環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)及標(biāo)本采集方法

一、醫(yī)院感染微生物學(xué)監(jiān)測(cè)醫(yī)護(hù)人員手、空氣、

物體表面

消毒劑衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)血液透析相關(guān)監(jiān)測(cè)

壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)

醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)醫(yī)院消毒滅菌及醫(yī)療用品效能監(jiān)測(cè)內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)

醫(yī)療用品的監(jiān)測(cè)

微生物標(biāo)本的采集當(dāng)前第1頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)二、樣品采集原則

醫(yī)院重點(diǎn)部門的醫(yī)護(hù)人員手、空氣、物表的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)應(yīng)在清潔或消毒以后，醫(yī)療操作前進(jìn)行。如遇有醫(yī)院感染流行或疑似環(huán)境污染時(shí)，則需要立即進(jìn)行監(jiān)測(cè)，通過(guò)環(huán)境微生物檢測(cè)，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)傳染源及傳播途徑。測(cè)定物品污染程度或考核消毒措施的效果，都以樣品所含微生物的數(shù)量來(lái)計(jì)算。因此樣品采集要有代表性。送檢時(shí)間一般不超過(guò)2小時(shí)。當(dāng)前第2頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)三、醫(yī)院各重點(diǎn)部門空氣，物體表面，醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)境類別范圍標(biāo)準(zhǔn)空氣（cfu/m3）物體表面（cfu/cm2）醫(yī)務(wù)人員手（cfu/cm2）I類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房≤10≤5≤5II類普通手術(shù)室、產(chǎn)房、新生兒室（母嬰同室病房）、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房≤200≤5≤5III類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病房和房間≤500≤10≤5IV類傳染病房－≤15≤15以上不得檢出致病性微生物，如乙型溶血性鏈球菌，金黃色葡萄球菌，沙門氏菌等。當(dāng)前第3頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)四、所用材料

無(wú)菌吸管（0.5ml、5ml、10ml）、L棒、棉拭子、規(guī)格板、普通瓊脂平板、10ml生理鹽水等

當(dāng)前第4頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)五、采樣方法1、手衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：采樣時(shí)間：一般情況下每季度監(jiān)測(cè)一次。當(dāng)發(fā)生醫(yī)院感染流行、高度懷疑或確定與醫(yī)務(wù)人員手的污染有關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。常規(guī)監(jiān)測(cè)在洗手后從事治療操作前，特殊監(jiān)測(cè)隨時(shí)采樣。采樣方法：棉拭子涂布法和直接壓印法，當(dāng)前第5頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)棉拭子涂布法被檢人五指并攏，用浸濕滅菌生理鹽水的棉拭子在醫(yī)護(hù)人員手指曲面從指根到指端往返涂擦2次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，采完后剪去操作者手接觸部分，將棉拭子投入10ml滅菌生理鹽水試管內(nèi)立即送檢。當(dāng)前第6頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)棉拭子涂布法當(dāng)前第7頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)棉拭子涂布法當(dāng)前第8頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)棉拭子涂布法當(dāng)前第9頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)棉拭子涂布法當(dāng)前第10頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

檢驗(yàn)方法：1、將每個(gè)采樣管敲打80次或1分鐘，2、用滅菌吸管取0.2ml于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，再用無(wú)菌L棒涂布整個(gè)平板表面，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果計(jì)算菌落數(shù)當(dāng)前第11頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

計(jì)算方法：菌落數(shù)/C㎡=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)采樣面積×0.2手消毒效果要求：衛(wèi)生手消毒，監(jiān)測(cè)的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤10cfu/c㎡外科手消毒，監(jiān)測(cè)的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤5cfu/c㎡當(dāng)前第12頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

直接壓印法：采樣時(shí)被檢人5指并攏，將平皿上培養(yǎng)基表面直接壓貼在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送檢。將所采樣本直接置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，根據(jù)平皿面積計(jì)算細(xì)菌總數(shù)。菌落數(shù)/C㎡=平皿上菌落平均數(shù)

