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抗微生物藥物和敏感性試驗(yàn)第一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六一、青霉素類特點(diǎn):殺菌作用強(qiáng)、毒性低新品種抗菌譜廣、價(jià)廉青G大劑量CSF濃度高青G不耐酶過敏反應(yīng)率高第三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(一)、天然青霉素青霉菌培養(yǎng)液中提得:

X、F、G、K

青霉素G(penicillinG)〔性狀〕干燥粉末,水溶液中極不穩(wěn)定。劑量用U表示。青霉素與青霉素結(jié)合蛋白(PBP)結(jié)合,抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。第四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六〔體內(nèi)過程〕不宜口服,im吸收快而完全。c.s.f中濃度低,炎癥時(shí)可達(dá)有效濃度,幾乎全部以原型經(jīng)尿排泄。延長(zhǎng)作用時(shí)間可制成混懸液制劑?!部咕饔谩痴V

G+球菌、G+桿菌、G-球菌、螺旋體?!才R床應(yīng)用〕敏感菌感染的首選:

1.溶血性鏈球菌所致蜂窩織炎、丹毒、扁桃體炎、心內(nèi)膜炎……;第五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

2.肺炎鏈球菌引起的大葉肺炎、膿胸、支氣管肺炎……;

3.草綠色鏈球菌引起的心內(nèi)膜炎;

4.腦膜炎;

5.淋病、梅毒、鉤端螺旋體病、回歸熱;

6.白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽……,需同時(shí)應(yīng)用相應(yīng)的抗毒素以中和外毒素。第六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六〔不良反應(yīng)〕

1.過敏反應(yīng):皮膚過敏、血清病樣反應(yīng)較多見;

過敏性休克:最嚴(yán)重,表現(xiàn)有循環(huán)衰竭、呼吸衰竭和中樞抑制。

2.局部刺激癥狀:紅腫、疼痛、硬結(jié);

3.大劑量iv可引起精神錯(cuò)亂、抽搐;高血鉀癥或高鈉血癥。

4.赫氏反應(yīng)第七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(二)半合成青霉素

1.耐酸青霉素-青霉素V2.耐酶青霉素-苯唑青霉素、萘夫西林、雙氯西林等,可注射和口服。

3.廣譜青霉素-耐酸、可口服,不耐酶,對(duì)耐藥金葡菌感染和銅綠假單胞菌無(wú)效。氨芐西林,阿莫西林4.抗銅綠假單胞菌廣譜青霉素羧芐西林

不耐酸,注射。哌拉西林

第八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六應(yīng)用青霉素類的注意事項(xiàng)無(wú)論何種給藥途徑,用青霉素類前必須詳細(xì)詢問青霉素類、其他藥物過敏史及過敏性疾病史,并須先做青霉素皮試。青霉素不用于鞘內(nèi)注射。青霉素鉀鹽不可快速靜脈注射。本類藥物在堿性溶液中易失活。第九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六二、頭孢菌素類第一代頭孢菌素特點(diǎn):對(duì)G+(除腸球菌、MRSA外)有良好抗菌作用;對(duì)G-作用較差,少數(shù)大腸、肺炎克雷伯菌等有活性。

對(duì)β-內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定。血半衰期大多較短,不易進(jìn)CSF。對(duì)腎臟有一定毒性。藥物:頭孢噻吩、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢拉定臨床應(yīng)用:第一代主要用于敏感菌所致的呼吸道和尿路感染、皮膚和軟組織感染

第十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第二代頭孢菌素特點(diǎn):對(duì)G+菌作用與第一代相似,對(duì)多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌有較好抗菌作用,對(duì)銅綠假單孢菌無(wú)活性。對(duì)酶較穩(wěn)定。頭孢呋辛等在CSF中達(dá)一定濃度。腎毒性輕。藥物:頭孢呋辛、頭孢替安、頭孢孟多、頭孢尼西。臨床應(yīng)用:可用于敏感菌所致肺炎、膽道感染、菌血癥、尿路感染和其他組織器官感染第十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第三代頭孢菌素特征:對(duì)葡萄球菌的作用較第一、二代弱,對(duì)G-菌包括腸桿菌科中的耐藥菌具強(qiáng)大抗菌作用,部分品種對(duì)銅綠假單胞菌作用良好。對(duì)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定。腦脊液中達(dá)一定濃度。基本無(wú)腎毒性。藥物:頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢他啶臨床應(yīng)用:用于危及生命的敗血癥、腦膜炎、肺炎、骨髓炎、尿路的嚴(yán)重感染,有效控制嚴(yán)重的銅綠假單胞菌感染。

