生物化學(xué)與分子生物學(xué)考試(中山大學(xué))

一、名詞解釋1、基因克?。菏侵赴涯康幕蜻B接到載體上，構(gòu)建成重組體，再轉(zhuǎn)化入宿主細胞內(nèi)進行復(fù)制和表達?；駾NADNADNA2、基因文庫：是指整個基因組或某一細胞所表達的基因所有克隆片段的集合體，包括基因cDNA免疫化學(xué)篩選法、染色體步移和差異表達基因篩選。3、cDNA文庫：是指以所有mRNA為模板，不經(jīng)選擇地在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)合成互補的雙鏈ＤＮＡ，即cDNA，然后把cDNA與載體連接構(gòu)成重組DNA，再轉(zhuǎn)化入宿主細胞擴增，建立cDNA文庫。4管家基因為管家基因。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因與核糖體蛋白基因等5、散彈測序法：又稱鳥槍測序法，是指大分子DNA被隨機地“敲碎”成許多小片段，收集這些隨機小片段并將它們?nèi)窟B接到合適的測序載體，小片段測序完成后，計算機根據(jù)重疊區(qū)將小片段整合出大分子DNA序列。6功能基因組學(xué)全面系統(tǒng)地分析全部基因及其編碼蛋白的功能，包括生物學(xué)功能，細胞學(xué)功能，發(fā)育學(xué)功能。7、限制性內(nèi)切酶：是指能在特異位點（酶切位點）上催化雙鏈DNA分子的斷裂，產(chǎn)生相應(yīng)的限制性DNA片段，被稱為分子生物學(xué)家的手術(shù)刀。8、ＣＤKs：即細胞周期蛋白依賴性激酶，是一類Ser/Thr蛋白激酶，與周期蛋白結(jié)合時，才具有蛋白激酶的活性，通過使靶蛋白磷酸化而產(chǎn)生相應(yīng)的生理效應(yīng)。9、RT-PCR：是指首先以mRNA為模板合成cDNA，然后再進行常規(guī)PCR擴增的PCR。10、逐個克隆法：對連續(xù)克隆系中排定的BAC克隆逐個進行亞克隆測序并進行組裝（公共領(lǐng)域測序計劃）11PCRPCRPCR后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。12、基因組：又稱染色體組，是指一個物種單倍體的染色體數(shù)目，是生物體全部遺傳物質(zhì)的總和，主要指真核生物的核基因組和原核生物的類核基因組。13基因組學(xué)：是指對生物體內(nèi)所有基因進行基因組作圖（遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜分析、基因定位、基因功能分析的一門學(xué)科?；颍褐笍幕蚪M水平（分子整體水平）DNA機程序，分析生命體全部基因組的結(jié)構(gòu)與功能。1st14、啟動子：是指能被RNA聚合酶識別、結(jié)合并啟動基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。15、腫瘤轉(zhuǎn)移：是指惡性腫瘤細胞離開原發(fā)部位，通過各種途徑到達其他器官組織，并繼續(xù)生長、增殖形成性質(zhì)與原發(fā)腫瘤相同的轉(zhuǎn)移瘤的過程。16、顯性負突變：是指一對等位基因中因其中一個突變或丟失所致的另外一個正常等位基因的功能活性喪p53也失去活性。17Delta3232HIVT18質(zhì)粒DNA等遺傳性標記物，經(jīng)改造后具有多克隆位點。19、細胞周期：是指細胞周而復(fù)始的生長分裂過程，并且呈現(xiàn)一定的周期，即指親代細胞分裂結(jié)束至子代細胞分裂結(jié)束的過程，又稱細胞增殖周期。20、腫瘤標志：是指能反映細胞惡性演變的各個階段中表型及基因型的特性或特征，通稱為腫瘤標志，包括生物學(xué)標志、遺傳性標志及生物化學(xué)標志。21、血管增生：是指從已存在的毛細血管網(wǎng)上大量生成新生血管的過程，是由于細胞與細胞、細胞與基質(zhì)及細胞與細胞因子相互作用的結(jié)果。22載體DNADNADNADNA。23PCR：即以擬擴增的DNAdNTPsDNA24（V-onc：是指一類存在于腫瘤病毒中的，能使靶細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。如v-src25SNP：即單核苷酸多態(tài)性，是指出現(xiàn)在基因組DNASNP1%。在基因組中，不同個體的DNASNP。在人類基因組中大概1000SNPSNP27Cyclin：是一類在細胞周期中，周期性的積累和降解的蛋白。即會隨細胞周期中的不同時期而進行合成與降解。不同生物的細胞周期素具有共同的特點：1）100-150導(dǎo)與CDK結(jié)合。2）在細胞周期的特定時相與CDK結(jié)合，作為CDK的調(diào)節(jié)亞基發(fā)揮作用。2nd28、酶聯(lián)受體：細胞表面上的主要類型受體，其細胞質(zhì)區(qū)具有酶活性，或者和細胞質(zhì)中的酶結(jié)合，配體與其結(jié)合后，激活酶活性。29、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)：研究基因組的結(jié)構(gòu)并構(gòu)建高分辨率的遺傳圖、物理圖、序列圖和轉(zhuǎn)錄圖以及蛋白質(zhì)組成與結(jié)構(gòu)的學(xué)科。