微污染物微生物活性的微流控芯片直接檢測制藥工程專業(yè)畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述_第1頁
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微污染物—微生物活性的微流控芯片直接檢測2015屆制藥工程專業(yè)畢業(yè)論文—文獻(xiàn)綜述微污染物-微生物活性的微流控芯片直接檢測1.研究的目的和意義環(huán)境監(jiān)控已越來越為人們所需要,這就要求有合適的實(shí)時檢測設(shè)備。微流控芯片(MicrofluidicChip)將化學(xué)、生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域所涉及的樣品的選擇、制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元集成到一個幾平方厘米(甚至更?。┑奈⑿酒希ㄟ^微通道結(jié)構(gòu)來控制流體流動,從而完成不同的化學(xué)或生物反應(yīng)過程,并對其產(chǎn)物進(jìn)行分析,它為生化分析新局面的開創(chuàng)提供了一個新的研究平臺。通俗點(diǎn),就是將實(shí)驗(yàn)室搬到微芯片上,微流控芯片為環(huán)境監(jiān)控提供了一種合適的分析監(jiān)測設(shè)備。本文介紹了以色譜紙為基材制作了紙基微流控芯片的基本概況、芯片的發(fā)展現(xiàn)狀、芯片的制作、芯片檢測方法,并將紙基微流控和微污染物-微生物的活性相結(jié)合,對微污染物-微生物活性的微流控芯片直接檢測進(jìn)行了初步研究。2.微流控芯片的基本概況一種新興的芯片技術(shù)——微流控芯片技術(shù)以其快速分析、低消耗、微型化和自動化等特點(diǎn)發(fā)展非常迅速。微流控芯片(又稱芯片實(shí)驗(yàn)室)是一種以在微米尺度空間對流體進(jìn)行操控為主要特征的科學(xué)技術(shù)。它具有將化學(xué)和生物實(shí)驗(yàn)室的基本功能微縮到一個幾平方厘米芯片上的能力,已經(jīng)顯示了重要的應(yīng)用前景。該技術(shù)是在分析化學(xué)領(lǐng)域發(fā)展起來的,它以分析化學(xué)為基礎(chǔ),以微機(jī)電加工技術(shù)、微流體驅(qū)動或者控制、檢測技術(shù)為依托,以微通道網(wǎng)路為結(jié)構(gòu)特征,以化學(xué)和生命科學(xué)為主要應(yīng)用對象,把整個實(shí)驗(yàn)室的功能集成到芯片上,而且制作簡便,作為一種新興的科學(xué)技術(shù),微流控研究已經(jīng)涉及化學(xué)、生物學(xué)、工程學(xué)和物理學(xué)等諸多領(lǐng)域,學(xué)科交叉性強(qiáng),分析化學(xué)則是其第一輪也是最直接的一個應(yīng)用領(lǐng)域[1]。近年來,微流控研究發(fā)展迅速,技術(shù)創(chuàng)新層出不窮,應(yīng)用領(lǐng)域不斷拓寬。3.微流控芯片的發(fā)展現(xiàn)狀微型全分析系統(tǒng)(MiniaturizedTotalAnalysisSystems,μ-TAS)的概念是1990年Manz和Widmer等人首次提出來的,目前已經(jīng)發(fā)展為世界上最先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)之一。微型全分析系統(tǒng)(MiniaturizedTotalAnalysisSystems,μ-TAS)或稱芯片實(shí)驗(yàn)室(Laboratory-on-a-Chip,簡稱LOC)是一個跨學(xué)科的新領(lǐng)域,其目標(biāo)是通過分析化學(xué)、微機(jī)電加工(MEMS)、計算機(jī)、電子學(xué)、材料科學(xué)及生物學(xué)、醫(yī)學(xué)的交叉實(shí)現(xiàn)化學(xué)分析系統(tǒng)從試樣處理到檢測的整體微型化、自動化、集成化與便攜化。