(dāng)前第72頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、溶劑參比當(dāng)試樣組成較為簡(jiǎn)單，共存組分很少且在測(cè)定波長(zhǎng)吸收極小，以及顯色劑沒(méi)有吸收，可采用純?nèi)軇┳鳛閰⒈热芤?。可消除溶劑、吸收池等因素的影響。三、參比溶液的選擇當(dāng)前第73頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、試劑參比如果顯色劑或其他試劑在測(cè)定波長(zhǎng)有吸收，按顯色反應(yīng)相同的條件，不加入試樣溶液，同樣加入試劑和溶劑作為參比溶液?？上噭┲薪M分所產(chǎn)生吸收的影響。三、參比溶液的選擇當(dāng)前第74頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)3、試樣參比如果試樣基體（除被測(cè)組分外的其他共存組分）在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時(shí)，可不加顯色劑但按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，作為參比溶液。適用于試樣中有較多的共存組分，加入的顯色劑量較少，且顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)無(wú)吸收。三、參比溶液的選擇當(dāng)前第75頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)通過(guò)調(diào)節(jié)待測(cè)溶液的濃度和吸收池的厚度來(lái)調(diào)節(jié)A值，使其在0.2~0.7之間。四、溶液吸光度的范圍及測(cè)定當(dāng)前第76頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)對(duì)于不能產(chǎn)生吸收的物質(zhì)或者吸收系數(shù)很小的物質(zhì)，可選用適當(dāng)?shù)脑噭┡c被測(cè)物質(zhì)定量反應(yīng)，生成對(duì)紫外或可見(jiàn)光有較大吸收的物質(zhì)再進(jìn)行測(cè)定。（一）顯色反應(yīng)要求（二）顯色條件的選擇五、顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇當(dāng)前第77頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（一）顯色反應(yīng)要求1、被測(cè)物質(zhì)和所生成的有色物質(zhì)之間必須有確定的計(jì)量關(guān)系；2、反應(yīng)產(chǎn)物必須有較高的吸光能力（ε＝103~105）和足夠的穩(wěn)定性；3、反應(yīng)產(chǎn)物的顏色與顯色劑的顏色必須有明顯的差別；4、顯色反應(yīng)必須有較好的選擇性，以減免干擾。當(dāng)前第78頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、顯色劑用量2、溶液酸堿度3、顯色時(shí)間4、溫度5、溶劑（二）顯色條件的選擇當(dāng)前第79頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)顯色劑用量可通過(guò)實(shí)驗(yàn)選擇，在固定金屬離子濃度的情況下，作吸光度A隨顯色濃度c的變化曲線(xiàn)，選取吸光度恒定時(shí)的顯色劑用量。1、顯色劑用量當(dāng)前第80頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)酸堿度對(duì)顯色反應(yīng)影響極大。如Fe3+與水楊酸的配合物，組成隨介質(zhì)pH值的不同而變化。pH值范圍