30限制性片段長度多態(tài)性/（RFLPRFLP經(jīng)限制性內(nèi)切酶切后，產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段，再通過電泳的方法分離和檢測這些片段。31、蛋白質(zhì)組學(xué)：在整體水平上研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成及其活動規(guī)律的新興學(xué)科。它以蛋白質(zhì)組為研究（即一個細胞或一個組織中基因組所表達的全套蛋白質(zhì)活動的基本規(guī)律。（1）（2）表達蛋白組學(xué)32K5：是由纖溶酶原中與血管抑素相連的聯(lián)環(huán)結(jié)構(gòu)域，由80316KD。33、細胞通訊：是指體內(nèi)一部分細胞發(fā)出信號，另一部分細胞接收信號并將其轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎δ茏兓倪^程。34、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：是指細胞針對外源信息所發(fā)生的細胞內(nèi)生物化學(xué)變化及效應(yīng)的全過程。35、藍-白斑篩選：細菌如含編碼βLacZX-gal(5-4-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNALacZ以此來篩選重組細菌。稱之為藍-白斑篩選。二、簡答題1.人類基因組計劃的主要內(nèi)容（簡述）1)、HGP的目的：解碼生命；了解生命的起源，了解生命體生長發(fā)育的規(guī)律，認識種屬之間和個體之間存在差異的起因；認識疾病產(chǎn)生的機制以及長壽與衰老等生民現(xiàn)象；為疾病的治療提供科學(xué)依據(jù)。、主要目的：闡明人類基因組的全部核苷酸序列，從整體水平上破譯人類遺傳信息，在分子水平全面、核心內(nèi)容：是繪制人類的遺傳圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜、物理圖譜和序列圖譜。2、大規(guī)模測序的基本策略。BAC（公共領(lǐng)域測序計劃）3rdPAGEPAGE12th3、引物設(shè)計的原則：18-30bp；堿基隨機分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堆積現(xiàn)象，G+C40%-60%；3bp；3’端的互補重疊；引物的堿基序列不應(yīng)與非編碼區(qū)域有同源性，應(yīng)位于高度保守區(qū)；3’端無修飾，并盡量避免第一位堿基為第一二位堿基一定要與DNA5可以修飾。TmTapDNA4、藍白斑試驗的原理lacZXgallacZaw5、舉例說明限制性內(nèi)切酶命名的原則SmithAthens112，324HidⅢ代表從流感噬血桿菌(Haemophilusinfluenzcd第3個限制酶。6、蛋白質(zhì)組學(xué)在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用、通過尋找差異表達蛋白質(zhì),以發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)；、尋找用于診斷的疾病相關(guān)的標記分子；、尋找疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)藥靶,以用于藥物設(shè)計；、研究疾病的致病機理等。7、Sanger即DNA鏈末端合成終止法–Sanger法DNADNADNADNADNA4dNTPsddNTPsddATP，則所得到的合成物產(chǎn)生一系DNAA樣的方法，但需要不同的熒光標記。DNA8、以干擾素為例，試述其細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的途徑JAK酸化而進一步活化，同時將受體上的酪氨酸殘基磷酸化，STATSH2JAKJAKSTATSTATSTAT形成STAT序列，調(diào)節(jié)基因表達。9、理想載體應(yīng)具備哪些基本條件復(fù)制子：在宿主細胞內(nèi)大量復(fù)制；同一限制性酶在載體上只有單一的酶切位點；具有選擇性遺傳標記；有較多的拷貝數(shù)；分子量相對較小，有足夠大的接納目的基因的容量‘有較高的遺傳穩(wěn)定性。10、獲取目的基因的方法：從基因組DNA中分離獲得；從基因文庫中篩選獲得（基因組文庫和cDNA文庫）；化學(xué)合成法；PCR擴增；mRNA逆轉(zhuǎn)錄。11、基因工程技術(shù)與基因調(diào)控原理之間的關(guān)系?；蚬こ痰哪康氖鞘鼓康幕蚰芨咝П磉_?；虮磉_受DNA結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)因子與核酸相互辨認、結(jié)合等組成的表達體系的調(diào)控?；虮磉_調(diào)控可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾等水平進行基因工程載體的構(gòu)建必需應(yīng)用表達調(diào)控的基本理論知識，應(yīng)用已知的調(diào)控序列進行重組、改造。