高考生物一輪復(fù)習(xí)第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用教案新人教版必修

--1-2講微生物的培育與應(yīng)用[考綱要求]1.微生物的分別和培育。2.培育基對(duì)微生物的選擇作用。3.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。4.微生物在其他方面的應(yīng)用?？键c(diǎn)一微生物的試驗(yàn)室培育1．培育基(1)概念：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)生殖的養(yǎng)分基質(zhì)。(2)pH、氧氣以及特別養(yǎng)分物質(zhì)的要求。(3)種類：依據(jù)物理性質(zhì)可分為液體培育基和固體培育基。2．無菌技術(shù)(1)含義：指在培育微生物的操作中，全部防止雜菌污染的方法。(2)關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。(3)不同對(duì)象的無菌操作方法：[連線]提示：①②⑥—b—Ⅰ、Ⅱ③④⑤—a—Ⅲ、Ⅳ3．大腸桿菌的純化培育(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培育基①操作步驟：②倒平板的方法及留意事項(xiàng)：a．請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。b．甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。c．丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進(jìn)展。(2)純化大腸桿菌的方法①純化培育原理：想方設(shè)法在培育基上得到由一個(gè)細(xì)胞生殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟：接種。③常用的微生物接種方法有兩種a．平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作，將聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表。b．稀釋涂布平板法：是將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表，進(jìn)展培育。(3)菌種的保存方法①對(duì)于頻繁使用的菌種，可以承受臨時(shí)保藏的方法。②對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以承受甘油管藏的方法。推斷正誤：培育基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽(√)在配制培育基時(shí)，除滿足養(yǎng)分需求外，還應(yīng)考慮pH、O2及微生物對(duì)特別養(yǎng)分物質(zhì)的需求(√)培育基分裝到培育皿后才能進(jìn)展滅菌(×)消毒的原則是既能殺死材料外表的微生物，又要削減消毒劑對(duì)細(xì)胞的損害(√)無菌操作的對(duì)象只要是沒有生物活性的材料(如培育基、接種環(huán)等)都可承受高壓蒸汽滅菌法進(jìn)展滅菌(×)平板劃線法中每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒(√)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培育基外表形成單個(gè)菌落(√)消毒與滅菌的比較條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍較為溫順的消毒 物理或化學(xué)僅殺死物體外表或內(nèi)部的局部微煮沸消毒法巴氏消毒法日常用品不耐高溫的液體化學(xué)藥劑用酒精擦拭雙手，用氯氣消化學(xué)藥劑用酒精擦拭雙手，用氯氣消方法生物消毒法毒水源灼燒滅菌法接種工具殺死物體內(nèi)外所猛烈的理干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具滅菌 有的微生物，包化因素 高壓蒸汽括芽孢和孢子 培育基及容器滅菌法工程 平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作，將聚攏的菌種逐步稀原理釋分散到培育基上。在數(shù)次劃線后培育，可以分別到由一個(gè)細(xì)胞生殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，即菌落可以觀看菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)展分優(yōu)點(diǎn)離

稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表，進(jìn)展培育。在稀釋度足夠高的菌液里，聚攏在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培育基外表形成單個(gè)的菌落可以計(jì)數(shù)，可以觀看菌落特征吸取量較少，較麻煩，平板不枯燥效缺點(diǎn)適用范圍

不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌

果不好，簡(jiǎn)潔集中適用于厭氧菌和兼性厭氧菌選擇培育基與鑒別培育基的比較種類制備方法原理用途舉例選擇培育基培育基中參加某些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分別所需的微生物參加青霉素分別得到酵母菌和霉菌依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種鑒別培育基培育基中參加某種指示劑或化學(xué)藥品代謝產(chǎn)物與培育基中的特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變鑒別不同種類的微生物伊紅美藍(lán)培育基可以鑒別大腸桿菌化而設(shè)計(jì)1(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是 、 。(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，覺察培育基上的菌落連成了一片，最可能的緣由是，為避免此種現(xiàn)象應(yīng)當(dāng)實(shí)行的措施是。(3)接種操作肯定要在火焰四周進(jìn)展是由于。答案：(1)稀釋涂布平板法平板劃線法(2)菌液濃度過高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌增大稀釋倍數(shù)或每次劃區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌(3)火焰四周存在著無菌區(qū)域成分含量成分含量蛋白胨10.0g乳糖5.0g蔗糖5.0gKHPO2 42.0g顯色劑(伊紅美藍(lán))0.2g瓊脂12.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL依據(jù)用途劃分，該培育基屬于 培育基，假設(shè)要分別能分解尿素的細(xì)菌，需對(duì)培養(yǎng)基做出的最關(guān)鍵的調(diào)整是 ，假設(shè)還需鑒定分解尿素的細(xì)菌，需做出的調(diào)整是 。從培育基的成分上看，大腸桿菌的同化類型為。該培育基能否用于分別篩選出大腸桿菌？為什么？。在試驗(yàn)室培育微生物時(shí)，獲得純潔培育物的關(guān)鍵是 ，紫外線可對(duì)空氣進(jìn)展滅菌的緣由是。某同學(xué)嘗試純化大腸桿菌，其中一個(gè)平板的菌落分布如上圖，推想該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是。(1)伊紅養(yǎng)基；假設(shè)要分別能分解尿素的細(xì)菌，則需要保證培育基中以尿素為唯一氮源，馬上蛋白胨換(2)大腸桿菌需要從培育基中獲得碳源，因此其同化作用類型是異養(yǎng)型；由于表格中的培育基中的碳源種類很多，可供多種微生物生存，因此該培育基不能用于分別篩選出大腸桿菌。(3)微生物培育時(shí)，關(guān)鍵是防止外來雜菌的感染；空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其緣由是紫外線能讓蛋白質(zhì)變性，同時(shí)還能破壞DNA的構(gòu)造。(4)由題圖可知，接種時(shí)該同學(xué)承受的是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好地分散開來，可能是涂布不均勻?qū)е碌?。答案?1)鑒別將蛋白胨換成尿素將伊紅美藍(lán)換成酚紅(2)異養(yǎng)型不能，緣由是培育基中的碳源種類很多，可供多種微生物生存(3)防止外來雜菌的感染紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能破壞DNA(4)涂布不均勻考點(diǎn)二微生物的篩選和計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)工程工程具體內(nèi)容①能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素試驗(yàn)②配制以尿素為唯一氮源的培育基原理的細(xì)菌數(shù)量①直接計(jì)數(shù)法(顯微鏡下用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)流程

