動物實驗基礎(chǔ)精減

動物實驗基礎(chǔ)精減第一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五一、概念1、動物實驗以實驗動物為材料，采用各種方法在實驗動物身上進行實驗，研究實驗過程中實驗動物發(fā)生的生理、病理變化以及產(chǎn)生這些變化的機理，從而為生命科學(xué)服務(wù)。第二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五2、實驗動物實驗動物—指以實驗研究為目的而進行培育的，具有明確微生物和遺傳背景的動物。(1)通過人工培育。(2)對其攜帶的微生物實行控制、遺傳學(xué)背景明確。(3)用于科學(xué)實驗。第三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五類型

1、按動物機體水平不同，可分為整體實驗和離體實驗。（1）整體實驗：整體動物和無損傷動物

（2）離體實驗：可進一步具體分為分子、亞細胞、細胞、組織、器官等不同水平的實驗。2、按動物實驗所需時間的長短，

（１）急性實驗（2天以內(nèi)）（２）亞急性實驗（1～4周）（３）慢性實驗（2～6個月或更長時間甚至整個生命期）第四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

1、按遺傳學(xué)控制方法分類

(1)近交系動物:

近交系動物又稱純系動物，是指動物通過連續(xù)全同胞兄妹、親子、堂兄妹近親交配20代以上，群體基因達到高度純合和穩(wěn)定的動物群。優(yōu)點：提高實驗的精確度，減少實驗的樣本數(shù)，使實驗結(jié)果更加可靠。二.實驗動物的分級和分類第五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

(2)突變系動物

突變系動物是指保持有特殊的突變基因的品系動物。如貧血鼠、腫瘤鼠、白血病鼠、肥胖病大鼠(fa)、白內(nèi)障大鼠（rc）、糖尿病大鼠(di)、新西蘭高血壓大鼠(GHR)、米蘭高血壓大鼠(MHS)、尿崩癥大鼠（di）、裸大鼠（run）、糖尿病小鼠（db）、肌萎縮癥小鼠(dy)、無胸腺裸鼠（nu）、肥胖癥小鼠（od）、侏儒癥小鼠（dw）、等。第六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

(3)系統(tǒng)雜交動物

系統(tǒng)雜交動物又稱為雜交群動物—把兩種或兩種以上的品系動物交配而生的后代。①由兩種純種品系動物交配，即2元雜交得到的第一子代動物，又稱為F1代動物、F1雜種動物。②由兩個以上的品系之間交配而生的后代，稱為多元雜交，如3元雜交、4元雜交等。但一般科研實驗所用的多為F1代動物。第七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

(4)封閉群動物以非近親交配方式繁殖生產(chǎn)的一個實驗動物種群，在不從外部引入新的血緣條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，稱為一個封閉群，又稱為遠交群。第八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五特點：繁殖量較大，適應(yīng)性和抗病力較強，群內(nèi)的基因頻率能保持穩(wěn)定。飼養(yǎng)成本也較低。但個體的重復(fù)性和一致性沒有近交系和系統(tǒng)雜交動物好。在目前的實驗中，這類動物占了很大的比例，如Wistar大鼠、SD（Sprague-Dawey）大鼠、瑞士種(Swiss)小鼠、昆明種（KM）小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、DunkinHarleg豚鼠、青紫蘭家兔、新西蘭家兔、大耳白家兔等都屬于這類。第九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（1）無菌動物（ＧＦ）

是指機體內(nèi)外均無任何寄生物（微生物和寄生蟲）的動物。此種動物在自然界中并不存在，必須用人為的方法培育出來。其法：一般將臨產(chǎn)前的健康動物用麻醉藥品或頸椎臼法處死后，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進無菌室（或無菌隔離器），按無菌手術(shù)進行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內(nèi)首先應(yīng)無菌），將其浸入消毒液里并輸送到另一隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍（電刀切斷）后，放隔離器內(nèi)人工喂乳或用其它品系的無菌母鼠作保姆供養(yǎng)。小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)較為方便。而豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，禽類、魚類、昆蟲類，因是在卵中無菌的前提下進行的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入無菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動物一般在在出生后能自力采食，故較易育成。又稱為四級動物。2.按微生物控制方法分類