第十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第四代頭孢菌素特點(diǎn):化學(xué)結(jié)構(gòu)在頭孢烯C3位都有一個(gè)四價(jià)氮原子。與三代頭孢相比抗菌譜更廣,對(duì)枸櫞酸、陰溝、摩根、普魯威登、沙雷作用強(qiáng),多數(shù)對(duì)銅綠假單胞菌有活性,肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、MSSA作用強(qiáng)。對(duì)多種?-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定,尤其是染色體介導(dǎo)BushⅠ組酶的抗菌作用強(qiáng)。對(duì)細(xì)胞膜的通透性強(qiáng)。藥物:頭孢吡肟、頭孢匹羅、頭孢噻利適應(yīng)證:用于對(duì)第三代耐藥的細(xì)菌感染。第十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六各代頭孢菌素特點(diǎn)

G+G-綠膿腎毒性酶穩(wěn)定一代+++++—+++二代++++—+++三代+++++++/+—+++四代+++++++++—++++第十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

應(yīng)用頭孢菌素類的注意事項(xiàng)

有青霉素類、其他β-內(nèi)酰胺類及其他藥物過敏史的患者,有明確應(yīng)用指征時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎使用本類藥物。

第十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六三、其他?-內(nèi)酰胺類抗生素拉氧頭孢類

頭霉烯類:對(duì)厭氧菌作用強(qiáng)。頭孢西丁。

氧頭孢烯類:具有三代頭孢菌素的特點(diǎn),對(duì)產(chǎn)

?-內(nèi)酰胺酶的G-菌作用強(qiáng)。拉氧頭孢、氟氧頭孢??梢鸪鲅徒渚屏驑臃磻?yīng)。

單環(huán)類

抗菌譜窄,腸桿菌科和銅綠假單胞具強(qiáng)大作用無(wú)腎毒性,可用于青霉素過敏的患者氨曲南、卡蘆莫南第十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

β-內(nèi)酰胺酶抑制劑

克拉維酸(Clavulanic)舒巴坦(Sulbactam)他唑巴坦(Tazobactam)特點(diǎn):

對(duì)?-內(nèi)酰胺酶有較強(qiáng)的抗菌作用增強(qiáng)革蘭陰性菌的抗菌活性2-8倍擴(kuò)大對(duì)金葡菌及厭氧菌的抗菌譜誘導(dǎo)AmpC酶能力:克拉維酸>舒巴坦、三唑巴坦ESBLs抑制能力:三唑巴坦>克拉維酸、舒巴坦β-內(nèi)酰胺酶抑制劑第十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

β-內(nèi)酰胺類/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑適應(yīng)證

本類藥物適用于對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥的細(xì)菌感染。重癥感染者或不能口服者應(yīng)用本藥的注射劑,輕癥感染或經(jīng)靜脈給藥后病情好轉(zhuǎn)的患者可予口服給藥。第十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六碳青霉烯類抗生素特點(diǎn):具有良好的穿透性;能與PBP1、PBP2結(jié)合使細(xì)菌細(xì)胞溶解;対質(zhì)粒和染色體介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺穩(wěn)定。藥物:目前在國(guó)內(nèi)應(yīng)用的碳青霉烯類抗生素有亞胺培南(泰能)、美羅培南(美平、倍能)、帕尼培南、多利培南。適應(yīng)證:碳青霉烯類抗生素對(duì)各種革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陰性桿菌(包括銅綠假單胞菌)和多數(shù)厭氧菌具強(qiáng)大抗菌活性,對(duì)多數(shù)β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定。對(duì)甲氧西林耐藥葡萄球菌和嗜麥芽窄食單胞菌等抗菌作用差。

第十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六碳青霉烯類注意事項(xiàng)

禁用于對(duì)本類藥物及其配制成分過敏的患者。本類藥物不宜用于輕癥感染,更不可作為預(yù)防用藥。原有癲癇等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患者避免應(yīng)用本類藥物。腎功能不全者及老年患者應(yīng)用本類藥物時(shí)應(yīng)根據(jù)腎功能減退程度減量用藥。第二十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

四、氨基糖苷類特點(diǎn):

抗菌譜廣,主要作用于G-菌,對(duì)葡萄球菌有一定作用;對(duì)溶鏈、肺球作用不強(qiáng);對(duì)厭氧菌無(wú)作用。胃腸道吸收差,不易透過血腦屏障。具有耳毒性和神經(jīng)肌肉接頭阻滯作用。

藥物:1、由鏈霉菌屬發(fā)酵濾液提?。嚎恰㈡溍顾?、妥布霉素、核糖霉素、新霉素。2、由小單胞菌屬發(fā)酵濾液提?。簯c大。3、半合成的氨基糖苷類:阿米卡星、奈替米星、大觀霉素、異帕米星。第二十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

氨基糖苷類注意事項(xiàng)

對(duì)氨基糖苷類過敏的患者禁用。任何一種氨基糖苷類均具腎、耳毒性(耳蝸、前庭)和神經(jīng)肌肉阻滯作用,因此用藥期間應(yīng)監(jiān)測(cè)腎功能(尿常規(guī)、血尿素氮、血肌酐),嚴(yán)密觀察聽力,注意觀察神經(jīng)肌肉阻滯癥狀。一旦出現(xiàn)上述不良反應(yīng)先兆時(shí),須及時(shí)停藥。新生兒、嬰幼兒、老年患者、妊娠期、哺乳期應(yīng)避免使用本類藥物。本類藥物不可眼內(nèi)或結(jié)膜下給藥,因可引起黃斑壞死。