微流控芯片(MicrofluidicChip)、生物芯片(Biochip)和芯片實(shí)驗(yàn)室(Lab-On-Chip,LOC)都屬于片μ-TAS的范疇[2-3]。以微流控技術(shù)(Microfluidics)為基礎(chǔ)的微流控芯片是其核心技術(shù)。微流控分析芯片最初只是作為納米技術(shù)革命的一個補(bǔ)充,在經(jīng)歷了大肆宣傳及冷落的不同時期后,最終卻實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化生產(chǎn)。微流控分析芯片最初在美國被稱為“芯片實(shí)驗(yàn)室”(Lab-On-Chip),在歐洲被稱為“微整合分析芯片”(MicrototalAnalyticalSystems),隨著材料科學(xué)、微納米加工技術(shù)和微電子學(xué)所取得的突破性進(jìn)展,微流控芯片也得到了迅速發(fā)展,但還是遠(yuǎn)不及“摩爾定律”所預(yù)測的半導(dǎo)體發(fā)展速度[4]。今天阻礙微流控技術(shù)發(fā)展的瓶頸仍然是早期限制其發(fā)展的制造加工和應(yīng)用方面的問題。芯片與任何遠(yuǎn)程的東西交互存在一定問題,更不用說將具有全功能樣品前處理、檢測和微流控技術(shù)都集成在同一基質(zhì)中。由于微流控技術(shù)的微小通道及其所需部件,在設(shè)計時所遇到的噴射問題,與大尺度的液相色譜相比,更加困難。上世紀(jì)80年代末至90年代末,尤其是在研究芯片襯底的材料科學(xué)和微通道的流體移動技術(shù)得到發(fā)展后,微流控技術(shù)也取得了較大的進(jìn)步。為適應(yīng)時代的需求,現(xiàn)今的研究集中在集成方面,特別是生物傳感器的研究,開發(fā)制造具有超強(qiáng)運(yùn)行能力的多功能芯[5-6]片。4.微流控芯片制作目前的現(xiàn)狀微流控芯片的制作就是在所選用的芯片材料上制作出微通道,然后在制作好的微流控芯片上進(jìn)行樣品的前處理、分離、反應(yīng)和檢測,因此需要采用特定的微細(xì)加工技術(shù)。微加工技術(shù)就是將設(shè)計好的圖形高精度的轉(zhuǎn)移到芯片上的技術(shù),由于用于微流控芯片制作的材料比較多,它們的化學(xué)性質(zhì)也千差萬別,因此加工微流控芯片的方法也就比較多[7]。其中紙質(zhì)微流控芯片是近期發(fā)展起來的一種新的微流控芯片形式。與普通意義上的微流控芯片基材相比,它具有成本低、制備簡單、無需復(fù)雜外圍設(shè)備等特點(diǎn),非常適用于發(fā)展資源匱乏條件下的生化檢測新方法。由于色譜紙是由纖維素組成的,是親水性的,允許水溶液通過纖維層,這樣的性質(zhì)就為用色譜紙來制作微流控裝置提供了基礎(chǔ)。紙基微流控就是以色譜紙作為芯片材料,使用光刻技術(shù)、噴墨印刷技術(shù)、蠟印刷技術(shù)、打印PDMS和等離子體氧化等技術(shù)制作而成。這種低成本的紙基微流控診斷和分析裝置對于一些發(fā)展中國家、偏遠(yuǎn)地區(qū)或者是家庭式的床前檢驗(yàn)是很有幫助和吸引力的。由于它具有攜帶方便、可一次性使用、成本低廉、所需樣品的體積小、分析速度快、可以進(jìn)行多種物質(zhì)同時檢測等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)被越來越多地應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域,而且有著很好的發(fā)展前景[8]。4.1光刻法光刻法[9]就是在紙上形成微通道來制作紙基微流控,主要包括以下步驟:(1)首先將SU-8光刻膠均勻涂覆于色譜紙上(使用旋轉(zhuǎn)涂膠儀涂覆或者將色譜紙浸入SU-8光刻膠中進(jìn)行涂覆);(2)其次將涂好光刻膠的色譜紙在95℃下烘干大約10min(不同的文獻(xiàn)中根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求采用的烘干溫度也有所不同);(3)然后將一張已經(jīng)制作好的光掩膜覆蓋于色譜紙上,在紫外燈照射下進(jìn)行曝光處理,于95℃下再次烘干1-3min,將曝光后未聚合的光刻膠用丙酮除去,從而在色譜紙上形成微流控通道;(4)最后將制作好的紙基微流控在室溫條件下干燥lh即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。