第十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（2）悉生動物是指機體內(nèi)帶著已知微生物（動物或植物）的動物。此種動物原是無菌動物，系人為的將指定微生物叢投給其體內(nèi)，例如使大腸桿菌定居在無菌小鼠體內(nèi)，在進行微生物檢查時，僅能檢出大腸桿菌。亦有人工投給二種以上的已知微生物。悉生動物一般分為單菌（Monoxenie）、雙菌（Dixenie）、三菌（Trixenie），或多菌（Polyxenie）動物。此種動物同無菌動物一樣是放在隔離器內(nèi)飼育的，但因其帶有已知的微生物，故隔離器內(nèi)有微生物及其代謝產(chǎn)物的污染。例如，人工投給的微生物，除可在飲水中增殖外，還能在隔離器內(nèi)放出大量的氨氣。

第十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

（3）無特殊病原體動物（ＳＰＦ）是指機體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，簡稱SPF動物。但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的，故其實際上就是指無傳染病的健康動物。由于用疫苗和藥物進行預(yù)防及治療，或用淘汰帶菌動物來作出SPF動物的方法并不實用（既浪費時間，又難保確實除去病原）。故一般大多先培育出無菌動物或悉生動物后，再把其轉(zhuǎn)移到有封閉系統(tǒng)（BarrierSystem）的設(shè)施中飼育繁殖。原則上SPF動物室內(nèi)是不允許存在病原菌的，但在封閉系統(tǒng)環(huán)境中，難免有很多非病原性微生物會逐漸進入動物機體內(nèi)，故亦有人把這個轉(zhuǎn)移過程稱之為通常動物化。SPF動物的祖先是無菌動物，按理來說，無菌動物的子宮內(nèi)和卵中應(yīng)該是無菌的，然而，有些病毒實際上是通過親代傳給胎兒的，因此，在作出無菌動物和SPF動物之前，必須充分考慮這個問題。這是目前國際標準級別的實驗動物。第十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五4．清潔普通動物，亦稱最低限度疾病動物，或稱清潔動物

來自屏障系統(tǒng)的SPF動物，飼養(yǎng)在設(shè)有兩條走廊的，溫濕度恒定的普通設(shè)施中的動物。墊料、飼料、用具等均應(yīng)經(jīng)過高壓消毒。飲水pH為2.5～2.8，鼠盒上帶過濾帽，空氣亦應(yīng)經(jīng)過一定的過濾，工作人員穿干凈服裝操作，此類動物的微生物控制標準基本與SPF相同，不同之處為血清病毒抗體檢查（腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒……）經(jīng)?？蓹z出一定滴度的抗體，但不允許出現(xiàn)臨床癥狀和臟器的病理變化和自然死亡。5.普通動物是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制，普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動物。墊料和食物不經(jīng)高壓消毒，飲水為自來水，不喂青飼料。鼠應(yīng)排除肺炎病毒，沙門氏菌和鏈球菌，地鼠不應(yīng)有蟯蟲。普遍動物只能供教養(yǎng)和一般性實驗，不適用于研究實驗。第十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五三、常用實驗動物介紹

