無(wú)菌操作 培養(yǎng)材料選擇（植物組織培養(yǎng)）

項(xiàng)目四無(wú)菌操作任務(wù)7外植體選擇任務(wù)8外植體預(yù)處理任務(wù)9無(wú)菌接種技術(shù)【知識(shí)點(diǎn)】

掌握外植體選擇的原則【技能點(diǎn)】

會(huì)正確選擇外植體素質(zhì)要求：培養(yǎng)學(xué)生無(wú)菌意識(shí)、創(chuàng)新意識(shí)、團(tuán)隊(duì)合作意識(shí)和生態(tài)環(huán)保意識(shí)；具有任務(wù)執(zhí)行力，規(guī)范操作、注意安全；科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)、實(shí)事求是的工作態(tài)度。任務(wù)7外植體選擇細(xì)胞全能型全能性實(shí)現(xiàn)的差異：同一植株各個(gè)不同部位的組織、器官有差異生殖細(xì)胞>體細(xì)胞分生組織細(xì)胞>分化細(xì)胞一、培養(yǎng)材料的選擇1、再生能力強(qiáng)的健壯植株2、最佳時(shí)期3、優(yōu)良種質(zhì)，遺傳穩(wěn)定性好4、適宜部位，容易消毒5、大小適宜1、再生能力強(qiáng)的健壯植株外植體必須有良好的增殖能力，在培養(yǎng)中篩選增殖能力最強(qiáng)的材料。篩選不同基因型植物所需的特殊培養(yǎng)基。通常年幼組織比年老組織有較高的形態(tài)發(fā)生能力，容易培養(yǎng)，有較大的再生能力。植物上部器官的生長(zhǎng)時(shí)間短，但生理年齡較老。而越往基部則生理年齡越小。模塊三一般而言，分化程度高的細(xì)胞，其脫分化越難。因此，應(yīng)盡量選擇未分化或分化程度較輕的組織作為外植體材料。2、最佳時(shí)期三點(diǎn)因素：材料、時(shí)間和污染因素。取材料季節(jié)和時(shí)間，對(duì)離體培養(yǎng)至關(guān)重要。處于生長(zhǎng)季節(jié)，較幼嫩的外植體培養(yǎng)容易。2、最佳時(shí)期秋冬季取材需要處理。春季取材含菌數(shù)少，夏季、雨季、濕熱季節(jié)取材不容易滅菌成功。3、選擇優(yōu)良的種質(zhì)優(yōu)良的種質(zhì)是成功的第一步。選擇具有明確的種性特征，優(yōu)良單株、優(yōu)良無(wú)性系、新品種、良種材料作為取出植株。并觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。觀察其遺傳穩(wěn)定性、花色、果型、長(zhǎng)勢(shì)等性狀表現(xiàn)。4、適宜部位，容易消毒來(lái)源于幼年植物的外植體比源于成年樹(shù)的外植體容易培養(yǎng)。同株植物中，較低部位外植體要比上不的外植體容易啟動(dòng)，培養(yǎng)成功可能性大。植物體的各個(gè)部位，如莖尖、莖段、皮層及維管組織、髓細(xì)胞、表皮、塊莖的貯藏薄壁細(xì)胞、花瓣根葉子鱗莖、胚珠和花藥等。莖尖是較好的部位，生長(zhǎng)速度快，遺傳性穩(wěn)定，又能獲得無(wú)病毒苗的重要途徑。葉片能保證多數(shù)植物的組織培養(yǎng)不會(huì)引起不良變異。對(duì)于培養(yǎng)較困難的植物，可以通過(guò)子葉或下胚軸來(lái)建立起組織培養(yǎng)再生體系。5、大小適宜外植體的表面積、體積、細(xì)胞數(shù)量會(huì)影響培養(yǎng)效果。選擇0.5-1cm左右。太大易污染，太小不易啟動(dòng)或啟動(dòng)后僅產(chǎn)生愈傷組織。莖尖、胚、胚乳等培養(yǎng)，按器官或組織單位切離。二、外植體的種類帶芽的外植體：頂芽、腋芽、根莖連接處的萌孽等。適合植物的離體快繁。模塊三胚：自然狀態(tài)和試管中雌雄配子結(jié)合后形成的各個(gè)時(shí)期的胚。容易培養(yǎng)。分化的器官組織：嫩莖、嫩葉、形成層、根、花瓣、花萼、珠心、種子等。分化的器官組織可經(jīng)誘導(dǎo)過(guò)渡到脫分化狀態(tài)。有些器官直接形成不定芽或體細(xì)胞胚?；ǚ奂按婆渥芋w中的單倍體細(xì)胞：——染色體數(shù)目減半，經(jīng)秋水仙素加倍可產(chǎn)生多倍體。三、減少外植體帶菌的措施1、外植體預(yù)先培養(yǎng)——用莖尖作外植體時(shí)，可先在室內(nèi)或無(wú)菌條件下對(duì)枝條進(jìn)行預(yù)先培養(yǎng)。2、外植體取材時(shí)間——晴天比陰雨天好。——下午比早晨好