平皿面積（C㎡）當(dāng)前第13頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)2、空氣采樣

可根據(jù)自身?xiàng)l件選用沉降法（空氣暴露法）或空氣采樣器法。采樣時(shí)間：采樣時(shí)選在消毒處理后，操作前進(jìn)行采樣，采樣前應(yīng)關(guān)好門窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10分鐘進(jìn)行采樣。當(dāng)前第14頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)沉降法：A：布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積＞30m2設(shè)四角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)位置距墻壁1m處，離地面垂直高度為80-150cm。當(dāng)前第15頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)室內(nèi)面積≤30m2設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)的布點(diǎn)位置距墻壁1m處，離地面垂直高度為80-150cm。當(dāng)前第16頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)B：采樣方法：將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或血平板（直徑9cm）放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度距地面1.5m，內(nèi)外及四角距墻1m，采樣時(shí)，將平板蓋打開(kāi)，扣放于平板旁，暴露5分鐘，蓋好并將平皿置于37℃溫箱培養(yǎng)，24小時(shí)觀察結(jié)果，并計(jì)算5個(gè)平板的平均菌落數(shù)。潔凈手術(shù)室則暴露30分鐘。當(dāng)前第17頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)計(jì)算公式：菌落數(shù)/m3

＝50000NATA＝平板面積（C㎡）T＝平板暴露于空氣的時(shí)間（min）N＝平均菌落數(shù)當(dāng)前第18頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)3、物體表面的采樣采樣時(shí)間：根據(jù)采樣目的選擇采樣時(shí)間，如進(jìn)行常規(guī)物體表面監(jiān)測(cè)，選擇消毒處理后4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行采樣，若是暴發(fā)流行時(shí)的環(huán)境微生物學(xué)監(jiān)測(cè)則盡可能對(duì)未處理的現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行采樣。采樣面積：常規(guī)監(jiān)測(cè)時(shí)被采面積＜100cm2，取全部表面；≥100cm2，取

100cm2。暴發(fā)流行時(shí)采樣不受此限制。所用材料：當(dāng)前第19頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)（1）棉拭子采樣法對(duì)于平面物體，用5cm×5cm大小的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格版，放在被檢物體表面，用用浸濕滅菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格版內(nèi)橫豎往返均勻涂抹各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣1－4個(gè)規(guī)格板面積。用無(wú)菌剪刀剪去手接觸部分，將棉拭子裝入放有10ml滅菌生理鹽水試管中。對(duì)于門把手，金屬，玻璃等曲面小型物體則采用棉拭子直接在物體表面按一定順序涂抹采樣，敷料，衛(wèi)生紙等一次性物品采樣時(shí)，用無(wú)菌法取樣品5g，放入裝有10ml滅菌生理鹽水試管中。當(dāng)前第20頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第21頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第22頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第23頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)檢驗(yàn)方法：1）將采樣管敲打80次（或1分鐘）2）用滅菌吸管吸取0.2ml于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿中，然后用無(wú)菌L棒涂在整個(gè)平皿表面，置36°C溫箱24小時(shí)觀察結(jié)果。當(dāng)前第24頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)計(jì)算公式：菌落數(shù)/C㎡＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)采樣面積×0.2當(dāng)前第25頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)4、透析液微生物監(jiān)測(cè)檢測(cè)方法：用無(wú)菌吸管吸取透析液進(jìn)出水各2～3ml，放入無(wú)菌試管，檢測(cè)時(shí)可視透析液污染程度分別取原液或10倍稀釋液0.5ml放入2個(gè)滅菌平皿內(nèi)，45℃～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，將平板置37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。細(xì)菌總數(shù)/ml＝2個(gè)平板上的菌落總數(shù)×稀釋倍數(shù)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：進(jìn)水≤200cfu/ml

出水≤2000cfu/ml當(dāng)前第26頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第27頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第28頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)5、使用中消毒劑監(jiān)測(cè)為監(jiān)測(cè)消毒溶液在連續(xù)使用過(guò)程中的污染菌量，應(yīng)定期到各科室采樣做生物學(xué)測(cè)定。采樣方法：用無(wú)菌吸管吸取消毒液1ml加至裝有9ml含有相應(yīng)中和劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi)，以中和消毒藥物的殘效作用，中和時(shí)間10分鐘至1小時(shí)。當(dāng)前第29頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)常用消毒劑中和劑及其濃度表消毒劑中和劑及其濃度甲醛亞硫酸鈉（0.1%～0.5%）氨水雙甲酮（0.1%～1.0%）+嗎啉（0.6%～1.0%）戊二醛甘氨酸（1.0%）；賴氨酸亞硫酸鈉（0.1%～0.5%）雙甲酮（0.1%～1.0%）+嗎啉（0.6%～1.0%）過(guò)氧乙酸硫代硫酸鈉（0.1%～0.5%）含氯消毒劑類硫代硫酸鈉（0.1%～1.0%）季銨鹽類吐溫－80（0.5%～3.0%）卵磷脂（0.3%）硫代硫酸鈉（0.1%～0.5%）亞硫酸鈉（0.1%～0.5%）碘（溴）制劑亞硫酸鈉（0.1%～0.5%）；卵磷脂（0.1%～0.3%）硫代硫酸鈉（0.1%）；半胱氨脂（0.1%）酚類吐溫－80（1%～10%）；卵磷脂（0.1%～0.3%）氯已定卵磷脂（1.0%～2.0%）汞制劑硫代硫酸鈉；亞硫酸鈉；半胱氨脂（0.1%）醇類吐溫－80酸類堿類堿類酸類當(dāng)前第30頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)用無(wú)菌吸管吸取中和采樣液0.2ml，轉(zhuǎn)種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，用L棒涂抹于普通瓊脂平板，置36℃溫箱培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果。菌落數(shù)/ml＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)0.2當(dāng)前第31頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)結(jié)果判斷使用中消毒液細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml，不得檢出致病微生物。