光刻法雖然是應(yīng)用最多的制作紙基微流控芯片的方法,但是它存在兩個缺點(diǎn):(l)堅硬的光刻膠憎水區(qū)容易受到彎曲、折疊而被破壞;(2)光刻技術(shù)需要昂貴的儀器設(shè)備,且光刻膠本身的價格也較貴,整個制作過程需要多個步驟才能完成。4.2噴墨印刷法[10]噴墨印刷法制作紙基微流控包含兩步,用疏水性的烯基烯酮二聚體-庚烷溶液代替墨汁裝入重組的數(shù)字噴墨打印機(jī)中,將設(shè)計好的微通道圖案打印到色譜紙上,烘干8min使烯基烯酮二聚體凝固,凝固以后打印區(qū)域變的疏水性,而沒有打印的區(qū)域仍然是親水性的,這樣就制作好了紙基微流控裝置。噴墨印刷可以將生物分子試劑或指示試劑精確地傳輸?shù)轿⒘骺胤磻?yīng)區(qū)域形成生物化學(xué)傳感區(qū)。通道區(qū)域和檢測區(qū)域的制作只需要簡單的印刷步驟即可完成,這樣制作好的紙基微流控傳感器可以用于特定的試驗(yàn)或者進(jìn)行定量分析試驗(yàn)。通過噴墨印刷制作的紙基微流控裝置可以承受嚴(yán)重的彎曲、折疊,而且制作所用的烯基烯酮二聚體相比SU-8光刻膠非常便宜,另外用噴墨印刷法制作紙基微流控時可以按照需求隨意改變打印的圖案。4.3蠟印刷[11]用蠟印刷方法制作紙基微流控分析裝置是指用合適的加熱裝置使蠟在色譜紙上熔化形成憎水區(qū),它的制作過程包含兩個核心步驟:(l)將固體蠟印刷在色譜紙表面上;(2)加熱使蠟融化進(jìn)入色譜紙的纖維層內(nèi)形成完整的憎水區(qū),這樣的研究工作己經(jīng)被獨(dú)立的進(jìn)行并完成。4.4在紙上打印PDMS[10]使用一種改進(jìn)的臺式繪圖儀,通過將憎水的PDMS聚合物溶解在己烷中形成的溶液打印在色譜紙上來形成一些簡單的微通道,這種方法克服了使用光刻法制作成的紙基微流控裝置的不靈活性。PDMS滲透入色譜紙內(nèi)形成一堵水溶液無法通過的僧水墻,水溶液通過毛細(xì)管作用而進(jìn)入親水通道中。這種方法相對SU-8光刻膠的優(yōu)點(diǎn)是PDMS是一種彈性纖維,它打印在色譜紙上時比光刻膠更具有柔韌性和彈性,因此紙基微流控裝置可以任意彎曲、折疊而沒有破壞通道的完整性。而且PDMS較SU-8光刻膠便宜,也不需要在一個潔凈間里完成這個工作,更為重要的是它不需要光刻時的曝光、顯影等步驟,制作過程更為簡單、快速。由于所使用的溶劑表面張力較小,PDMS可以很容易的滲透入色譜紙內(nèi),而色譜紙不是一個均一的、多孔、疏松材料,所以不能很好的控制PDMS的滲透,這樣就導(dǎo)致了制作出的紙基微流控的憎水區(qū)邊緣不直。4.5等離子體氧化[12]用等離子處理技術(shù)來制作微流控圖案制作過程如下:首先將色譜紙浸入到烷基烯酮二聚體-庚烷溶液當(dāng)中使色譜紙疏水化,然后馬上將其置于通風(fēng)櫥內(nèi)使庚烷揮發(fā),再將色譜紙置于100℃烘箱中45min以使烷基烯酮二聚體凝固,這樣得到的色譜紙就變得疏水化。接著將紙基夾在金屬膜(上面有設(shè)計好的圖案)之間,置于15W強(qiáng)度的真空等離子反應(yīng)器中15s,就在紙基上形成了親水區(qū)。用等離子處理技術(shù)不會在紙上留下明顯的標(biāo)志,而且還保持了色譜紙原有的柔韌性和表面形貌,等離子處理過的親水區(qū)域可以被水或水溶液濕潤而且允許溶液通過毛細(xì)管作用流動。和以前文獻(xiàn)所報道的紙基微流控的制作相比,這種新方法的最大優(yōu)點(diǎn)是不僅可以用于樣品檢測,而且可以將一些功能單元如控制開關(guān)、微量過濾器、微型反應(yīng)器集成在紙基微流控分析裝置上,使它的應(yīng)用更為廣泛。5.微流控芯片用于微污染物-微生物活性檢測技術(shù)目前的現(xiàn)狀微生物對人類生活有著巨大影響,微生物的快速、準(zhǔn)確檢測在環(huán)境監(jiān)測、食品安全檢測、微生物研究等方面具有重要意義。