第二十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六五、

喹諾酮類特點(diǎn):

抗菌譜廣,新品種對(duì)G-菌具強(qiáng)大抗菌作用,包括對(duì)銅綠假單孢菌、金葡菌亦具良好作用,結(jié)核、支原體、衣原體、厭氧菌有作用??诜蘸?,部分可靜脈給藥。體內(nèi)分布廣,組織濃度高。不良反應(yīng)輕,惡心、嘔吐、肝酶升高、偶有頭暈、抽搐。第一代:萘啶酸第二代:環(huán)丙沙星、氧氟沙星、第三代:左氧沙星、莫西沙星、司帕沙星第二十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六作用機(jī)制:

1、通過外膜孔蛋白和磷脂滲透進(jìn)入細(xì)胞;2、作用DNA旋轉(zhuǎn)酶,干擾細(xì)胞DNA復(fù)制、修復(fù)和重組。適應(yīng)癥:G-菌所致尿感、腸道感染、前列腺炎、淋病、呼吸道、骨、關(guān)節(jié)、皮膚軟組織等感染。

第二十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六臨床常用的氟喹諾酮類比較藥物綠膿血濃度半減期(h)排泄腎功能↓

環(huán)丙沙星++++3-4肝、腎輕度不減氧氟沙星++++5-7腎減量左氧氟沙星++++5-7腎減量莫西沙星++++12糞不減第二十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六喹諾酮類注意事項(xiàng)對(duì)喹諾酮類藥物過敏的患者禁用。18歲以下未成年患者避免使用本類藥物。制酸劑和含鈣、鋁、鎂等金屬離子的藥物可減少本類藥物的吸收,應(yīng)避免同用。妊娠期及哺乳期患者避免應(yīng)用本類藥物。第二十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六六、大環(huán)內(nèi)酯類特點(diǎn):

主要作用于需氧G+菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌、厭氧菌。細(xì)菌對(duì)不同品種間有一定的交叉耐藥性。血濃度低,不易透過血腦屏障。主要副作用為胃腸道反應(yīng)、靜脈炎。藥物:紅霉素、麥迪霉素、乙酰麥迪霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素。第二十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六作用機(jī)制:不可逆地結(jié)合到細(xì)菌核糖體50S亞基的靶位上,抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。新大環(huán)內(nèi)酯類具有免疫調(diào)節(jié)功能,能增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能。耐藥機(jī)制:

1.產(chǎn)生滅活酶

2.靶位的結(jié)構(gòu)改變

3.攝入減少外排增多

第二十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

新大環(huán)內(nèi)酯類特點(diǎn)藥物:克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素

抗菌譜廣,支原體、衣原體、軍團(tuán)菌有良好作用,對(duì)非結(jié)核分支桿菌有作用。藥代特點(diǎn):吸收良好,組織濃度高,半減期長(zhǎng)。不良反應(yīng)發(fā)生率低,尤其是胃腸道反應(yīng)明顯低。服藥方便,每日一次。

第二十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六大環(huán)內(nèi)酯類注意事項(xiàng)

禁用于對(duì)紅霉素及其他大環(huán)內(nèi)酯類過敏者。紅霉素及克拉霉素禁止與特非那丁合用,以免引起心臟不良反應(yīng)。肝病患者和妊娠期患者不宜應(yīng)用紅霉素酯化物。妊娠期患者有明確指征用克拉霉素時(shí),應(yīng)充分權(quán)衡利弊,決定是否采用。哺乳期患者用藥期間應(yīng)暫停哺乳。

第三十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六七、氯霉素

特點(diǎn):

抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣、易透過血腦屏障。對(duì)造血系統(tǒng)有肯定的抑制作用。適應(yīng)癥:流感嗜血桿菌、傷寒桿菌、沙門菌所致傷寒、腸道感染、腹腔、盆腔、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。第三十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

林可霉素類特點(diǎn):

抗菌譜窄,對(duì)金葡菌等G+C菌具抗菌作用;對(duì)厭氧菌亦具良好作用。在膽汁、骨與骨髓中濃度較高??肆置顾乜诜胀耆8弊饔幂^輕微,偶可引起偽膜性腸炎。藥物:

克林霉素、林可霉素第三十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

八、多肽類抗生素

抗菌譜窄、抗菌作用強(qiáng)屬殺菌劑均有不同程度的腎毒性主要適用于對(duì)其敏感的多重耐藥菌所致的重癥感染

藥物:去甲萬(wàn)古霉素、萬(wàn)古霉素、替考拉寧、多粘菌素類第三十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六萬(wàn)古霉素特點(diǎn):