無(wú)菌器材保存液必須無(wú)菌生長(zhǎng)。當(dāng)前第32頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)6、壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)指示菌：嗜熱脂肪桿菌芽胞（產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)廠家說(shuō)明書在有效期內(nèi)使用）方法：滅菌完畢，取出自含式生物指示物，至少冷卻10分鐘以上，將安瓿折斷或擠破，讓管內(nèi)溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基與嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片融為一體，同時(shí)將一未經(jīng)滅菌的生物指示物一同培養(yǎng)，56℃48小時(shí)后進(jìn)行滅菌效果判定。當(dāng)前第33頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)效果判定陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照試驗(yàn)管結(jié)果黃紫紫滅菌認(rèn)可黃紫黃滅菌失敗當(dāng)前第34頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)7、內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)

采樣時(shí)間：消毒、滅菌后，使用前。采樣方法：監(jiān)測(cè)采樣部位為內(nèi)鏡的內(nèi)腔面。用無(wú)菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用無(wú)菌試管從活檢出口收集，及時(shí)送檢。檢測(cè)方法：將送檢液充分震蕩，取0.5ml，加入2只直徑90mm無(wú)菌平皿，每個(gè)平皿分別加入已經(jīng)熔化的45℃左右營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35℃培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)數(shù)。細(xì)菌菌落數(shù)/件＝2個(gè)平皿菌落數(shù)平均值×20當(dāng)前第35頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

當(dāng)前第36頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第37頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)8、醫(yī)療用品的監(jiān)測(cè)

包括一次性醫(yī)療用品和消毒滅菌處理后的醫(yī)療用品。采樣時(shí)間：在消毒或滅菌處理后存放至有效期內(nèi)采樣。采樣方法：操作人員在認(rèn)真清潔消毒手后，在凈化臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌的方法，將擬檢測(cè)的醫(yī)療用品：縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件物品投入5ml滅菌的生理鹽水或營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi)，對(duì)手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無(wú)菌操作下用沾有無(wú)菌生理鹽水的棉拭子反復(fù)涂擦采樣，并將棉拭子投入5ml滅菌的生理鹽水溶液中。檢測(cè)方法：將采樣管振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1ml待檢樣品于滅菌平皿內(nèi)，加入已融化的45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37℃溫箱培養(yǎng)48小時(shí)，觀察結(jié)果。若平皿上無(wú)菌生長(zhǎng)為滅菌合格。當(dāng)前第38頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

所用材料當(dāng)前第39頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

當(dāng)前第40頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)

當(dāng)前第41頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)當(dāng)前第42頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)微生物讓人類步步為營(yíng)， 我們應(yīng)該追求： “準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷” “針對(duì)性病原學(xué)治療”

正確的微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送，是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提當(dāng)前第43頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)基本原則1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作4.采樣后立即送檢5.棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基7.標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑.8.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和檢驗(yàn)?zāi)康漠?dāng)前第44頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本血液標(biāo)本血液標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷菌血癥或敗血癥的基本方法。正常人的血液是無(wú)菌的，如從患者血液中檢出細(xì)菌，一般應(yīng)視為病原菌（排除采集標(biāo)本或其他操作過(guò)程污染），提示有菌血癥或敗血癥。1、采血時(shí)間及次數(shù)一般應(yīng)在抗生素治療前，發(fā)熱初期或高峰時(shí)抽血。傷寒患者應(yīng)在發(fā)熱一星期內(nèi)抽血。化膿性腦膜炎應(yīng)在發(fā)熱1～2天內(nèi)抽血，亞急性心內(nèi)膜炎的患者除在發(fā)熱期采血外，要多次抽血（24小時(shí)內(nèi)3～４次）和增加抽血量（可增至10毫升）。2、抽血部位及抽血量以無(wú)菌方法從患者肘靜脈、股動(dòng)脈采血。采血量以培養(yǎng)基的1/10為宜，成人一次采血5～10ｍｌ，嬰兒為1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以無(wú)菌手續(xù)注入血培養(yǎng)瓶，充分混合后送檢。當(dāng)前第45頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)采血培養(yǎng)前質(zhì)量保證:靜脈穿刺程序

