第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證

第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證第一頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一

第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證定量分析樣品前處理方法

定量分析方法特點(diǎn)

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證123第二頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、定量分析樣品前處理方法

Pretreatmentofsampleusedinquantitativeanalysis定量分析樣品前處理方法

概述12第三頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一泛影酸碘番酸碘苯酯

概述第四頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一

概述磺溴酞鈉三氯叔丁醇第五頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵

概述第六頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一

概述含金屬有機(jī)藥物卡巴胂金屬有機(jī)藥物第七頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一定量分析樣品前處理方法直接測(cè)定法－含金屬或C-M不牢固的有機(jī)金屬經(jīng)水解后測(cè)定法－鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當(dāng)溶劑再水解）直接回流后測(cè)定 堿化回流后測(cè)定硫酸水解后測(cè)定經(jīng)氧化還原后測(cè)定法－鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（一般用于測(cè)碘）堿性還原后測(cè)定法－如泛影酸酸性還原后測(cè)定法－如碘番酸利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法:第八頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞

HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4金屬以高價(jià)態(tài)存在干法破壞：無(wú)水碳酸鈉或氧化鎂，注意溫度氧瓶燃燒法第九頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一空心A.燃燒瓶B.鉑絲網(wǎng)C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法第十頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一氧瓶燃燒法

樣品吸收液

測(cè)定方法含氟有機(jī)藥物H2O

pH4.3HAc-NaAc

Buffer茜素氟藍(lán)

分光光度法含氯有機(jī)藥物NaOH溶液

銀量法汞量法

分光法含溴有機(jī)藥物H2O2-NaOH液

或NaOH液-

銀量法分光法

硫酸肼飽和液含碘有機(jī)藥物NaOH液-銀量法碘量法硫酸肼飽和液

汞量法分光法第十一頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一碘苯酯含量測(cè)定

取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用NaOHT.S.2ml與H2O10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3~5min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代硫酸鈉液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2第十二頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

指導(dǎo)原則藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則第十三頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

目的：

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求

效能指標(biāo)：評(píng)價(jià)分析方法的尺度

效能指標(biāo)包括:

精密度,準(zhǔn)確度,檢測(cè)限,定量限,選擇性,

線性與范圍,耐用性第十四頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一(1)準(zhǔn)確度（accuracy）：測(cè)量值與真實(shí)值接近的程度表示:回收率測(cè)定方法：回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn)第十五頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一(2)精密度（precision）：定義:

同一樣品多次測(cè)量值之間相互接近的程度表示：標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)重復(fù)性:

同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度中間精密度:

同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度重現(xiàn)性:

不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度第十六頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一(3)專屬性（specificity）:

指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性)。第十七頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一(4)檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）：藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)

測(cè)定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imitofquantitation，LOQ）：藥物能被定量測(cè)出的最低濃度(μg/ml)

測(cè)定:信噪比法(S:N=10:1)第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

------------性能指標(biāo)第十八頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一(6)線性與范圍（linearityandrange）：待測(cè)物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)

線性程度：相關(guān)系數(shù)(7)耐用性（robustness）:

測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響程度影響因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

------------性能指標(biāo)第十九頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容：項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定及溶出量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度

＋①

＋①

專屬性②＋＋＋＋檢測(cè)限

－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證第二十頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一第四節(jié)生物樣品分析的基本步驟1.藥物從蛋白結(jié)合或綴合物中釋出⑴蛋白變性：如應(yīng)用三氯醋酸、HClO4、有機(jī)溶劑(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀⑵鹽酸水解⑶酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一種細(xì)菌性蛋白分解酶，可在pH7.0~11.0使肽鍵降解)第二十一頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二十二頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，星期一定量分析方法的驗(yàn)證

----------生物樣品分析（一）特異性 內(nèi)源性物質(zhì)不得干擾原藥、代謝物（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線

r≥0.9900，至少5個(gè)濃度，不許外延（三）精密度和準(zhǔn)確度

RSD≤15％、20％ 相對(duì)回收率85～115％（80～120％）第二十三頁(yè)，共二十四頁(yè)，編輯于2023年，