甘草有效成分的提取與分離

2012-2013學(xué)年第二學(xué)期藥用植物資源與開發(fā)論文名稱 甘草化學(xué)成分的提取與分離年級 2010 學(xué) 院 中藥材學(xué)院 專 業(yè) 植物科學(xué)與技術(shù)學(xué)號 姓名 徐玉強(qiáng) 任課教師 張永剛 完成時間 2013-5-11 成績 甘草中化學(xué)成分的提取與分離摘要：本文主要介紹了甘草中主要的化學(xué)成分以及這些化學(xué)成分的含量和性質(zhì)，并簡述了甘草酸，甘草次酸和甘草甘的提取和有效成分的含量測定，為進(jìn)一步的生產(chǎn)實踐做出貢獻(xiàn)。關(guān)鍵詞：甘草 化學(xué)成分 提取正文：甘草屬于豆科甘草屬，以根和根狀莖入藥。甘草在我國集中分布于三北地區(qū)（東北、華北和西北各省區(qū)），而以新疆、內(nèi)蒙古、寧夏和甘肅為中心產(chǎn)區(qū)。隨著藥學(xué)及其相關(guān)學(xué)科以及科研設(shè)備的發(fā)展，甘草中主要含有的甘草酸、甘草次酸、黃酮、生物堿和氨基酸等化學(xué)成分，具有廣泛的生物活性。一、化學(xué)成分藥用甘草質(zhì)量與其化學(xué)成分的組成、積累變化有直接的關(guān)系。先后從甘草屬植物中提取、分離、鑒定了200多種化學(xué)成分，涉及甘草屬植物10個種。其中最重要并已證實具有生物活性的成分主要是甘草酸等三萜皂苷類、黃酮類、香豆素類、多糖、生物堿、氨基酸等。三萜皂苷類化合物：甘草屬植物中三萜皂類成分具有量高、生理活性強(qiáng)的特點，甘草的許多藥理作用都與這類成分有直接關(guān)系。至今在甘草屬植物中已鑒定得到61種三萜類化合物，其中苷元45個。這些三萜類化合物其苷元均為3B-經(jīng)基齊墩果烷型化合物的衍生物；皂苷一般為3B-羥基上的氧苷，糖元多為D-葡萄糖酸或D-葡萄糖。甘草酸一直被認(rèn)為是甘草中最重要三萜類化合物，《中國藥典》把甘草酸的量作為評價甘草藥材及其制品質(zhì)量的重要指標(biāo)，通常要求不低于2%。黃酮類成分：是近年來研究最活躍的天然活性成分之一，廣泛存在于植物界中。這類化合物的存在對植物生長、發(fā)育、開花、結(jié)果以及抵御異物的侵入起著重要的作用。目前，從甘草屬植物中已發(fā)現(xiàn)黃酮及其衍生物153種，它們的基本母核結(jié)構(gòu)類型有15種，其中包括：黃酮、黃酮醇、雙氫黃酮、雙氫黃酮醇、查爾酮、異黃酮、雙氫異黃酮、異黃烷、異黃烯等。對甘草中黃酮類成分的藥理作用研究表明，這些成分在抗腫瘤、抗氧化、抗病毒方面作用顯著。甘草中黃酮類成分的分布和積策也表現(xiàn)出一定的特點。烏拉爾甘草無論是野生還是栽培，在一個生長季中，葉中總黃酮量最高，而地下部分的t相對較低；在5—10月，葉中的總黃酮量逐漸下降，而地下部分總黃酮盆具有上升趨勢。各器官中總黃酮量在生長季中呈現(xiàn)波動現(xiàn)象，尤其在具有運(yùn)輸功能的部分如復(fù)葉柄、地上莖表現(xiàn)更突出，這種波動可能與繁殖有關(guān)。光果甘草不同器官中光甘草定，主要分布于粗根木栓層，而木質(zhì)部中主要分布的是甘草素和異甘草素，地上器官、種子中沒有發(fā)現(xiàn)這類成分(PN)、甘草二氫黃酮(LN)分布于幼葉表面及莖中，而根中不存在。但三年生烏拉爾甘草中地上部分的二氫黃酮盆遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于地下部分；葉中二氫黃酮量是莖中的4倍，根中皮部與木質(zhì)部量相同，主根中的量高于根頭和側(cè)根。這種結(jié)果可能暗示著在種間、生長發(fā)育期之間及產(chǎn)地之間存在不同的分布規(guī)律.二有效成分的提取一、 甘草酸的提取：試劑：甘草粗粉，濃H2SO4,95%乙醇，80%乙醇，濃氨水，冰醋酸。取甘草粗粉40g,加水煮沸2次(15倍，1.25h;12倍，1h),脫脂棉過濾，合并濾液，濃縮，冷卻，攪拌下加入濃硫酸至不再析出甘草酸粘性沉淀為止(約PH=1)。放置，傾出上清液，棕色粘性沉淀用水洗滌數(shù)次，60C以下干燥，粉碎，即得甘草酸粗品，稱重。將甘草酸粗品稱重后加3.5—4倍量95%乙醇浸泡0.5—1h，抽濾，濾渣加3倍量80%乙醇回流1—2h，濾液冷卻后加濃氨水(邊加邊攪拌)調(diào)至弱堿性(PH=8)，減壓回收乙醇至糖漿狀，趁熱加入等體積冰醋酸浸泡洗滌，放冷，析出結(jié)晶，過濾，即得甘草酸單銨鹽粗品。稱重后，用70—80%乙醇重結(jié)晶，即得甘草酸單銨鹽純品，稱重，得率。二、 甘草次酸的提取：試劑：5%H2SO4，氯仿，乙醇。取甘草酸單銨鹽，加5%H2SO4，加熱10h,抽濾，水洗至中性，干燥，即得白色甘草次酸粗品，加熱氯仿溶解:趁熱過濾，所得濾液放冷，通過AL2O3柱，用氯仿洗脫，得甘草次酸粗品，加乙醇重結(jié)晶，得甘草次酸結(jié)晶。三、 甘草苷的提?。涸噭?0%乙醇，甲醇。取干燥藥材粗粉約10g,精密稱定，加10倍量70%乙醇，回流提取2次，每次3h回流提取，紗布過濾，將提取液倒入已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，再減壓干燥至恒重，得浸膏。精密稱取甘草浸膏量的1/20置于25mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30min，冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用045um的微孔濾膜過濾，即制得供試品溶液。四、藥典同時提取甘草酸和甘草苷：試劑：70%乙醇，取本品粉末（過三號篩）0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。三、含量測定：照高效液相色譜法（附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙臘為流動相A，以0.05%磷酸為流動相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；柱溫35°C；檢測波長為237nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計算應(yīng)均不低于5000。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0?819818?3519一5081—5035?3650—10050一036?40100一190一81對照品溶液的制備：取甘草苷對照品、甘草酸銨對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml各含0.02mg、0.2mg的溶液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10u1，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含甘草苷（CH0）不得少于0.50%；甘草酸（CH0）21229 426216以甘草酸銨計不得少于2.0%。平均為0.29%。參考文獻(xiàn)1]XuQX,ZhouM.OutlinesofPharmacologicalActionofGlycyrrhizae.JournalofPracticalTraditionalChineseMedicine(實用中醫(yī)藥雜志)，2005，21(7):450-451.[2]AmarowiczR，PeggRB，RahimiMoghaddamP，etal.Free-radicalscavengingcapacityandantioxidantactivityofselected-plantspeciesfromthecanadianprairies.FoodChemistry，