12、為什么拮抗VEGF能拮抗腫瘤血管生成？請舉出拮抗VEGF的三種生化策略。１）VEGF（主要是纖維蛋白原）的外滲，為腫瘤細胞的生長和新生VEGF拮抗VEGF主要圍繞對VEGF的阻斷，降低VEGF活性和阻斷VEGF信號傳導(dǎo)通路。⑴ VEGFVEGF⑵ VEGF23⑶ VEGFVEGF⑷ 利用基因治療阻斷、拮抗VEGFVEGFflt-1flt-2/KDR14、P53通過哪些機制介導(dǎo)細胞的生長阻滯P53對細胞增殖其負性調(diào)節(jié)作用，它與特定 DNA序列結(jié)合后可誘導(dǎo)細胞停滯在G1期，抑制細的生長。當P53基因活躍表達時，其產(chǎn)物P53蛋白作為一種典型的轉(zhuǎn)錄因子可促進 cipl基因的表達，生p21，p21蛋白與CDK2酶結(jié)合，抑制該酶的活性，導(dǎo)致細胞不能進入 DNA合成期，細胞無法進行有絲分裂，細胞分裂停止。DNA損傷激活p53在細胞周期的不同階段起不同作用，早期通過誘導(dǎo) p21對CDK-cyclin激酶抑制，激活限制點，阻止細胞周期前進，直到損傷修復(fù)，晚期引發(fā)細胞凋亡。15、K5作用的分子機制K5K5K5K5HIF-1p42/p44MAPKVEGFK5PEDFK5血管因子的調(diào)節(jié)是其抗血管增生的主要機制K5MAPKK5-2K516、血管增生與腫瘤轉(zhuǎn)移、血管生成不僅是腫瘤生長所必需，而且還是腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移所需要；、新生毛細血管的內(nèi)皮細胞能分泌膠原酶和組織纖溶酶原激活物，促進基質(zhì)降解，便于腫瘤細胞脫落、血管前期，循環(huán)中極少有腫瘤細胞，但在腫瘤血管化后，腫瘤細胞才持續(xù)出現(xiàn)在循環(huán)中。17、mRNA是怎樣成為cDNA文庫mRNA；oligo(dT)引導(dǎo)合成cDNAcDNA（RNAHDNA；DNAcDNAcDNAcDNA18、ViralVirulence:ThecapacityofavirustocausediseaseinaninfectedhostVirulencecanbequantitated:、meantimetodeath；、meantimetoappearanceofs3measurementoffever,weightloss；4、measurementofpathologicallesions(poliovirus),reductioninblood CD4+lymphocytes(HIV-1)19、Viralgenesaffectingvirulence:AffectingtheabilityofthevirustoreplicateModifyingthehost’sdefensemechanismsEnablingthevirustospreadinthehostHavingintrinsiccellkillingeffects20.Hostdefensesystemsagainstviralinfectionsaremultistep,sequential,andintercommunicating.1Physicalandchemicaldefense：skin,acidpH,andsurface-cleansing2Cell-autonomus,intrinsicdefensesystemsdefense：Productionofcytokines,inductionofapoptosis,interferencewithearlystepsofviralreplication3Innateandadaptiveimmunedefense：①、Direct,amplifiedresponsebycoordinatedactionofcytokinesandlymphocytes；Infectionclearedbypathogen-specificantibodies,helperTcells,andcytotoxicTcels③、ProductionandmaintanceofB-cellandT-cellmemorycells immunehost,readytoinstantlytothesameinfectionthatinducedthememoryresponse.21、正常角膜沒有血管的理論依據(jù)和實驗依據(jù)PEDFPEDF實驗中，PEDF0.4nmol/L量量比血管抑素，血小板反應(yīng)蛋白-1，內(nèi)皮抑素活性更高。如果抽掉玻璃體體液中的PEDF，其抗血管生成的活性消失，而表現(xiàn)出刺激血管生成的活性。22、試從PCR的原理和應(yīng)用角度，談?wù)勂溆泻螌嵱脙r值．PCRDNADNADNA）得到擴增；另一方面，新合成的DNAPCRDNA應(yīng)用價值：１） 生物學(xué)基礎(chǔ)研究：目的基因擴增和鑒定；DNA序列測定；定點突變；基因表達分析。２） 醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用：遺傳病基因診斷；致病病原體檢測；癌基因檢測；器官移植組織配型３） 法醫(yī)學(xué)物證鑒定：個體識別；親子鑒定。４） 其他：動、植物檢疫（轉(zhuǎn)基因動植物檢測；生物物種鑒定；系統(tǒng)進化研究；分子考古學(xué)等。