主要作用于各種G+菌:耐藥金葡菌、腸球菌。體內(nèi)分布廣,可透過血腦屏障,CSF中達(dá)有效濃度。有明顯耳毒性和一定腎毒性。藥物:去甲萬(wàn)古霉素、萬(wàn)古霉素適應(yīng)癥:金葡菌(包括MRSA)及腸球菌所致敗血癥、心內(nèi)膜炎及口服治療難辨梭菌所致偽膜性腸炎。第三十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六萬(wàn)古霉素注意事項(xiàng)禁用于對(duì)萬(wàn)古霉素或去甲萬(wàn)古霉素過敏的患者。不宜用于:(1)預(yù)防用藥;(2)MRSA帶菌者;(3)粒細(xì)胞缺乏伴發(fā)熱患者的常規(guī)經(jīng)驗(yàn)用藥;(4)局部用藥。本類藥物具一定腎、耳毒性,用藥期間應(yīng)定期復(fù)查尿常規(guī)與腎功能,監(jiān)測(cè)血藥濃度,注意聽力改變,必要時(shí)監(jiān)測(cè)聽力。

第三十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六九、磺胺類藥1、全身感染用藥腸道易吸收,短效類:不良反應(yīng)較多,不用中效類:磺胺嘧啶(SD)長(zhǎng)效類:不單獨(dú)應(yīng)用2、腸道感染用藥

柳氮磺吡啶(SASP)3、外用磺胺藥

磺胺米隆(SML,甲磺滅膿)第三十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六硝基呋喃類

有呋喃妥因和呋喃唑酮,對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌和部分革蘭陰性桿菌具有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用。主要是阻斷細(xì)菌的代謝。但由于本類藥物口服吸收后在體內(nèi)很快被代謝滅活,不適于治療全身感染而用于腸道、尿路感染和外用藥。

十、合成的抗菌藥物第三十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六硝基米唑類

對(duì)革蘭陽(yáng)性、陰性厭氧菌包括脆弱類桿菌有較好的抗菌作用。對(duì)需氧菌無(wú)效。主要是阻斷細(xì)菌DNA合成,阻止DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制,導(dǎo)致細(xì)菌的死亡。臨床上有甲硝唑(滅滴靈)和替硝唑。噁唑烷酮類:

利奈唑胺對(duì)G+菌,是細(xì)菌蛋白合成的抑制劑。第三十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六抗菌藥物的作用機(jī)制第三十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第二節(jié)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)(AST)的目的和意義

預(yù)測(cè)抗菌治療的效果指導(dǎo)臨床選擇用藥進(jìn)行耐藥菌監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)新藥的效果第四十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六抗生素選擇時(shí)需考慮的因素藥物藥代動(dòng)力學(xué)吸收、分布、代謝、排泄給藥方案微生物學(xué)抗菌機(jī)制抗菌譜感染部位濃度對(duì)細(xì)菌MIC對(duì)細(xì)菌MIC藥效學(xué)時(shí)間/濃度依賴型殺菌劑/抑菌劑組織滲透抗菌時(shí)效結(jié)果臨床效果細(xì)菌清除患者依從性耐受性耐藥產(chǎn)生第四十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六注意:

1、只有懷疑分離菌為感染病原菌時(shí)才做藥敏試驗(yàn)。2、一定要用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)規(guī)定的藥敏試驗(yàn)方法或廠家提供的說(shuō)明來(lái)操作和解釋報(bào)告結(jié)果。3、只選擇合適于靶細(xì)菌及感染靶位的抗菌藥進(jìn)行測(cè)試和向臨床報(bào)告。4、要頻繁的進(jìn)行質(zhì)控工作以確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。5、要加快向臨床或感染部門報(bào)告無(wú)菌部位、全身感染發(fā)現(xiàn)的病原菌、耐藥類型和藥敏信息以及致病性強(qiáng)或有意義的不常見的菌株。如鼠疫桿菌、炭疽桿菌、布氏桿菌等毒株;諾卡菌、分枝桿菌、放線菌、侵襲性真菌等。同時(shí)還要報(bào)告院內(nèi)多重耐藥株的爆發(fā)流行。第四十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六一、藥敏試驗(yàn)抗菌藥物的選擇

藥敏試驗(yàn)選擇依據(jù):CLSI標(biāo)準(zhǔn),分A、B、C、U、O、Inv組。

A組常規(guī)首選藥物,全部報(bào)告B組醫(yī)院感染重要藥物,選擇性報(bào)告C組用于A、B組耐藥或過敏的患者U組用于尿道分離細(xì)菌O組一般不允許常規(guī)試驗(yàn)并選擇的藥物Inv組對(duì)該菌群作研究用且尚未經(jīng)FDA批準(zhǔn)的藥物。第四十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

腸桿菌科青霉素類

A:氨芐西林B:哌拉西林0:羧芐、美洛、替卡西林,Mecillinamβ-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑復(fù)合物B:氨芐/舒或阿莫/克、哌拉/他、替卡/克頭孢類(注射用)