目前用于表征微生物活性的指標(biāo)有微生物量、菌種、各種酶(如脫氫酶、水解酶等)活性、ATP含量以及耗氧速率OUR等,微生物存在于水體、土壤、大氣中。常規(guī)微生物活性檢測方法主要有培養(yǎng)法、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法等,但存在耗時長、費(fèi)用高、對設(shè)備、人員及環(huán)境等要求高的問題。近年來,以微機(jī)電加工(MEMS)為依托的微流控芯片分析技術(shù)為微生物檢測提供了新途徑。微流控芯片分析系統(tǒng)可以集成多種不同的操作單元,易于實(shí)現(xiàn)高通量的分析,便于實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)微型化,樣品和試劑耗量極少,檢測手段更為豐富,在微生物分析檢測領(lǐng)域備受關(guān)注[13]。微流控研究中的重點(diǎn)問題包括檢測系統(tǒng)的微型化。與傳統(tǒng)的儀器分析系統(tǒng)相比,微流控芯片的檢測系統(tǒng)需要具備更高的靈敏度、更好的選擇性、更快的響應(yīng)速度、更好的信噪比等特點(diǎn)。在微流控芯片的分析過程中,可供檢測的樣品進(jìn)樣體積?。ㄎ⑸⒓{升甚至皮升),并且檢測的區(qū)域一般也很小,因此對檢測器的要求很高,需要有較高的靈敏度;而且由于微通道尺寸小,因而試劑與樣品的混合、反應(yīng)、分離等過程往往在很短的時間內(nèi)(秒級)完成,因此,微流控芯片分析系統(tǒng)的檢測器應(yīng)該具有較快的響應(yīng)速度。5.1比色分析紙基微流控在比色分析中應(yīng)用較為廣泛,也最為簡單使用光刻法制作了紙基微流控裝置,然后在上面滴加不同顏色、不同體積的染料,通過用掃描儀或者其他設(shè)備來記錄、比較顏色的強(qiáng)度,從而進(jìn)行比色分析[14]。5.2電化學(xué)分析電化學(xué)分析本身具有儀器簡單,成本低,靈敏度高,選擇性好等特點(diǎn),這和紙基微流控結(jié)合起來可能是有益的。先用光刻技術(shù)在色譜紙上制作微流控通道,接著采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)在紙微流控上制作了三電極系統(tǒng),然后用循環(huán)伏安法來解釋一些物質(zhì)如葡萄糖、乳酸、尿酸的電化學(xué)行為。紙基微流控電化學(xué)傳感裝置可以對水溶液中的一些重金屬離子進(jìn)行定量分析,并且這種低成本的分析裝置在公共健康檢查,環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用是很有用的[15]。用計時電流分析法對人工尿樣中的葡萄糖進(jìn)行了檢測和定量分析,結(jié)果顯示這種方法有很好的靈敏度和精密度,其檢出限為0.22mM(相當(dāng)于4mg/mL),這比以前所報道的傳統(tǒng)的血糖儀(1.0mM)和比色法(0.5mM)的檢出限都要低。紙基微流控電化學(xué)分析裝置為水溶液中生物物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)的定量分析提供了一個簡單、快速、低成本的平臺,它具有以下幾個優(yōu)點(diǎn):(l)將高濃度的檢測體系和小裝置結(jié)合在一起;(2)重量輕,攜帶方便,可一次性使用,可折疊;(3)重現(xiàn)性好,靈敏度高,精密度高;(4)不需要專業(yè)技術(shù)人員和復(fù)雜的儀器設(shè)備,成本低廉。5.3生物樣品分析預(yù)防和治療疾病的第一步就是準(zhǔn)確的進(jìn)行診斷,這在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的國家是完全可行的,可是對于一些發(fā)展中的比較落后的國家來說就有困難存在。而許多的診斷檢測都是依據(jù)紙進(jìn)行分析試驗(yàn)的,這些試驗(yàn)對疾病進(jìn)行了檢查,并且對環(huán)境狀況進(jìn)行了分析。