1.70%酒精擦拭靜脈穿刺點(diǎn)>30秒鐘2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,從穿刺點(diǎn)向外畫圈消毒,直徑>3cm3.70%酒精脫碘培養(yǎng)瓶接種程序

1.70%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞,待60秒2.用無(wú)菌紗布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。當(dāng)前第46頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)1.皮膚消毒尤為重要，因?yàn)槠渲饕牟≡鸀槠つw定植菌如凝固酶陰性的葡萄球菌2.在穿刺前或穿刺期間，防止靜脈滑動(dòng)，用戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸靜脈穿刺點(diǎn)3.用注射器無(wú)菌穿刺取血后，勿換針頭（如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭）直接注入血培養(yǎng)瓶。血培養(yǎng)瓶在采血接種后必須馬上送檢血培養(yǎng)瓶在采血接種后在室溫中不得超過(guò)數(shù)小時(shí)血培養(yǎng)瓶不得在采血接種后放入冰箱或冷凍當(dāng)前第47頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本骨髓標(biāo)本正常人的骨髓是無(wú)菌的，若從患者骨髓中檢出細(xì)菌（排除污染）提示細(xì)菌性骨髓炎或菌血癥、敗血癥?！魳?biāo)本采集1、標(biāo)本采集部位和時(shí)間一般用骨髓穿刺針從髂骨采集骨髓標(biāo)本，最好在用藥前，發(fā)熱初期或高熱期采集，陽(yáng)性檢出率較高。2、標(biāo)本采集注意事項(xiàng)：⑴嚴(yán)格無(wú)菌操作。⑵標(biāo)本采集后立即注入血培養(yǎng)瓶，送檢。當(dāng)前第48頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本

我國(guó)痰細(xì)菌培養(yǎng)現(xiàn)狀

標(biāo)本送檢率低結(jié)果重復(fù)性差報(bào)告速度慢感染菌與污染菌不易區(qū)分藥敏結(jié)果與治療反應(yīng)存在差距咳痰標(biāo)本當(dāng)前第49頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本咳痰標(biāo)本不合格，你退檢嗎？如果低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞大于10個(gè)，應(yīng)不做或僅在特殊要求時(shí)做培養(yǎng)。如做培養(yǎng)，報(bào)告中注明“鏡檢結(jié)果表明標(biāo)本口咽分泌物污染明顯”。復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院的做法痰液外觀：膿性，粘膿，粘液，水樣…..痰標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)：合格，不理想（建議重送）臨床上約半數(shù)咳痰標(biāo)本不合格！當(dāng)前第50頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本痰標(biāo)本痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于呼吸道感染的診斷有重要意義。下呼吸道的痰液是無(wú)菌的，而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上呼吸道的正常寄生菌（如草綠鏈）。若從患者痰標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌，提示有呼吸道細(xì)菌感染。