A:頭孢噻吩,唑林B:頭孢孟呋辛、頭孢吡肟、頭孢西丁頭孢噻肟或唑肟或曲松C:頭孢他啶O:拉氧頭孢、頭孢孟多、頭孢替坦第四十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(口服用)B:頭孢呋辛酯

U:氯碳頭孢O:頭孢克洛,地尼,克肟,泊肟,丙烯Inv:頭孢他美,布烯碳青霉烯類

B:厄他培南,亞胺或美洛培南單環(huán)內(nèi)酰胺類C:氨曲南氨基糖甙類A:慶大霉素

B:阿米卡星C:卡那霉素,奈替米星,妥布霉素O:鏈霉素四環(huán)素類C:四環(huán)素

O:多西環(huán)素,米諾環(huán)素第四十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六丙沙星或左氧氟沙星,吉米沙星U:加替沙星,羅美或諾氟或氧氟沙星O:依諾沙星,格帕沙星Inv:氟羅沙星喹諾酮類U:西諾沙星

O:萘啶酸葉酸代謝途徑抑制劑B:甲氧芐啶/磺胺甲唑U:磺胺藥,甲氧芐啶PHENICOLSC:氯霉素硝基呋喃類U:呋喃妥因磷霉素類U:磷霉素第四十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

二、紙片瓊脂擴(kuò)散法

經(jīng)世界衛(wèi)生組織推薦,目前各國(guó)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法是由Kirby和Bauer所建立的紙片瓊脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法紙片瓊脂擴(kuò)散法)。(一)實(shí)驗(yàn)原理

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上,紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度,在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測(cè)試菌的生長(zhǎng)被抑制,從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度,與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。第四十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第四十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系

Log2.MICD1d2抑菌圈直徑(mm)v耐藥中介敏感RIS第四十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(二)培養(yǎng)基和抗菌藥物紙片

1.抗菌藥物紙片專用藥敏紙片:直徑-6.35mm吸水量-20微升2.培養(yǎng)基水解酪蛋白(M-H)瓊脂,瓊脂厚度4mm鏈球菌屬、腸球菌屬、腦膜炎奈瑟菌:加5%脫纖維羊血嗜血桿菌屬:Ⅴ、Ⅹ因子第五十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3.菌液比濁管-0.5麥?zhǔn)媳葷峁艿闹苽洌?%氯化鋇:0.5ml1%硫酸溶液:99.5ml625nm處吸光度值為0.08~0.10,相當(dāng)于1.5×108cfu/ml用前混勻有效期:6個(gè)月第五十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(三)實(shí)驗(yàn)方法1.校正菌液濃度無(wú)菌挑取孵育16~24h的血平板上4~5個(gè)菌落,置于無(wú)菌生理鹽水中,用0.5麥?zhǔn)媳葷峁苄U鷿舛?。紙片擴(kuò)散法第五十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第五十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六紙片擴(kuò)散法2.接種細(xì)菌-涂布法用無(wú)菌棉簽浸入細(xì)菌懸液中,將拭子在試管上壁輕輕擠壓以擠去過多的菌液。棉簽在三個(gè)方向均勻抹瓊脂表面(每次轉(zhuǎn)60℃)使菌液均勻分布,最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。第五十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六紙片擴(kuò)散法第五十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3.貼藥敏紙片室溫干燥3~5min各抗菌紙片中心距離應(yīng)大于24mm,紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm。紙片擴(kuò)散法第五十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

用精確度為10mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌環(huán)直徑,參照標(biāo)準(zhǔn)解釋結(jié)果.根椐常規(guī)劑量給藥后測(cè)定藥物能在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度將抗菌藥物敏感性標(biāo)準(zhǔn)分為以下三級(jí):

敏感(susceptible,s):表示測(cè)試菌能被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅。

中介度(intermediate,I):不是敏感性的度量,這一范圍作為“緩沖域”,以防止由微小的技術(shù)因素失控導(dǎo)致的結(jié)果偏差,因而其臨床意義是不確定的,故不應(yīng)作臨床報(bào)告.對(duì)于K-B法測(cè)得的結(jié)果在中介度的藥物,如沒有其他替代品,使用前應(yīng)作定量(稀釋法)藥敏試驗(yàn)(MIC)以確證其敏感性。

耐藥(resistant,R):表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制。(四)結(jié)果解釋第五十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

紙片法藥敏試驗(yàn)紙片含藥量和結(jié)果解釋

抗菌藥物紙片含藥量抑菌圈直徑(mm)耐藥中介敏感阿米卡星30ug≤1415~16≥17慶大霉素10ug≤1213~14≥15青霉素10單位≤28-≥29苯唑西林1ug≤1011~12≥13氨芐西林10ug≤1314~16≥17哌拉西林100ug≤17-≥18頭孢唑林30ug≤1415~17≥18頭孢呋辛30ug≤1415~17≥18頭孢他啶30ug≤1415~17≥18氨曲南30ug≤1516~21≥22亞胺培南10ug≤1314~15≥16環(huán)丙沙星5ug≤1516~20≥21萬(wàn)古霉素30ug--≥15克林霉素2ug≤1415~20≥21復(fù)方新諾明1.25/23.75ug≤1011~15≥16第五十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