1、家兔家兔屬哺乳綱，嚙齒目，兔科。家兔的壽命為4～9年，性成熟期為5～8個月。母兔孕期30天，每胎可產(chǎn)仔1～5只。用家兔作實驗動物有以下優(yōu)點：一是來源較充足，易于飼養(yǎng)，較耐寒冷，繁殖率高，價格較低。二是家兔性較溫順，便于捕捉、搬運、實驗操作，平時也較為安靜，一般沒有叫聲。三是形體較大，可以直接記錄血壓、呼吸、心跳、體溫等，而且一次可采取較大量的血液(約10ml)，也可采取腦脊液。第十四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（1）適應(yīng)范圍1）發(fā)熱：如家兔對各種致熱原較為敏感，易發(fā)熱，適宜于研究發(fā)熱機理、檢查致熱原和研究退熱藥藥理之用。2）感染：家兔易感受多種細菌、病毒，所以適合于制作各種感染的動物模型。3）心臟功能：家兔的心臟在離體條件下能維持較長的搏動時間，所以離體兔心可用于觀察多種病因或藥物對心臟病的直接作用。家兔的耳部血管清晰，可用于觀察藥物對血管的直接作用。（2）不足之處1）消化：家兔屬食草動物，其消化系統(tǒng)與人的差別較大，不適宜用作研究消化系統(tǒng)藥物的藥理。2）嘔吐、咳嗽：家兔缺乏嘔吐和咳嗽反射，因而即使胃或肺部發(fā)生病變，也無外在嘔吐、咳嗽等表現(xiàn)。第十五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（3）常見品種1）青紫蘭兔，又名金基拉種家兔，原為法國培育的品種。毛色特點是全身以銀灰色為主，其毛多毛根灰色，中段白色，毛尖黑色，兩耳一垂一豎，母兔頜下有肉髯。成年兔體重約2.5～5公斤，體質(zhì)健壯，生長快，繁殖率強，抗病力強，多用于生物制品和藥品鑒定的研究。2）大耳白兔，又名日本大耳兔。是在中國白兔基礎(chǔ)上由日本選育而成的。其外觀特點是全身毛純白，紅眼睛，兩耳長大而豎起，頭呈方形，嘴稍鈍，四肢粗壯，體型較長，毛濃密。成年兔體重約4～6公斤，體格健壯，繁殖率強，生長快，耳部皮薄，耳部血管清晰，因而在耳上作靜脈注射比較方便。但是抗病力較差。第十六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五2、小鼠小鼠屬哺乳綱，嚙齒目，鼠科，是野生鼷鼠的變種，其較常見的是小白鼠，全身白毛，但也有其它毛色者。小鼠壽命約2年，性成熟期35～55天，孕期20～25天，每胎生仔2～12只，成年小鼠體重約為20～30g。用小鼠作動物實驗有以下的優(yōu)點：一是來源方便，繁殖周期短，產(chǎn)仔多，生長速度快，飼料消耗少，生活條件容易控制，價格低。適合于需要大量動物的實驗。二是小鼠較易培育成純系動物，具有較多的近交系、突變系、F1動物和封閉群等，便于科學(xué)研究之用。三是小鼠較為溫順，易于捕捉和進行實驗操作。第十七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（1）適用范圍1）動物實驗中用得最多的動物，可以制作多種疾病的動物模型。2）藥理、藥效、毒理研究。（2）不足之處：1）對外界環(huán)境的適應(yīng)能力差，如氣溫過高或過低，或過饑過飽等，均會引起死亡，抗病力也較差。2）個體較小，每次取血量較少，也不適宜進行連續(xù)采血。3）在體實驗較為困難。第十八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（3）品種小鼠的品系較多，目前已培育的近交系有數(shù)百種，是但國際上最常用的近交系品種也只有7～10種。1）中國昆明（KM）種：屬封閉群動物，系在1946年從印度引進到昆明，于1952年從昆明引進到北京生物制品研究所，再推廣到全國?？共∧芰^強，容易飼養(yǎng)，繁殖率高?，F(xiàn)普遍用于藥理、毒理、微生物學(xué)和病毒學(xué)的研究及生物制品和藥品的鑒定等方面。2）ICR小鼠：3）LACA小鼠第十九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五3.品種小鼠的品系較多，目前已培育的近交系有數(shù)百種，是但國際上最常用的近交系品種也只有7～10種。（1）中國昆明（KM）種：屬封閉群動物，系在1946年從印度引進到昆明，于1952年從昆明引進到北京生物制品研究所，再推廣到全國?？共∧芰^強，容易飼養(yǎng)，繁殖率高?，F(xiàn)普遍用于藥理、毒理、微生物學(xué)和病毒學(xué)的研究及生物制品和藥品的鑒定等方面。