◆標(biāo)本采集1、痰標(biāo)本的采集時(shí)間一般以晨痰為好。2、標(biāo)本采集方法⑴自然咳痰法：在留取痰之前，用溫開(kāi)水反復(fù)漱口，以減少常居菌的污染，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入痰杯內(nèi)。當(dāng)前第51頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本⑵導(dǎo)管痰：氣管插管的病人用一次性吸痰管直接取標(biāo)本，用消毒后的手術(shù)剪剪?。贝缥倒?～2根于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。⑶結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本收集法：留取即時(shí)痰、夜痰、晨痰各一次一天送檢以提高陽(yáng)性檢出率。咽拭子標(biāo)本咽拭子標(biāo)本對(duì)于上呼吸道的細(xì)菌感染有一定的診斷意義。正常咽拭有多種上呼吸道的正常菌群（如草綠鏈）。若從患者咽拭標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌提示上呼吸道有細(xì)菌感染（如急、慢性扁桃體炎，咽炎，喉炎等）?！魳?biāo)本采集用無(wú)菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部粘膜，留取標(biāo)本，置無(wú)菌試管內(nèi)送檢。當(dāng)前第52頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本尿液標(biāo)本尿液的細(xì)菌學(xué)檢查（中段尿培養(yǎng)加計(jì)數(shù)）對(duì)于泌尿道感染的診斷有重要價(jià)值。正常尿液是無(wú)菌的，而外尿道有正常菌群寄生，標(biāo)本的采集必須無(wú)菌操作。另外，細(xì)菌培養(yǎng)必須結(jié)合菌落計(jì)數(shù)辨別是否為病原菌。菌落計(jì)數(shù)＞105/ｍｌ提示感染。1、中段尿標(biāo)本采集法留取前必須用1：1000ＰＰ粉溶液沖洗外陰部及尿道口，或盆中坐浴15～20分鐘，再用清潔毛巾擦干，打開(kāi)瓶塞，棄去前半部分尿液，收集中段尿3～5ｍｌ盛于無(wú)菌試管內(nèi)，立即加塞蓋好，送檢。2、導(dǎo)尿病人，至少需要更換一個(gè)導(dǎo)尿袋，清洗導(dǎo)尿管，消毒留取尿液的最前端導(dǎo)尿管后，無(wú)菌操作留取尿液。當(dāng)前第53頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本集尿袋內(nèi)的尿液不能用作培養(yǎng)導(dǎo)尿管末端的尿液也不能用于培養(yǎng)，因?yàn)楹茈y避免沒(méi)有尿道菌群污染。除非是流行病學(xué)調(diào)查，長(zhǎng)期留置導(dǎo)管病人常規(guī)尿培養(yǎng)沒(méi)有臨床意義，大量病原菌?？稍谶@類病人中檢出。不能把導(dǎo)尿管與尿袋拔開(kāi)后收集尿液。標(biāo)記申請(qǐng)單上注明尿液采自留置導(dǎo)尿管。運(yùn)送30分鐘內(nèi)不能送往實(shí)驗(yàn)室，將標(biāo)本冷藏。實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有接收人員時(shí)將標(biāo)本置于實(shí)驗(yàn)室冰箱里，但也不能超過(guò)24小時(shí)。采樣端口用酒精消毒；必要時(shí)，可先夾住導(dǎo)尿管但不能超過(guò)30分鐘；將注射器針頭插入采樣端口，抽吸出尿液；注入無(wú)菌杯或試管中。當(dāng)前第54頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本糞便標(biāo)本正常情況下腸道中有多種細(xì)菌寄生，包括大量的厭氧菌和大腸埃希氏菌、腸桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌等，引起感染性腹瀉的病原微生物有⑴細(xì)菌性。⑵真菌性。⑶病毒性。1、自然排便采集自然排便后，挑取其膿血、粘液部分2～3克；液體標(biāo)本取絮狀物2～3ｍｌ，盛于滅菌容器內(nèi)，送檢。2、直腸拭子如不易獲得糞便時(shí)，或排泄困難患者及嬰兒，可用直腸拭子采取，即以無(wú)菌棉拭子用生理鹽水濕潤(rùn)后，插入肛門內(nèi)4～5厘米（幼兒2～３厘米）輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)取出，送檢。當(dāng)前第55頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本

膿液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定感染的種類、提供藥敏結(jié)果、指導(dǎo)臨床治療有重要的意義?；撔愿腥居蓡畏N或多種細(xì)菌引起。

標(biāo)本采集１、開(kāi)放性膿腫和膿性分泌物先以無(wú)菌鹽水沖洗潰瘍表面，用２支滅菌棉拭取潰瘍深處的分泌物后送檢。２、大面積燒傷的創(chuàng)面分泌物用滅菌棉拭子取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物，置滅菌試管內(nèi)送檢。3、封閉性膿腫消毒局部皮膚或粘膜表面后，用注射器抽取，將膿液注入無(wú)菌試管內(nèi),然后切開(kāi)膿腫、引流，取部分膿腫壁送檢。當(dāng)前第56頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本腦脊液標(biāo)本腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于細(xì)菌性腦膜炎的診斷有重要的臨床價(jià)值，檢出細(xì)菌提示細(xì)菌性（急性化膿性、結(jié)核性等）腦膜炎?！魳?biāo)本采集由臨床醫(yī)師以無(wú)菌操作作腰椎穿刺，抽取腦脊液2～3ｍｌ，盛于無(wú)菌容器中送檢。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶素，迅速自溶，肺鏈及流感嗜血桿菌也易死亡。因此，腦脊液無(wú)論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢，不宜將其置于冰箱保存，否則影響檢出率。當(dāng)前第57頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本穿刺液標(biāo)本各個(gè)部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定該部位是否有細(xì)菌感染具有診斷價(jià)值。正常穿刺液是無(wú)菌的，若從患者穿刺液中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌提示該部位有細(xì)菌感染?！魳?biāo)本采集采用無(wú)菌方法用注射器抽取體內(nèi)可疑部位的液體（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜積液等），注入無(wú)菌試管內(nèi)立即送檢。當(dāng)前第58頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)正確留取細(xì)菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本泌尿、生殖道標(biāo)本生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于診斷性病和其他生殖系統(tǒng)感染具有重要價(jià)值。正常的內(nèi)生殖器是無(wú)菌的，而外生殖器有多種細(xì)菌寄生。支原體培養(yǎng)加藥敏和衣原體檢測(cè)對(duì)非淋菌性尿道炎的診治有一定意義?！魳?biāo)本采集（尿道分泌物、陰道分泌物、男性前列腺）等由?？漆t(yī)生采取。注意事項(xiàng)：