(五)影響因素1.培養(yǎng)基質(zhì)量,如PH,深度,硬度,表面濕度等。商品化或自制MH平板須標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株檢測(cè),合格后方能使用。2.藥敏紙片的質(zhì)量,含藥量和保存方式。3.接種菌量正確與否,取決于麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的配制,正確使用和保存。4.實(shí)驗(yàn)操作的質(zhì)量。5.孵育條件,溫度和時(shí)間。6.抑菌圈測(cè)量工具的精度。7.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株本身的藥敏特性是否合格,有無(wú)變異

。第五十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

采用標(biāo)準(zhǔn)菌株金葡菌ATCC25923,大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853等與測(cè)試菌在同一條件下做藥敏試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈應(yīng)落在預(yù)期范圍內(nèi)。如果超出范圍,則不應(yīng)發(fā)出報(bào)告,及時(shí)檢查原因,予以糾正。每日標(biāo)準(zhǔn)菌株的測(cè)定結(jié)果應(yīng)以抑菌圈直徑為縱坐標(biāo),天數(shù)為橫坐標(biāo)繪制室內(nèi)質(zhì)控圖,要求每天抑菌圈變化數(shù)不得超過2mm。標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)每周在MH瓊脂上傳代一次,4℃保存

。(六)質(zhì)量控制第六十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六三、稀釋法稀釋法是把培養(yǎng)基內(nèi)抗菌藥物的含量按幾何級(jí)數(shù)稀釋并接種適量的細(xì)菌,經(jīng)孵育后,觀察能引起抑菌作用的抗菌藥物濃度(即MIC),從而確定被檢菌對(duì)某抗菌藥物的最低敏感度。稀釋法所獲結(jié)果比較準(zhǔn)確,常被用作校正其它方法的標(biāo)準(zhǔn)。但因操作繁雜,作為常規(guī)應(yīng)用尚有一定的困難。第六十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

分類:

肉湯稀釋法

瓊脂稀釋法

第六十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

(一)肉湯稀釋法有宏量稀釋法和微量稀釋法原理:以M-H液體培養(yǎng)基將抗菌藥物做不同濃度稀釋,然后接種待測(cè)菌,定量測(cè)定抗菌藥物抑制或殺死該菌的最低抑菌濃度(MIC)或最低殺菌濃度(MBC)。第六十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六MIC:抗菌藥物能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的最低濃度。單位:μg/ml

或U/mlMBC:抗菌藥物能夠殺滅99.9%接種菌所需要的最低濃度第六十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六1.

培養(yǎng)基離子校正M-H肉湯(CAMHB):Ca2+、Mg2+2.

藥物稀釋(1)配制抗菌藥物原液:1000μg/ml重量(mg)=溶劑(ml)×濃度(μg/ml)/藥物效價(jià)(μg/mg)體積(ml)=重量(mg)×藥物效價(jià)(μg/mg)/

濃度(μg/ml)稀釋法第六十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3.菌液菌液的準(zhǔn)備:0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)(同紙片法)最終菌液濃度:5×105CFU/ml稀釋法第六十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六4.實(shí)驗(yàn)方法1)抗菌藥物稀釋:取試管10支,另取3支標(biāo)記上“肉湯對(duì)照”、“測(cè)試菌生長(zhǎng)對(duì)照”、“質(zhì)控菌生長(zhǎng)對(duì)照”。除第1管外每管加肉湯2ml,1、2號(hào)管加待測(cè)最高濃度藥液(128μg/mg

)2ml,依次對(duì)倍稀釋至10管。2)測(cè)試菌的準(zhǔn)備:0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn),10倍稀釋3)接種細(xì)菌:取0.1ml待測(cè)菌依次由低濃度到高濃度加到10支管中。4)孵育:35℃孵育16~18h稀釋法第六十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第六十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六結(jié)果判斷:

肉眼觀察,含最小藥物量仍呈明顯不混濁的一管所含的抗菌藥物濃度即為MIC。優(yōu)點(diǎn):稀釋法所獲結(jié)果比較準(zhǔn)確,可靠,常被用作校正其它方法的標(biāo)準(zhǔn),用于研究。缺點(diǎn):勞動(dòng)強(qiáng)度大,操作繁雜,作為常規(guī)應(yīng)用尚有一定的困難。

第六十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(二)瓊脂稀釋法

原理

將待測(cè)菌接種于含不同濃度的抗菌藥物的瓊脂平板上。經(jīng)培養(yǎng)后觀察菌落的生長(zhǎng)情況,以能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為該菌的最低抑菌濃度(MIC)。第七十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六優(yōu)點(diǎn)比液體稀釋法重復(fù)性好每個(gè)平板同時(shí)可測(cè)定多株細(xì)菌可觀察被檢菌集落生長(zhǎng)良好與否可發(fā)現(xiàn)污染菌落第七十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六1.培養(yǎng)基:M-H瓊脂2.含藥瓊脂的制備配制抗菌藥物原液稀釋抗菌藥物加到融化MH瓊脂中貯存日期:5天接種菌液的準(zhǔn)備0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn),10倍稀釋第七十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3.