（2）ICR小鼠：（3）LACA小鼠第二十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五3、大鼠大鼠屬哺乳綱，嚙齒目，鼠科，大鼠屬，是野生褐鼠的飼養(yǎng)變種。其多數(shù)品種全身被白毛，即為大白鼠。其腳掌無毛，尾毛稀少。壽命為2～3年，性成熟期2～3個月，孕期30天，每胎可產(chǎn)仔5～9只，成年大鼠體重約150～250g。大鼠作動物實驗有以下的優(yōu)點：1，來源較方便，抗病力強，繁殖率高，價格也較低，所以實驗經(jīng)費較少。2，較適合用于要求動物同種或純種、同性別，同年齡的一類實驗。3，適用于需要大量動物，但小鼠又不能滿足實驗要求的實驗，如實驗要求較多的采血量，或需要進行在體實驗者。第二十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（1）適用范圍：1）大鼠的血壓反應(yīng)較好，適用于直接描記血壓。2）大鼠的后肢可以作肢體血管灌流。3）心臟可作離體心臟實驗。4）大鼠無膽囊，所以可用大鼠膽管收集膽汁，進行肝膽的有關(guān)實驗。5）對營養(yǎng)缺乏較敏感，適合用于營養(yǎng)學(xué)的研究。（2）不足之處1）大鼠性情不夠溫順，特別是在受驚后會咬人，所以在實驗操作時要小心，或要戴手套以防護。2）雄鼠之間每發(fā)生爭斗、撕咬。3）采血量也較為有限(約4～5ml)，有時不能滿足檢測的需要。第二十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（3）品種大鼠的品種較多，國際上公認的近交系達130余種。主要有以下幾種：1）Wistar品種:屬封閉群動物，系從日本、蘇聯(lián)引進。性情較溫順，適應(yīng)性強，應(yīng)用較廣泛，但因已有大量遺傳變異，現(xiàn)已逐步少用。2）SD(Sprague-Dawley)品種:屬封閉群動物，是由上一品種培育而來，有純種和近交系兩種。其特點是體形較大，性情溫順，發(fā)育優(yōu)良，多用于營養(yǎng)學(xué)和內(nèi)分泌系統(tǒng)實驗和一般檢定。第二十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五4、豚鼠又名天竺鼠、荷蘭豬、海豬，原產(chǎn)于南美洲，后引進到歐洲，屬哺乳綱、嚙齒目、豚鼠科、豚鼠屬。性情溫順，膽小，不咬人。其中又可分為短毛、長毛、剛毛三種，一般多用非純種短毛豚鼠，毛色黃、黑、白相間，稱為三色豚鼠，也有兩色和單色者。用豚鼠作動物實驗有以下優(yōu)點：繁殖較快，飼養(yǎng)方便，易進行同種、同性別、同年齡的一類實驗。第二十四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（1）適用范圍1）對結(jié)核、白喉、百日咳等細菌及螺旋體等病原微生物較為敏感，反應(yīng)也較為一致，所以常用于這類疾病的研究。2）豚鼠對組織胺敏感，常用于平喘藥和抗組織胺藥的藥理研究和免疫學(xué)方面的研究。3）豚鼠的血管反應(yīng)敏感，可用于出血性疾病及血管通透性實驗。4）豚鼠體內(nèi)不能合成維生素C，對維生素C的缺乏很敏感，適合進行維生素C的實驗研究。（2）不足之處1）豚鼠的皮較厚，注射較困難。2）易患病，籠養(yǎng)易發(fā)生足底潰瘍，膽小，對外界刺激極敏感。第二十五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五5、狗（1）狗可通過訓(xùn)練與實驗者配合，所以可在清醒及安靜狀態(tài)下進行胃瘺、腸瘺、膀胱瘺、膽囊瘺等觀察。（2）狗的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)較發(fā)達，消化過程與人相似，所以常用于血液、循環(huán)、消化等系統(tǒng)和高級神經(jīng)活動、外科手術(shù)、血管移植等各種實驗。（3）毒理和藥理研究。在新藥研制中，進行亞急性和慢性毒性實驗的兩種動物中，就規(guī)定其中一種必須用狗。（4）動物的體形較大，易于進行在體實驗和進行多種的測試。狗的品種雖多達數(shù)百種，其中實驗專用犬并不多，國內(nèi)已引進了Beagle犬，培育成二級動物。一般實驗多用普通家犬，應(yīng)注意檢疫，保證健康無病。第二十六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五動物實驗基本方法第二十七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五一、實驗動物的抓取固定方法