生殖器是開(kāi)放性器官，標(biāo)本采集過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作以減少雜菌污染。陰道內(nèi)有大量正常菌群存在，采取宮頸標(biāo)本應(yīng)避免觸及陰道壁。疑有宮腔感染，遇產(chǎn)婦行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取采集嬰兒耳拭子一同送檢。沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材時(shí)拭子應(yīng)在病變部位停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。當(dāng)前第59頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)臨床微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送中的常見(jiàn)問(wèn)題采集時(shí)機(jī)不符合規(guī)范和醫(yī)生開(kāi)醫(yī)囑的時(shí)間、方法密切相關(guān)

常常是采微生物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的醫(yī)囑剛開(kāi)出來(lái)，責(zé)任護(hù)士就去采樣，不管患者當(dāng)天是否已用過(guò)抗生素。有時(shí)是上午的一種甚至兩種抗生素剛注射后，體內(nèi)血藥濃度正是最高時(shí)，護(hù)士卻去采集了尿培養(yǎng)，甚至是血培養(yǎng)標(biāo)本。還有的科室在對(duì)氣管插管或切開(kāi)的患者采樣時(shí)，氣管內(nèi)剛使用含有抗生素的痰液稀釋劑后，緊接著吸痰，留取痰培養(yǎng)標(biāo)本，導(dǎo)致連續(xù)多次痰培養(yǎng)結(jié)果“無(wú)菌生長(zhǎng)”。

當(dāng)前第60頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)臨床微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送中的常見(jiàn)問(wèn)題采樣方法不符合規(guī)范

患者準(zhǔn)備不到位：表現(xiàn)為取中段尿作尿培養(yǎng)時(shí)，采樣前女患者不先用肥皂水或高錳酸鉀溶液沖洗外陰部及尿道口；男性未翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，不用0.1%新潔爾滅消毒尿道口，且不用滅菌紗布擦干?？忍盗羧√蹬囵B(yǎng)者，未用溫開(kāi)水反復(fù)漱口，以去除口內(nèi)大部分雜菌；未深咳，以唾液當(dāng)痰液。

當(dāng)前第61頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)臨床微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送中的常見(jiàn)問(wèn)題采樣方法不符合規(guī)范

醫(yī)護(hù)人員操作不到位：表現(xiàn)為1、靜脈導(dǎo)管管端培養(yǎng)時(shí)，導(dǎo)管拔出血管前，周圍皮膚未經(jīng)75%酒精消毒，正確培養(yǎng)方法是剪一段導(dǎo)管管端直接投入無(wú)菌試管內(nèi)送檢。2、采集手術(shù)切口前，沒(méi)有用無(wú)菌生理鹽水擦洗傷口，造成皮膚雜菌污染，導(dǎo)致培養(yǎng)結(jié)果假陽(yáng)性。采樣的無(wú)菌棉拭子未經(jīng)無(wú)菌生理鹽水濕潤(rùn)，導(dǎo)致標(biāo)本干燥，無(wú)法檢測(cè)。3、采血培養(yǎng)標(biāo)本時(shí)皮膚消毒時(shí)間偏短，穿刺針入培養(yǎng)瓶前未過(guò)火焰；針頭入無(wú)菌試管管口前及管塞打開(kāi)、塞上前未經(jīng)火焰燒灼。

當(dāng)前第62頁(yè)\共有68頁(yè)\編于星期五\10點(diǎn)臨床微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送中