②間接計(jì)數(shù)法：稀釋涂布平板法土壤取樣→配制土壤溶液和制備培育基→系列稀釋→涂布平板與培育→菌落計(jì)數(shù)分解纖維素的微生物的分別(1)纖維素酶C酶、C酶和葡萄1 x糖苷酶。②作用：C酶 葡萄糖苷酶纖維素1纖維二糖 → 葡萄糖Cx纖維素分解菌的篩選①原理：纖維素分解菌↓剛果 纖維素酶②篩選方法：剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。③培育基：以纖維素為唯一碳源的選擇培育基。④試驗(yàn)流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境↓選擇培育：用選擇培育基培育，以增加纖維素分解菌的濃度↓梯度稀釋：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上↓選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落分別纖維素分解菌所用的兩種培育基比較分別纖維素分解菌的試驗(yàn)中先用選擇培育基，再用鑒別培育基。①選擇培育基為液體培育基，以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長(zhǎng)，而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長(zhǎng)。②鑒別培育基含瓊脂，為固體培育基，細(xì)菌可在培育基上形成肉眼可見的菌落。剛果紅染色法應(yīng)用的就是鑒別培育基。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容有無雜菌污染的推斷選擇培育基的篩選作用樣品的稀釋操作重復(fù)組

現(xiàn)象比照的培育皿中無菌落生長(zhǎng)培育物中菌落數(shù)偏高菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高牛肉膏培育基上的菌落數(shù)目大于選擇培育基上的數(shù)目2230～300板

結(jié)論未被雜菌污染被雜菌污染培育物中混入其他氮源選擇培育基具有篩選作用操作成功假設(shè)選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近的結(jié)果推斷正誤：選擇培育基可以鑒定某種微生物的種類(×)從物理性質(zhì)的角度看，選擇培育基多屬于固體培育基(√)(3)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培育基中，尿素是唯一的氮源(√)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培育基的pH降低(×)(6)在以尿素為唯一氮源的培育基中參加酚紅指示劑，假設(shè)指示劑變藍(lán)，則說明篩選到分解尿素的細(xì)菌(×)纖維素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖(√)在篩選能分解纖維素的細(xì)菌的試驗(yàn)中，選擇培育的目的是增大樣品中目的菌株的濃度(√)剛果紅可以與纖維素形成透亮復(fù)合物，所以可通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌(×)剛果紅染色法只能在培育微生物的時(shí)候參加剛果紅(×)篩選菌株(1)原則：人為供給有利于目的菌生長(zhǎng)的條件，同時(shí)抑制或阻擋其他微生物的生長(zhǎng)。(2)篩選分解尿素的細(xì)菌與分解纖維素的微生物的比較：土壤中分解尿素的土壤中分解尿素的分解纖維素的工程細(xì)菌的分別微生物的分別選擇培以尿素為唯一氮源的以纖維素為唯一養(yǎng)基選擇培育基碳源的選擇培育基剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成鑒定 在培育基中參加酚紅示劑，假設(shè)指示劑變紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培育方法紅，pH上升，說明細(xì)菌能分解尿素基消滅以纖維素分解菌為中心的透亮圈特有代謝纖維素1x 纖維二糖 →葡萄糖苷酶脲酶22 2 2 3過程葡萄糖統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算肯定容積的樣品中微生物數(shù)量。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)算。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌和活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基外表生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推想出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a．設(shè)置重復(fù)組，增加試驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。1．(2023·湖北武漢期中)為獲得果膠酶高產(chǎn)菌株，科研人員進(jìn)展了以下分別、篩選、鑒定工作。KHPO2 4MgSO4KHPO2 4MgSO4NaNO3FeSO4瓊脂0.1g0.5g3g0.01g2g15g1L科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液。為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進(jìn)展 ，用 法接種于固體培育基上。接種后的培育基 狀態(tài)放入培育箱。選擇單菌落數(shù)目適宜的培育基，參加肯定濃度的剛果紅溶液(果膠與剛果紅結(jié)合后顯紅色)，一段時(shí)間后觀看并比較菌落和 直徑的比值，篩選果膠酶高產(chǎn)菌株。將獲得的菌株進(jìn)展液體培育后，從培育液的(填“上清液”或“沉淀物”)獲得粗提的果膠酶。將肯定量的粗提果膠酶與適量果膠溶 與等量果膠溶液混合，作為試驗(yàn)的比照。(1)依題意可知：該試驗(yàn)的目的是分別果膠酶