絡(luò)合物組成

顏

色

1.8~4

Fe(C7H4O3)+

紫紅色

4~7

Fe(C7H4O3)2-

棕褐色

8~10Fe(C7H4O3)33-黃色合適的pH值可以通過(guò)繪制A-pH曲線(xiàn)來(lái)確定。

選擇平坦處對(duì)應(yīng)pH值2、溶液酸堿度當(dāng)前第81頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)由于各種顯色反應(yīng)的速度不同，且介質(zhì)酸度、顯色劑的濃度都將會(huì)影響顯色時(shí)間。必須固定其他顯色條件，通過(guò)實(shí)驗(yàn)作出A-t曲線(xiàn)，才能確定適宜的顯色時(shí)間和測(cè)定時(shí)間。3、顯色時(shí)間當(dāng)前第82頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)顯色反應(yīng)須在適當(dāng)溫度下進(jìn)行。一般的顯色反應(yīng)也可以在室溫下進(jìn)行。4、溫度當(dāng)前第83頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)溶液的性質(zhì)可直接影響被測(cè)物質(zhì)對(duì)光的吸收，且顯色反應(yīng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性也與溶劑有關(guān)?？辔端嵩谒芤褐谐庶S色，在三氯甲烷在呈無(wú)色。硫氰酸鐵紅色配合物在丁醇中比在水溶液中穩(wěn)定。5、溶劑溶劑截止波長(zhǎng)（nm）溶劑截止波長(zhǎng)（nm）水200環(huán)己烷200乙腈210正己烷22095%乙醇210二氯甲烷235乙醚210三氯甲烷245異丙醇210四氯化碳265正丁醇210苯280甲醇215丙酮330當(dāng)前第84頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)第四節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用一、定性分析二、純度檢查三、定量分析四、結(jié)構(gòu)分析五、應(yīng)用與示例當(dāng)前第85頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)利用紫外吸收光譜的形狀、吸收峰的數(shù)目、各吸收峰的波長(zhǎng)和相應(yīng)的吸收系數(shù)等可對(duì)部分有機(jī)化合物進(jìn)行定性鑒別。3.吸收峰的數(shù)目1.吸收光譜形狀2.各吸收峰的波長(zhǎng)4.相應(yīng)波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)一、定性分析當(dāng)前第86頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)定性分析方法：對(duì)比法1、比較吸收光譜的一致性?xún)蓚€(gè)相同化合物，在同一條件下測(cè)定其吸收光譜應(yīng)完全一致。一、定性分析當(dāng)前第87頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)例安宮黃體酮和炔諾酮分子中都存在α、β-不飽和羰基的特征吸收結(jié)構(gòu)，最大吸收波長(zhǎng)相同但相對(duì)分子量不同，有明顯差異，可用于鑒別。安宮黃體酮（M＝386.53）炔諾酮（M=298.43）λmax240±1nmλmax240±1nm＝408＝5712、比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)一、定性分析當(dāng)前第88頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)3、比較吸光度（或吸收系數(shù)）比值有多個(gè)吸收峰的化合物，可利用在不同吸收峰（或峰與谷）處測(cè)得吸光度的比值A(chǔ)1/A2或ε1/ε2作為鑒別的依據(jù)。例《中國(guó)藥典》（2015年版）對(duì)葉酸采用下述方法鑒別：將檢品按規(guī)定方法配成10μg/ml的溶液，分別測(cè)定256nm和365nm處的吸光度，兩者比值應(yīng)為2.8~3.0。一、定性分析當(dāng)前第89頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)二、純度檢查1、雜質(zhì)檢查

利用試樣與所含雜質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區(qū)吸收的差異。當(dāng)前第90頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)2、雜質(zhì)的限量檢測(cè)

藥物地蒽酚中常有其制備的原料和氧化分解產(chǎn)物二羥基蒽醌。在三氯甲烷溶液中兩者的紫外吸收光譜有顯著差異，《中國(guó)藥典》（2015年版）規(guī)定，0.01%的地蒽酚三氯甲烷溶液用1cm吸收池在432nm處測(cè)定，吸光度不得大于0.12，即相當(dāng)于含二羥基蒽醌的含量不大于2.0%。

地蒽酚和二羥基蒽醌的紫外吸收光譜二、純度檢查當(dāng)前第91頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（一）單組分樣品的定量分析（二）多組分樣品的定量分析三、定量分析當(dāng)前第92頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)1、單組分樣品定量分析的條件在一個(gè)試樣中只要測(cè)定一種組分，且在選定的測(cè)量波長(zhǎng)下，試樣中其它組分對(duì)該組分不干擾。2、單組分樣品定量分析的方法（1）吸收系數(shù)法（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法（3）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法（一）單組分樣品的定量分析當(dāng)前第93頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（1）吸光系數(shù)法根據(jù)Beer定律，若l和吸收系數(shù)ε或已知，即可根據(jù)供試品溶液測(cè)得的A值求出被測(cè)組分的濃度。（一）單組分樣品的定量分析例維生素B12的水溶液在361nm處的值是207，盛于1cm吸收池中，測(cè)得溶液的吸光度為0.621，則溶液濃度為：c=0.621/(207×1)=0.00300(g/100ml)注意：用，則c單位為g/100ml；用ε，則c單位為mol/L。當(dāng)前第94頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含被測(cè)組分的空白溶液作參比，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制吸光度-濃度曲線(xiàn)，稱(chēng)為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)而擬合出回歸方程。在相同的條件下測(cè)定試樣溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)山找出對(duì)應(yīng)的濃度，或者從回歸方程求出被測(cè)組分濃度。（一）單組分樣品的定量分析當(dāng)前第95頁(yè)\共有105頁(yè)\編于星期四\10點(diǎn)（3）標(biāo)準(zhǔn)