對于人類健康的監(jiān)控來說,生物樣品的分析是必要的,傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室的儀器雖然可以對生物樣品進(jìn)行定量分析,但是這些分析儀器往往是大型的,昂貴的,而且需要專業(yè)技術(shù)人才,以及對生物樣品體積的需求也很大,在一些偏遠(yuǎn)地區(qū)比如那些工業(yè)不發(fā)達(dá)的城市,或者緊急情況,或者家庭健康檢測是很難實(shí)施的,而紙基微流控分析裝置可能是最簡單的、最便宜的、最好操作的、需要液體量最小的生物醫(yī)學(xué)分析裝置,它為生物醫(yī)學(xué)診斷檢測提供了更好的平臺,比簡單的試紙檢驗(yàn)更多元化,而且可以同時進(jìn)行多個樣品的平行檢測試驗(yàn),并在相對較短的時間內(nèi)就可以完成,更快速、方便[15]。例如:糖尿病的檢測6.脫氫酶活性(DHA)測定法的發(fā)展目前用于表征微生物活性的指標(biāo)有微生物量、菌種、各種酶(如脫氫酶、水解酶等)活性、ATP含量以及耗氧速率OUR等。廢水生物處理及活性污泥消化的實(shí)質(zhì),是經(jīng)微生物所產(chǎn)生的多種酶催化一系列的生物氧化還原反應(yīng)。其中,脫氫酶能使被氧化有機(jī)物的氫原子活化并傳遞給特定的受氫體。因而,脫氫酶的活性可以反映處理體系內(nèi)活性微生物量及其對有機(jī)物的降解活性,以評價降解性能。也可應(yīng)用該酶活性做為檢測金屬對活性污泥的毒性指標(biāo)。因此,脫氫酶活性的檢測在廢水生物處理中甚為重要[16]。脫氫酶由活的生物體所產(chǎn)生,是一種氧化還原酶,在生物細(xì)胞內(nèi)催化有機(jī)物氧化脫氫,并將其傳遞給最終受氫體,它能夠催化氫從被氧化的物體(基質(zhì)AH)上轉(zhuǎn)移到另一個物體(受氫體B)上:AH+B→A+BH,即酶促有機(jī)物質(zhì)脫氫的作用。因此,脫氫酶活性可以通過加入人工受氫體的辦法進(jìn)行檢測。通常用于檢測脫氫酶活性的人工受氫體包括TTC(2,3,5一氯化三苯基四氮唑)、刃天青、亞甲基藍(lán)以及取INT(碘硝基氯化四氮唑藍(lán))等,通常用人工受氫體(指示劑)的還原變色速度來確定脫氫過程的強(qiáng)度。其中研究和應(yīng)用最廣的是TTC,TTC是最早被人們發(fā)現(xiàn)并用于生化分析實(shí)驗(yàn)中的人工受氫體[17]。各自的原理如下:氯化三苯基四氮唑(TTC)無色接受氫原子而被還原成紅色的三苯基甲臢(TF);(2)對氯化碘硝基四氮唑(INT)接受氫原子被還原為藍(lán)色物質(zhì);生物染料亞甲基藍(lán)其測定脫氫酶活性的過程則是一個退色過程,生物新陳代謝過程中,脫氫酶將有機(jī)質(zhì)的氫脫下,使有機(jī)質(zhì)氧化,并將氫轉(zhuǎn)移給氧化性化合物,在無氧條件下亞甲基藍(lán)(藍(lán)色)接收氫轉(zhuǎn)化成還原型亞甲基藍(lán)(無色);(4)生物染料刃天青測定脫氫酶活性的過程也是一個退色過程,但反應(yīng)過程稍復(fù)雜一些,反應(yīng)步驟如下圖所示:相對于TTC,亞甲基藍(lán)、刃天青的褪色反應(yīng)不容易控制,而INT零售價格較高,且國內(nèi)不易買到。參考文獻(xiàn)[1]McCormickR,NelsonR,AlonsoAnligoM.MicrochannelElectrophoreticSeParationsofDNAinInjection-MoldedPlasticSibstrates[J].Anal.Chem.1997,69(14):2626-2630.[2]RobertsM.A,RossierJ.S,BercierP.UVLaserMaehinesPolymerSubstratesfortheDevelopmentofMicrodiagnostieSystems[J].Anal.Chem.1997,69(11):2035-2042.[3]FabricioRibeirodeSouza,GuilhermeLiberatoAlves,andWendellKarlosTomazelliColtro.Capillary-DrivenToner-BasedMicrofluidicDevicesforClinicalDiagnosticswithColorimetricDetection[J].Anal.Chem.2012,84:9002-9007.