細(xì)菌接種(1)畫格編號(hào)(2)點(diǎn)種待測(cè)菌:1~3μl/格直徑5-8mm

(104CFU/點(diǎn))(3)培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果第七十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六4.結(jié)果判讀先讀質(zhì)控平板的MIC,再讀待檢菌平板的MIC;在前后二個(gè)不同梯度濃度的抗生素M-H瓊脂平板上,細(xì)菌生長(zhǎng)數(shù)量由80%~90%突然減少為結(jié)果終點(diǎn),即MIC值。結(jié)果報(bào)告:MIC(μg/ml)或敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)第七十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第七十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六優(yōu)點(diǎn):①金標(biāo)準(zhǔn),精確可靠。比液體稀釋法重復(fù)性好。②每個(gè)平板可同時(shí)測(cè)定多株細(xì)菌。③可觀察被檢菌菌落生長(zhǎng)是否良好。④可發(fā)現(xiàn)污染細(xì)菌。⑤可引入機(jī)械化手段,提高效率。

缺點(diǎn):

測(cè)多個(gè)藥時(shí)勞動(dòng)強(qiáng)度大制備平皿費(fèi)時(shí)費(fèi)力。第七十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六四、E-test法

E試驗(yàn)(Epsilometertest)是一種對(duì)于微生物藥敏試驗(yàn)直接定量的技術(shù),它結(jié)合稀釋法和擴(kuò)散法原理、特點(diǎn),克服了上述二種方法缺點(diǎn),能直接定量出藥物對(duì)測(cè)試菌的MIC,結(jié)果準(zhǔn)確重復(fù)性好;操作同擴(kuò)散法,簡(jiǎn)便易行。第七十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

Etest法

細(xì)菌生長(zhǎng)區(qū)Etest塑料條橢圓形細(xì)菌生長(zhǎng)抑制區(qū)2561288016判讀抑菌濃度(MICug/ml)第七十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第七十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

優(yōu)點(diǎn);連續(xù)濃度梯度,與瓊脂稀釋法相關(guān)性好。影響因素少,穩(wěn)定性高。操作簡(jiǎn)單,省時(shí)。缺點(diǎn):昂貴。用途:快生長(zhǎng)菌,苛養(yǎng)菌,厭氧菌,酵母菌, 分枝桿菌。第八十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六五、聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)

1.目的:用于病原菌尚未確定的急、重癥感染的經(jīng)驗(yàn)治療治療多種細(xì)菌引起的混合性感染預(yù)防或推遲細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)生可以減少用藥劑量對(duì)于某些耐藥菌可取得協(xié)同抗菌效果第八十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六2.結(jié)果與類型無(wú)關(guān)作用:兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨(dú)活性。拮抗作用:兩藥聯(lián)合作用顯著低于單藥活性累加作用:兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨(dú)活性之和。協(xié)同作用:兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用的總和。第八十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

第八十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3、聯(lián)合抑制試驗(yàn)棋盤稀釋法—定量試驗(yàn)(1)原理

將甲乙兩藥的各種稀釋度加以組合,組成聯(lián)合藥敏管。同時(shí)兩種藥物每一稀釋度都有一只加單一藥物的單獨(dú)藥敏管。根據(jù)單一藥物對(duì)被檢菌的MIC和聯(lián)合藥敏管中的抑菌情況,可精確測(cè)定兩藥在適當(dāng)濃度比例下所產(chǎn)生的相互作用。第八十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六結(jié)果判讀FIC:部分抑菌濃度指數(shù)

甲藥聯(lián)合時(shí)MIC乙藥聯(lián)合時(shí)MICFIC=+

甲藥單獨(dú)時(shí)MIC乙藥單獨(dú)時(shí)MICFIC<0.5協(xié)同作用

0.5~1.0相加作用

1~2無(wú)關(guān)作用

>2拮抗作用

第八十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

1.結(jié)核桿菌的藥敏試驗(yàn)2.厭氧菌的藥物敏感試驗(yàn)3.真菌的藥物敏感試驗(yàn)其他藥敏試驗(yàn)第八十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第八十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六當(dāng)在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)

時(shí)應(yīng)該記住以下四點(diǎn)1.測(cè)定那些可能導(dǎo)致感染細(xì)菌的藥物敏感性試驗(yàn)2.應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化的藥敏試驗(yàn)方法3.測(cè)定并報(bào)告對(duì)人體和感染部位合適的抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)的結(jié)果4.質(zhì)量控制以確保藥敏試驗(yàn)的正確性第八十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

