基因工程二的基本操作程序知識講解

1、理解獲取目的的方法

2（重點(diǎn)、難點(diǎn)）理解表達(dá)載體的構(gòu)建原理3、理解將目的到入受體細(xì)胞的方法4、理解目的的檢測與鑒定可以采用不同的方法1、目的：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)（組文庫↓DNA目的DNA目的DNA結(jié)構(gòu)的核苷酸序—可在短時(shí)間內(nèi)大專一性強(qiáng)，可產(chǎn)生自然工作量大，盲目性高— RNADNA邊解旋邊，半保30（③標(biāo)記：一般為抗生素抗性或熒光等，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的目的（細(xì)胞。農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞的DNA上。80%轉(zhuǎn)植物通過此種方法獲得。②槍1987年中國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的植物授粉后花粉形成的花粉管還未愈合前剪去柱頭滴加重組DNA，將目的導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞：常用顯微注射法法方①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：目的插入Ti質(zhì)粒的T-DNA→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→穩(wěn)定維持和表②槍顯微注射法：目的表達(dá)載體提純→取卵（卵）→顯微注射→卵發(fā)育→新性狀動(dòng)①植物：可以是卵細(xì)胞（卵、體細(xì)胞（可經(jīng)組織培養(yǎng)成為完整②動(dòng)物：卵（因?yàn)轶w細(xì)胞的全能性受到嚴(yán)格限制①轉(zhuǎn)生物的DNA上是否插入了目的，這是目的能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。檢測DNA②目的是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，這是檢測目的是否發(fā)揮功能作用的第一步。檢測方法同樣是采用分子目的是否進(jìn)入受之間目的是否轉(zhuǎn)錄目的是否翻譯源性，也就是說目的已經(jīng)被導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，反之，則說明目的沒有進(jìn)入受體細(xì)胞中 PCR擴(kuò)增目的的原理是 ，PCR所使用的酶是 ，后者的形狀 從文庫獲取PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合限制酶DNA雙鏈DNA有一段已知目的的核苷酸序列DNA聚合酶耐高質(zhì)粒從文庫中獲得、PCR技術(shù)擴(kuò)增、人工合成氨基獲取目的的方法有從文庫中獲取、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的和人工合成，其中文庫包括組DNAPCR技術(shù)是在生物體外擴(kuò)增。DNA片段，原理是DNA雙鏈。前提條件是有一段已知目的的核苷酸序運(yùn)送目的的載體常用的是質(zhì)粒和，質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子【點(diǎn)評】本題考查目的的提取，需要理解三種獲取目的的方法下列不屬于獲取目的方法的是 A．利用DNA連接酶目的B．利用DNA聚合酶目C．從文庫中獲取目的D．利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目【答案】【解析】目的可以從自然界中已有的物種中分離出來，也可以用人工的方法合成。目的主要指編碼蛋（1）（2）（3）蟲插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)人棉花的卵中，結(jié)果抗蟲在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子（抗蟲首端，導(dǎo)人棉花卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力。科學(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲的質(zhì)粒中插入終止子（抗蟲末端，再導(dǎo)人棉花卵，結(jié)果長成的植株有了抗蟲能力。由以上過程推知，作為目的的運(yùn)載體應(yīng)具備的結(jié)構(gòu)是（A．目的、啟動(dòng) B．目的、終止C．目的、啟動(dòng)子、終止子D．目的、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)【答案】【解析】本題考查表達(dá)載體的構(gòu)建所需要的條件【點(diǎn)評本題屬于信息材料題考查從中提取信息的能力當(dāng)然有了課上的基礎(chǔ)該題出來應(yīng)該不成問題。（1）的特點(diǎn)：如果一個(gè)來自動(dòng)物的目的含有內(nèi)含子，就不能用于轉(zhuǎn)植物，因?yàn)閯?dòng)物中內(nèi)含子的剪接系統(tǒng)與植物的不同，植物不能將動(dòng)物的內(nèi)含子剪切掉，只能用該的cDNA。的產(chǎn)物如果是一要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子或組織特異性啟動(dòng)子。啟動(dòng)子有強(qiáng)有弱，選擇強(qiáng)啟動(dòng)子可以增加轉(zhuǎn)錄活性，使產(chǎn)物量增多。如果希望在生物的某個(gè)組織表達(dá)，如只在植物中表達(dá)，就要選擇中特異表達(dá)的啟動(dòng)子。要選擇標(biāo)記，如抗生素，以便選擇出真正的轉(zhuǎn)生物A．采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到的目的有啟動(dòng)子、終止B．用同種限制酶處理質(zhì)粒和含目的的DNA，可產(chǎn)生相同的黏性末端而形成重組DNA分D．啟動(dòng)子對于目的在番茄的葉肉細(xì)胞中的表達(dá)是不可缺少【答案】 【答案】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的導(dǎo)入植物細(xì)胞采用最多的方法。下圖為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖，請據(jù)圖回答問題 Ti質(zhì)粒原存在于 中，其上的T-DNA具有可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的 的特點(diǎn)，因此攜帶外源的DNA片段必須插入到 首先必須經(jīng)過組織培養(yǎng)，人工合成的培養(yǎng)基一般包 、維生素等。植物體細(xì)胞發(fā)育成完整植株的過程說明植物細(xì)胞具 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適于將目的導(dǎo) 和子植物，而不易于大多 若將相關(guān)的目的導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞或微生物細(xì)胞則常采 （1）DNA（2）DNA農(nóng)桿菌細(xì)胞質(zhì) 糖類無機(jī)鹽植物激素雙子葉植物葉植顯微注射技術(shù)Ca2+（ ①檢測受體細(xì)胞是否有目的；②檢測受體細(xì)胞是否有致?、蹤z測目的是否轉(zhuǎn)錄信使RNA；④檢測目的是否翻譯蛋白A．①②③B．②③④C．①③④【答案】【解析】目的的檢測包括：檢測轉(zhuǎn)生物的DNA上是否插入了目的，方法是用DNA探針，使 B．大腸桿菌中檢測到人胰島