[4]MalloryM.Mentele,JosephineCunningham,KirstenKoehler,JohnVolckens,andCharlesS.Henry.MicrofluidicPaper-BasedAnalyticalDeviceforParticulateMetals[J].Anal.Chem.2012,84:4474-4480.[5]周小棉,戴忠鵬,羅勇等.注塑型聚甲基丙烯酸甲酷多通道微流控芯片的研制及其性能考察[J].高等學(xué)?;瘜W(xué)學(xué)報,2005,1(26):52一54.[6]SweeNginTan,LiyaGe,HsihYinTan,WengKeongLoke,JinrongGao,andWeiWang.Paper-BasedEnzymeImmobilizationforFlowInjectionElectrochemicalBiosensorIntegratedwithReagent-LoadedCartridgetowardPortableModularDevice[J].Anal.Chem.2012,84:10071-10076.[7]宋滿倉,王敏杰.微成型技術(shù)的現(xiàn)狀與發(fā)展[J].中國機(jī)械工程,2003,14(15):1-5.[8]殷學(xué)鋒,方群,凌云揚(yáng).微流控分析芯片的加工技術(shù)[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2001,4:10-14.[9]唐飛,王曉浩,楊波.PMMA微流控檢測芯片的設(shè)計與制作[J].納米技術(shù)與精密工程,2009,7(2):182-185[10]朱迅.聚合物微流控芯片的激光加工技術(shù)研究[J].杭州:浙江大學(xué),2004.[11]FogartyB.A,HepPertK.E,CoryT.J.etal.RapidFabrieationofPoly(dimethylsiloxane)BasedMicroehiPCapillaryElectroPhoresisDevieesUsingCO2LaserAblation[J].Analyst,2005,130(6):924-930.[12]AMair,EmilGeiger,AlbertPPisano.Injectionmoldedmicrofluidicchipsfeaturingintegratedinterconnects[J].LabChip,2006(6):l346-1354.[13]王曉東,羅怡,劉沖.塑料(PMMA)微流控芯片微通道熱壓成形工藝參數(shù)的確定[J].中國機(jī)械工程,2005,16(22):2061—2063.[14]KoumyL.SchmalzingD,SolosSO.eta1.Eighthundred-basesequencinginamierofahricatedelectraphoreticdevice[J].Anal.Chem.,2000,72:3388-3391.[15]FangQ,XuGM,FangZL.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IAbstract II第1章緒論 11.1電器實(shí)驗(yàn)臺設(shè)計的目的和意義 11.1.1目的 11.1.2實(shí)驗(yàn)臺設(shè)計的意義 11.2研究和發(fā)展現(xiàn)狀 11.3設(shè)計的主要內(nèi)容 2第2章威馳汽車電器系統(tǒng)應(yīng)用及工作原理 32.1威馳汽車電氣系統(tǒng)及原理 32.1.1電器系統(tǒng)的組成 32.1.2工作原理 32.2電路的讀圖和實(shí)驗(yàn)臺線路分析 62.2.1汽車線路遵循的一般原則 62.2.2豐田威馳汽車電路圖的讀法實(shí)例 72.3本章小結(jié) 9第3章電器實(shí)驗(yàn)臺的設(shè)計 103.1實(shí)驗(yàn)臺的總體設(shè)計要求 103.2

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