獸醫(yī)生物制品基本生產(chǎn)技術(shù)-細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)（獸醫(yī)生物制品技術(shù)）

細(xì)菌的繁殖規(guī)律1.細(xì)菌的繁殖方式二分裂細(xì)菌的繁殖規(guī)律2.細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線反映細(xì)菌在整個(gè)培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)菌數(shù)變化規(guī)律的曲線，稱為生長(zhǎng)曲線。（1）測(cè)定方法將少量細(xì)菌接種到新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，在不補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的前提下，每隔一定時(shí)間取樣測(cè)定細(xì)菌數(shù)量，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制曲線。細(xì)菌的繁殖規(guī)律（2）細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)時(shí)期①遲緩期時(shí)間長(zhǎng)短隨細(xì)菌的適應(yīng)能力而異。在工業(yè)發(fā)酵中，遲緩期會(huì)延長(zhǎng)生產(chǎn)周期而產(chǎn)生不利影響。細(xì)菌的繁殖規(guī)律（2）細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)時(shí)期②對(duì)數(shù)期細(xì)菌代謝活性高而穩(wěn)定，大小比較一致，生活力強(qiáng)，因而常在生產(chǎn)上用作種子。細(xì)菌的繁殖規(guī)律（2）細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)時(shí)期③穩(wěn)定期細(xì)菌的芽孢和外毒素等開始產(chǎn)生。如果及時(shí)采取措施，改善培養(yǎng)條件，如補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、對(duì)需氧菌進(jìn)行通氣、攪拌或振蕩，可以延長(zhǎng)穩(wěn)定期，獲得更多的菌體物質(zhì)或代謝產(chǎn)物。細(xì)菌的繁殖規(guī)律（2）細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)時(shí)期④衰退期細(xì)菌如不移植到新的培養(yǎng)基，最后將全部死亡。細(xì)菌的繁殖規(guī)律3.意義人工培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，提供更加優(yōu)良的生長(zhǎng)條件以提高細(xì)菌或其產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量。細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)方法1.固體表面培養(yǎng)法2.液體靜置培養(yǎng)法3.液體深層通氣培養(yǎng)法4.透析培養(yǎng)法5.連續(xù)培養(yǎng)法等細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)1.固體表面培養(yǎng)法操作程序此法可根據(jù)需要調(diào)節(jié)細(xì)菌濃度，但產(chǎn)量受限制，且勞動(dòng)強(qiáng)度大，主要用于制備診斷抗原。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基滅菌制成大扁瓶平板

無(wú)菌檢驗(yàn)

接入種子液

平放靜置培養(yǎng)

收集菌苔

制成菌懸液

細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)2.液體靜置培養(yǎng)法操作程序培養(yǎng)基裝量一般是容器深度的1/2～2/3，培養(yǎng)厭氧菌時(shí)約為容器體積的70%。此法較為簡(jiǎn)便，但細(xì)菌產(chǎn)量不高。液體培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)罐

滅菌并冷至室溫

接入種子液

適溫靜置培養(yǎng)

收獲細(xì)菌的規(guī)模化培養(yǎng)技術(shù)3.液體深層通氣培養(yǎng)法操作程序此法可進(jìn)行自動(dòng)化控制和一體化操作，細(xì)菌產(chǎn)量較高，是目前菌苗生產(chǎn)的主要方法，液體培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐

滅菌并冷至室溫

接入種子液并加入消泡劑

靜置培養(yǎng)2~3h

收獲通入無(wú)菌空氣

適當(dāng)攪拌

每隔2~3h

逐漸加大通氣量并攪拌

細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)4.透析培養(yǎng)法是在培養(yǎng)基和培養(yǎng)物之間隔一層半透膜的培養(yǎng)方法。在培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，延長(zhǎng)細(xì)菌對(duì)數(shù)期，從而獲得高濃度的細(xì)菌，高效價(jià)的毒素。發(fā)酵器透析培養(yǎng)系統(tǒng)細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)5.連續(xù)培養(yǎng)法是在細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中，不斷供給新的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)部分移出培養(yǎng)物，延長(zhǎng)細(xì)菌對(duì)數(shù)期的一種方法。細(xì)菌的生長(zhǎng)條件1.營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的基本營(yíng)養(yǎng)元素有水、無(wú)機(jī)鹽、碳、氮。某些細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求比較高，在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中還需要額外添加生長(zhǎng)因子。細(xì)菌的生長(zhǎng)條件2.溫度任何細(xì)菌都有其可生長(zhǎng)的溫度范圍和最適溫度。在最適溫度下，細(xì)菌生長(zhǎng)最快。一般病原性細(xì)菌對(duì)溫度的適應(yīng)范圍為10～45℃，最適生長(zhǎng)溫度多是37℃，少數(shù)是22～28℃。細(xì)菌的生長(zhǎng)條件3.PH細(xì)菌對(duì)PH的適應(yīng)范圍為PH2～8.5。多數(shù)病原性細(xì)菌生長(zhǎng)的最適PH為7.2～7.6，霉菌生長(zhǎng)的最適PH為5～6。細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中，由于代謝產(chǎn)物的增多會(huì)引起PH改變，從而妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)，所以常需要在培養(yǎng)基中加入一定量的緩沖劑進(jìn)行調(diào)節(jié)。細(xì)菌的生長(zhǎng)條件4.滲透壓多數(shù)病原性細(xì)菌只能在等滲環(huán)境下生長(zhǎng)繁殖。由于細(xì)菌的細(xì)胞壁比較堅(jiān)韌，所以對(duì)低滲環(huán)境有一定的適應(yīng)能力少數(shù)細(xì)菌能夠耐受高滲環(huán)境。細(xì)菌的生長(zhǎng)條件5.氣體與細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖有關(guān)的氣體主要是O2和CO2。不同細(xì)菌對(duì)氧氣的需求不同：需氧菌生長(zhǎng)需要氧氣；厭氧菌生長(zhǎng)不能有氧氣；兼性厭氧菌無(wú)論有氧與否均能生長(zhǎng)。少數(shù)細(xì)菌在初代培養(yǎng)時(shí)環(huán)境中要有一定量的CO2，如，羊型布魯氏菌。實(shí)際培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，應(yīng)根據(jù)細(xì)菌對(duì)氣體的需要情況，提供合適的氣體環(huán)境。需氧菌的分離培養(yǎng)1.平板劃線接種法最常用的分離細(xì)菌的方法。根據(jù)樣品中的細(xì)菌數(shù)選擇劃線方法。目的稀釋細(xì)菌，培養(yǎng)獲得單個(gè)菌落，以便根據(jù)菌落特性進(jìn)行鑒別和挑選單個(gè)菌落再進(jìn)行純培養(yǎng)，制備種子培養(yǎng)物。需氧菌的分離培養(yǎng)2.傾注平板培養(yǎng)法適用于深層條件下生長(zhǎng)良好的細(xì)菌。將營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱溶解后冷至45～50℃，加入適量細(xì)菌培養(yǎng)液，混勻后傾入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，制成平板，37℃培養(yǎng)24～36h。厭氧菌的分離培養(yǎng)厭氧菌的分離方法與需氧菌基本相同厭氧菌培養(yǎng)時(shí)，需要營(yíng)造無(wú)氧的環(huán)境。厭氧菌的分離培養(yǎng)1.燭缸法

將接種細(xì)菌的培養(yǎng)皿置于容量為2000mL的磨口標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，點(diǎn)燃一支蠟燭直立于缸中，燭火距約缸口10cm，缸蓋和缸口涂以凡士林，密封缸蓋。蠟燭熄滅后，將容器置37℃的溫箱中培養(yǎng)。厭氧菌的分離培養(yǎng)2.真空干燥皿培養(yǎng)法

將接種后的培養(yǎng)皿或試管放入真空干燥皿中，開動(dòng)真空泵，抽至真空后，充入氫、氮或二氧化碳等氣體，置于37℃溫箱培養(yǎng)。厭氧菌的分離培養(yǎng)3.厭氧培養(yǎng)基培養(yǎng)法

將厭氧培養(yǎng)基（肉肝湯、庖肉培養(yǎng)基）煮沸10min，迅速放入冷水中冷卻，排除其中的空氣。然后接種細(xì)菌，并在培養(yǎng)液表面加一薄層滅菌的液體石蠟（或已溶化的固體石蠟），封閉液面。將試管直立，放于試管架上，待冷，置37℃溫箱中培養(yǎng)。厭氧菌的分離培養(yǎng)4.焦性沒(méi)食子酸培養(yǎng)法

利用焦性沒(méi)食子酸在堿性溶液內(nèi)能大量吸氧的原理而采取的培養(yǎng)方法。取大標(biāo)本瓶或大試管，先在底部加入玻璃珠，按每升容積用焦性沒(méi)食子酸1g、10%氫氧化鈉10mL的比例加在玻璃珠上，然后放入隔板，將欲培養(yǎng)的平皿或試管放在隔板上，蠟封管口，置37℃溫箱中培養(yǎng)。厭氧菌的分離培養(yǎng)5.厭氧氣袋法

厭氧產(chǎn)氣袋能夠?qū)⒚荛]空間中的氧氣完全吸收掉，然