（一）小鼠抓取固定方法小鼠溫順，一般不會咬人，抓取時先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_向后拉，在其向前爬行時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。有經(jīng)驗者直接用左手小指鉤起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后頸背部皮膚亦可。這種在手中固定方式，能進行實驗動物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他實驗操作。如進行解剖、手術(shù)、心臟采血和尾靜脈注射時，則需將小鼠作一定形式的固定，解剖手術(shù)和心臟采血等均可使動物先取背臥位（必要時先行麻醉），再用大頭針將鼠前后肢依次固定在臘板上。尾靜脈注射時，可用小鼠尾靜脈注射架固定，先根據(jù)動物大小選擇好合適的固定架，并打開鼠筒蓋，手提鼠尾巴，讓動物頭對準鼠筒口并送入筒內(nèi)，調(diào)節(jié)鼠筒長短合適后，露出尾巴，固定筒蓋即可進行尾靜脈注射或尾靜脈采血等操作。第二十八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五第二十九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

（二）大鼠的抓取固定方法大鼠的抓取斯基本同小鼠，只不過大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用襲擊方式抓取，否則會被咬傷手指，抓取時為避免咬傷，可帶上帆布手套。如果進行腹腔、肌肉皮下等注射和灌胃時，同樣可采用左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠背皮膚，置于左掌心中，這樣右手即可進行各種實驗操作。也可伸開左手之虎口，敏捷地從后，一把抓住。若做手術(shù)或解剖等，則需事先麻醉或處死，然后用細棉線繩活縛腿，背臥位綁在大鼠固定板上；尾靜脈注射時的固定同小鼠（只需將固定架改為大鼠固定盒即可）。第三十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（三）兔的抓取固定方法

1．抓取：實驗家兔多數(shù)飼養(yǎng)在籠內(nèi)，所以抓取較為方便，一般以右手抓住兔頸部的毛皮提起，然后左手托其臀部或腹部，讓其體重重量的大部分集中在左手上，這樣就避免了抓取過程中的動物損傷。不能采用抓雙耳或抓提腹部。

2．固定：一般將家兔的固定分為盒式、臺式和馬蹄形三種。盒式固定，適用于兔耳采血、耳血管注射等情況；若做血壓測量、呼吸等實驗和手術(shù)時，則需將兔固定在兔臺上，四肢用粗棉繩活結(jié)綁住，拉直四肢，將繩綁在兔臺四周的固定木塊上，頭以固定夾固定或用一根粗棉繩挑過兔門齒綁在兔臺鐵柱上；馬蹄形固定，多用于腰背部，尤其是顱腦部位的實驗，固定時先剪去兩側(cè)眼眶下部的毛皮，暴露顴骨突起，調(diào)節(jié)固定器兩端釘形金屬棒。使其正好嵌在突起下方的凹處，然后在適當(dāng)?shù)母叨裙潭ń饘匍?。用馬蹄形固定器可使兔取用背臥位和腹臥位，所以是研究中常采用的固定方法。第三十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五1、2、3均為不正確的抓取方法（1．可損傷兩腎，2．可造成皮下出血，3．可傷兩耳），4、5為正確的抓取方法。頸后部的皮厚可以抓，并用手托兔體。第三十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五家兔盒式固定法