補充PCRDNADNARNA人工合成的寡核苷酸引物，該引物與靶序列兩端互補。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：１DNADNADNAPCRDNA以便它與引物結(jié)合，為下一步做準備。２、模板ＤＮＡ與引物的退火（復(fù)性：模板ＤＮＡ經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度下降至適宜溫度（Ｔｍ低５°Ｃ，使引物與模板ＤＮＡ單鏈按堿基互補原則退火結(jié)合。３、引物的延伸：將溫度升至７２°Ｃ，ＤＮＡ模板－引物結(jié)合物在ＴａｑＤＮＡ聚合酶的作用下，以ＮＴＰ為底物，以靶序列為模板，按堿基配對與半保留的復(fù)制原理，合成一條新的與模板ＤＮＡ鏈互補的子鏈。上述三個步驟成為一個循環(huán)，新和成的ＤＮＡ分子繼續(xù)作為下次循環(huán)的模板，每完成一個循環(huán)需２－４分鐘，經(jīng)多次循環(huán)（２５－３０次）后就能將待擴增目的基因擴增放大幾百萬倍。以ＰＣＲ技術(shù)為基礎(chǔ)，與其他相關(guān)的分析技術(shù)方法相結(jié)合，衍生了許多新型的ＰＣＲ分析技術(shù)，如不對稱ＰＣＲ、反向ＰＣＲ、實時熒光定量ＰＣＲ等。23、病毒的分子生物學(xué)特點包括基本結(jié)構(gòu)和輔助結(jié)構(gòu)，基本結(jié)構(gòu)為核衣殼，由衣殼和病毒核心組成，輔助結(jié)構(gòu)為包膜。其中病毒核心分為核酸，病毒基因組，病毒衣殼為包繞在核酸外面的蛋白質(zhì)衣殼，衣殼由殼粒組成，而殼粒由多肽分子組成。24、闡述影響腫瘤轉(zhuǎn)移的因素有哪些腫瘤轉(zhuǎn)移是指惡性腫瘤細胞離開原發(fā)部位，通過各種途徑到達其他器官組織，并繼續(xù)生長、增值形成性質(zhì)與原發(fā)腫瘤相同的轉(zhuǎn)移瘤的過程。其機制極為復(fù)雜，主要與腫瘤細胞自身的特性、宿主細胞免疫狀態(tài)及轉(zhuǎn)移局部組織的特性有密切的關(guān)系，主要涉及以下四個步驟：①、惡性腫瘤細胞從其瘤組織中分離、釋放；②、分離出來的瘤細胞游走并穿越細胞基底膜及細胞外基質(zhì)而侵入血管、淋巴管等脈管系統(tǒng)。③、瘤細胞侵入并附著在多種組織間隙；④、瘤細胞在新的部位分裂、增值形成轉(zhuǎn)移性瘤組織。25、根據(jù)腫瘤轉(zhuǎn)移的過程和分子機制分析阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的策略和手段有哪些。、基因調(diào)控下的腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤轉(zhuǎn)移與促進基因和抑制基因之間表達失衡相關(guān)。、粘附分子與腫瘤轉(zhuǎn)移：粘附因子是一類介導(dǎo)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖（粘附解聚）兩個方面。、血管生成與腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移與血管形成密切相關(guān)、腫瘤新生毛細血管是在周邊組織原胞脫落、基質(zhì)浸潤、侵入和逸出循環(huán)系統(tǒng)、繼發(fā)臟器移行和微環(huán)境改造等發(fā)揮重要作用。MMPsMMPs（TIMP）在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中擔任重要角色抗腫瘤轉(zhuǎn)移的策略和手段：1）腫瘤轉(zhuǎn)移的基因治療腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23基因治療靶點tPA/uPAras基因表達阻斷血管生成抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移D34PF4FGFTNP-470：是煙曲霉素類似物。血小板反應(yīng)素-1TSP-1：能抑制血管生長因子。3）細胞粘附因子抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移4）MMPs抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移26、為了實際工作需要產(chǎn)生了許多種PCR，請簡述其名稱和作用。PCR：制備核酸序列測定的模板、制備雜交探針、基因組DNAPCRDNAcDNADNA；建立基因組步移文庫。PCR：用于檢測特定基因序列的存在或缺失。LP-PCR：大量臨床標本的基因診斷、可同時檢測多種基因成分。PCR：用于僅有一個引物的擴增PCR：建立cDNAcDNARNA原位PCR：可檢測細胞內(nèi)病毒感染、細胞內(nèi)基因重排、以及分析細胞內(nèi)RNA用，在檢測細胞的潛在感染方面也具有重要意義。8)PCR過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對結(jié)果進行分析,計算待測樣品的初始模板量。試述細胞周期各時相中cyclins的表達規(guī)律。G1M胞周期素。、G1G1G1/ScyclinC、cyclinDcy