生化反應與血清學鑒定

生化反應與血清學鑒定第一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日生化反應與血清學實驗《醫(yī)學微生物學》實驗七第二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日一、生化反應掌握細菌生化反應的原理和臨床意義。熟悉鑒別細菌常用的生化試驗原理、方法和結(jié)果判斷。[實驗目的]第三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日生化反應基本原理不同的細菌含有不同的分解代謝的酶具有不同的分解代謝途徑對同一營養(yǎng)物質(zhì)的分解代謝及其產(chǎn)物有所不同

利用生化方法檢測代謝產(chǎn)物以判斷細菌的分解代謝特征，從而達到鑒定細菌的目的。稱：細菌的生化反應檢測法知識點第四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日常見的生化反應對糖的發(fā)酵甲基紅試驗單糖發(fā)酵試驗VP試驗對蛋白質(zhì)的分解吲哚試驗硫化氫試驗枸櫞酸鹽利用試驗尿素酶試驗其他試驗第五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日實驗材料1.菌種大腸埃希菌、沙門氏菌2.微量生化反應管

葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基質(zhì)）、硫化氫。3.試劑吲哚試劑第六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖大腸埃希菌：分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣致病性腸道細菌：大多數(shù)不分解乳糖1.糖發(fā)酵試驗HCOOH脫氫酶

CO2+H2

第七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日1.糖發(fā)酵試驗（1）原理細菌產(chǎn)生的酶酸糖（酸堿指示劑）氣體溴甲酚紫第八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日1.糖發(fā)酵試驗（2）方法37℃培養(yǎng)18～24h5種糖生化反應管大腸埃希菌、沙門氏菌接種針穿刺接種觀察結(jié)果第九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日中性或堿性→紫色酸性→黃色

1.糖發(fā)酵試驗（3）結(jié)果判斷溴甲酚紫第十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日

＋－＋

有細菌生長培養(yǎng)基呈混濁，可能出現(xiàn)3種結(jié)果。（3）結(jié)果判斷第十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日2.靛基質(zhì)（吲哚）試驗色氨酸酶吲哚（無色）色氨酸吲哚試劑玫瑰吲哚（紅色）（1）原理第十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日（2）結(jié)果判斷陽性2.靛基質(zhì)（吲哚）試驗第十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日3.硫化氫試驗酶硫化氫含硫氨基酸硫化鐵黑褐色或硫化鉛（1）原理第十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日（2）結(jié)果判斷3.硫化氫試驗第十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日生化反應材料分配分組兩人/組菌種沙門氏菌、大腸桿菌各一支

生化反應管七支/人第十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日二、血清學鑒定

掌握細菌的血清學鑒定法。[實驗目的]第十七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日實驗原理

根據(jù)抗原抗體反應具有高度特異性的特點，用已知抗體來檢測未知抗原（細菌）。二、血清學鑒定第十八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日實驗材料1.菌種待檢細菌2.試劑多價沙門菌O(A-F)診斷血清3.其他載玻片第十九頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日沙門氏菌的主要抗原組成O抗原：至少58種,

含相同抗原組分歸為一組，引起人類疾病的沙門菌大多數(shù)在A~F組。H抗原：分為Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不穩(wěn)定，可阻止O抗原與其相應抗體的凝集反應。第二十頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日沙門氏菌診斷血清（11種）O2O4O7O9HaHbHcHdHiViA-F群多價OA-F群多價O第二十一頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日

先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。注意：第二十二頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日實驗方法

50ul血清+待檢菌50ulNS+待檢菌

第二十三頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－第二十四頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日群別菌型抗原oHA甲型副傷寒沙門菌1,2,12a:-B乙型副傷寒沙門菌德比沙門菌鼠傷寒沙門菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C

豬霍亂（或丙型副傷寒）沙門菌6,7,(Vi)c:1,5D傷寒沙門氏菌9,12,Vid:-E鴨沙門氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙門氏菌11i:1,2沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表第二十五頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日注意事項1.生理鹽水端應不出現(xiàn)凝集顆粒。2.沙門菌Vi抗原存在時可阻止O抗原與相應抗體發(fā)生凝集，故在做玻片凝集時應加注意，需事先加熱破壞Vi抗原，O抗原才得以與相應的O診斷血清發(fā)生凝集。第二十六頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日血清學實驗進程先鑒定A－F和Vi，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。

A－F

Vi實驗進程--

為非沙門氏菌屬，不再繼續(xù)鑒定其他抗原成分。+-

初步判斷為沙門氏菌屬，繼續(xù)鑒定其他抗原成分。-+

初步判斷為沙門氏菌屬，但需去除菌體Vi莢膜后再繼續(xù)鑒定其他抗原成分。第二十七頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日血清學實驗材料分配分組4人/組菌種待測菌種一支診斷血清1盒/組第二十八頁，共二十九頁，編輯于2023年，星期日群別菌型抗原oHA甲型副傷寒沙門菌1,2,12a:-B乙型副傷寒沙門菌德比沙門菌鼠傷寒沙門菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2