家兔臺式固定法第三十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

動物在實驗前常常需要作適當(dāng)?shù)姆纸M，那么就要將其標記使各組加以區(qū)別。標記的方法很多，良好的標記方法應(yīng)滿足標號清晰、耐久、簡便、適用的要求。常用的標記法有染色、耳緣剪孔、烙印、號牌等方法。二、實驗動物編號標記方法第三十四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（一）顏料涂染這種標記方法在實驗室最常使用，也很方便。使用的顏料一般有3-5%苦味酸溶（黃），2%硝酸銀（咖啡色）溶液和0.5%中性品紅（紅色）等。標記時用毛筆或棉簽蘸取上述溶液，在動物體的不同部位涂上斑點，以示不同號碼。編號的原則是：先左后右，從上到下。一般把涂在左前腿上的計為1號，左側(cè)腹部計為2號，左后腿為3號，頭頂部計為4號，腰背部為5號，尾基部為6號，右前腿為7號，右側(cè)腰部為8號，右后腿計為9號。若動物編號超過10或更大數(shù)字時，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個倍數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)，這種交互使用可編到99號，假使把紅的記為十位數(shù)，黃色記為個位數(shù)，那么右后腿黃斑，頭頂紅斑，則表示是49號鼠，其余類推。第三十五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五第三十六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（二）烙印法用刺數(shù)鉗在動物耳上刺上號碼，然后用棉簽蘸著溶在酒精中的黑墨在刺號上加以涂抹，烙印前最好對烙印部位預(yù)先用酒精消毒。（三）號牌法用金屬制的牌號固定于實驗動物的耳上，大動物可系于頸上。對猴、狗、貓等大動物有時可不做特別標記，只記錄它們的外表和毛色即可。第三十七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五三、實驗動物的給藥途徑和方法

1、注射給藥法（1）皮下注射大鼠、小鼠和豚鼠可在肩胛間、腹部或腿內(nèi)側(cè)皮下注射；家兔可取背部或耳根部皮下注射；狗、貓常在大腿外側(cè)皮下注射；鴿、鵪鶉通常在翼下注射；蛙可在脊背部淋巴腔注射。

注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。（2）皮內(nèi)注射：皮內(nèi)注射時需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。

（3）肌肉注射大鼠、小鼠、豚鼠常在大腿內(nèi)側(cè)肌肉注射；家兔可在頸椎或腰椎旁的肌肉注射；貓、狗等大動物常在臀部肌肉注射。肌肉注射應(yīng)選肌肉發(fā)達，無大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時垂直迅速刺入肌肉，回抽針栓如無回血，即可進行注射。第三十八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（4）腹腔注射：用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.5～1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。

第三十九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（5）靜脈注射：①兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動物，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。第四十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五②小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)及背側(cè)各一根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用，背側(cè)一根也可采用，但位置不容易固定。操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3厘米）處進針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射第四十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五③狗：狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動物側(cè)臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。第四十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

2、經(jīng)口給藥法（1）灌胃給藥：在急性試驗中，經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。

①小鼠、大鼠（或豚鼠）：用輸血針頭或小號腰穿針頭，將其尖端斜面磨平，用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，注意勿堵塞針孔，即成灌胃針；亦可用燒成圓頭的硬質(zhì)玻璃毛細管或特制的塑料毛細管，作為導(dǎo)管。灌胃時將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時應(yīng)無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應(yīng)立即停止進針或?qū)⑨槹纬?，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠3－4cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠為1-5ml。第四十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五②狗、兔、貓、猴：

灌胃時，先將動物固定，再將特制的擴口器放入動物口中，擴口器之寬度可視動物口腔大小而定，如狗的擴口器可用木料制成長方形，長約10-15cm，粗細應(yīng)適合狗嘴，約2-3cm，中間粘一小孔，孔的直途為5-10cm。灌胃時將擴口器放于上述動物上下門牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導(dǎo)管（如導(dǎo)尿管），經(jīng)擴口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進入食道，此時應(yīng)檢查導(dǎo)管是否正確插入食道，可將導(dǎo)管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認為此導(dǎo)管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入