第三節(jié)細(xì)菌耐藥機(jī)制及耐藥性檢測(cè)

細(xì)菌耐藥性(Bacterialresistance)

指病原體對(duì)反復(fù)應(yīng)用的化學(xué)治療藥物敏感性降低或消失的現(xiàn)象。第八十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六什么原因呢金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素的耐藥趨勢(shì)第九十頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六1細(xì)菌產(chǎn)生破壞藥物結(jié)構(gòu)的酶2改變藥物作用的靶位3抗生素滲透障礙4藥物主動(dòng)外排系統(tǒng)一、細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生機(jī)制第九十一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六1、細(xì)菌產(chǎn)生破壞藥物結(jié)構(gòu)的酶(一)水解酶-β-內(nèi)酰胺酶是以β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物為水解底物的多種同類型的降解酶。包括廣譜內(nèi)酰胺酶、超廣譜酶β-內(nèi)酰胺(ESBLs)、金屬酶、AmpC酶等細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶可特異性打開β-內(nèi)酰胺環(huán),使其完全失去抗菌活性。ESBLs陽(yáng)性菌:對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥第九十二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(二)鈍化酶產(chǎn)生1.氨基糖苷類鈍化酶2.氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶3.紅霉素和其他滅活酶(三)修飾酶1.乙酰轉(zhuǎn)移酶AAC2.核苷轉(zhuǎn)移酶ANT3.磷酸轉(zhuǎn)移酶APH第九十三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

ProducinganEnzymetoDestroyorInactivatetheAntibiotic第九十四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六例:鏈霉素作用靶位菌體核糖體30S亞基的結(jié)構(gòu)改變。

2、改變藥物作用的靶位第九十五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第九十六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六3、抗生素滲透障礙微孔蛋白例:oprD2基因發(fā)生缺失突變時(shí),微孔缺失,對(duì)亞胺培南耐藥。第九十七頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六第九十八頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六4、藥物主動(dòng)外排系統(tǒng)外排系統(tǒng)由三個(gè)蛋白組成,即轉(zhuǎn)運(yùn)子、附加蛋白、和外膜蛋白,三者缺一不可,又稱三聯(lián)外排系統(tǒng)第九十九頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六外排系統(tǒng)由三個(gè)蛋白組成,即轉(zhuǎn)運(yùn)子、附加蛋白、和外膜蛋白,三者缺一不可,又稱三聯(lián)外排系統(tǒng)第一百頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六二、特殊耐藥菌檢測(cè)

(一)-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)原理:β-內(nèi)酰胺酶是一類水解青霉素、頭孢菌素類抗生素的滅活酶;該酶位于G+球菌菌體外,G-桿菌周漿間隙。檢測(cè)方法:常用頭孢硝噻吩紙片法第一百零一頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六頭孢硝塞吩紙片法

頭孢硝塞吩的內(nèi)酰胺環(huán)被β-內(nèi)酰胺酶打開,基質(zhì)由黃色變?yōu)榧t色。G+菌直接取培養(yǎng)物G-菌取細(xì)菌裂解液第一百零二頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

(二)超廣譜-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)

篩選試驗(yàn):頭孢泊肟≦17mm、頭孢他啶(10ug/片)抑菌圈≦22mm或頭孢曲松≦25mm、氨曲南、頭孢噻肟(30ug/片)≦27mm確認(rèn)試驗(yàn):頭孢他啶(30ug/片)、頭孢他啶/克拉維酸(30ug/10ug)和頭孢噻肟(30ug/片)、頭孢噻肟/克拉維酸(30ug/10ug)兩組,加克拉維酸比不加的抑菌圈增大≧5mm為陽(yáng)性。

第一百零三頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

第一百零四頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

第一百零五頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六

(三)AmpC酶檢測(cè)

AmpC酶初篩試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行AmpC酶的表型篩選,凡紙片擴(kuò)散法頭孢西丁抑菌圈直徑≤18mm,即認(rèn)為是可能產(chǎn)AmpC酶菌株。AmpC酶確證試驗(yàn)

將0.05麥?zhǔn)蠁挝淮竽c埃希菌(ATCC25922)均勻涂布于MH瓊脂平板,待表面干燥后,在平板中央貼一頭孢西丁紙片,用環(huán)挑取2~3個(gè)過夜培養(yǎng)的待檢菌落,并稍用力沿紙片邊緣劃向平板邊緣,置35℃孵箱培養(yǎng)18h,觀察待檢菌周圍頭孢西丁抑菌圈的變化,如果抑菌圈變化≥2mm,則提示產(chǎn)AmpC酶陽(yáng)性。質(zhì)控菌株:陰溝腸桿菌O29M作為產(chǎn)AmpC酶的陽(yáng)性質(zhì)控菌株,大腸埃希菌ATCC25922作為陰性對(duì)照菌。第一百零六頁(yè),共一百一十七頁(yè),編輯于2023年,星期六(四)碳青霉烯

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