第四十四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（2）喂飼：該法常用于給藥時間較長實驗。（3）經(jīng)口滴入：用金屬或硬塑料管接上注射器，也可用吸管、移液管等，將藥物液體或糊劑滴入動物口腔。（4）經(jīng)口吞咽：較大動物，如兔、貓、狗等，可事先將藥裝入膠囊，直接送至動物咽部，便于吞入。第四十五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五3、吸入給藥法：（1）動式吸入法：采用機械通風(fēng)裝置、連續(xù)不斷地將新鮮空氣和藥物（毒物）送入染毒柜，并排出等量的污染氣體，使染毒濃度相對穩(wěn)定。（2）靜式吸入法：是將實驗動物放在相對密閉容器內(nèi)，加入一定量的毒物，造成一定濃度的含藥物空氣，在規(guī)定時間內(nèi)觀察實驗動物的反應(yīng)。（3）氣管注入法：經(jīng)氣管注入藥物，是觀察藥物經(jīng)呼吸道進入機體的方法之一。

4、經(jīng)皮給藥法：多用于外用藥的觀察。第四十六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五四、實驗動物用藥量的確定及計算方法

1、動物給藥量的確定

在觀察一個藥物的作用時，應(yīng)該給動物多大的劑量是實驗開始時應(yīng)確定的一個重要問題。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動物中毒致死，可以按下述方法確定劑量：

1．先用小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一為應(yīng)用劑量，一般可取1/10-1/5。

2．植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。

3．化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的藥物的劑量。第四十七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五4．確定劑量后，如第一次實驗的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn)（體重下降、精神不振、活動減少或其他癥狀），可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律時，則更應(yīng)慎重分析。5．用大動物進行實驗時，開始的劑量可采用給鼠類劑量的十五分之一～二分之一，以后可根據(jù)動物的反應(yīng)調(diào)整劑量。6．確定動物給藥劑量時，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強弱。一般說確定的給藥劑量是指成年動物的，如是幼小動物，劑量應(yīng)減少。如以狗為例：6個月以上的狗給藥量為1份時，3-6個月的給1/2份，45-89日1/4份，20-44日的給1/8份，10-19日的給1/16份。7．確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同，以口服量為100時，灌腸量應(yīng)為100-200，皮下注射量30-50，肌肉注射量為25-30，靜脈注射量為25。第四十八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

2、人與實驗動物藥物劑量的換算方法目前用的人與實驗動物間藥物劑量的換算方法有多種，如按體表面積折算不同動物間等效劑量，按體型系數(shù)法計算等效劑量，用LD50和耐受量進行劑量估算等。一般來說，動物的耐受性比人大，也就是單位體重的用藥量動物比人要大。第四十九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表小鼠20g大鼠200g豚鼠400g家兔1.5kg貓2.0kg猴4.0g狗12g人70g小鼠1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大鼠0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠0.080.571.02.252.45.24.231.5家兔0.040.250.441.01.082.44.514.2貓0.030.230.410.921.02.24.113.0猴0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗0.0080.060.100.220.230.521.03.1人0.0260.0180.0310.070.0780.160.321.0第五十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五已知大白鼠的劑量為250mg/kg，計算狗的用藥劑量。

12kg狗的體表面積為200g大白鼠的17.8倍。該藥200g的大白鼠需給藥250×0.2=50mg。于是狗的適當(dāng)試用劑量為

第五十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五動物與人的每公斤體重劑量折算系數(shù)折算系數(shù)WA種動物或成人小鼠0.02㎏大鼠0.2㎏豚鼠0.4㎏兔1.5㎏貓2㎏犬12㎏成人60㎏B種動物或成人小鼠0.02㎏1.01.41.62.73.24.89.01大鼠0.2㎏0.71.01.141.882.33.66.25豚鼠0.4㎏0.610.871.01.652.053.05.55兔1.5㎏0.370.520.61.01.231.762.30貓2㎏0.300.420.480.811.01.442.70犬12㎏0.210.280.340.560.681.01.88成人60㎏0.110.160.180.3040.3710.5211.0第五十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五已知A種動物每kg體重用藥量，欲估算B種動物每kg體重用藥劑量時，可先查表，找出折算系數(shù)（W），再按下式計算：

B種動物的劑量(mg/kg)=W×A種動物的劑量(mg/kg)例如，已知某藥對小鼠的最大耐受量為20mg/kg（20g小鼠用0.4mg），需折算為家兔量。查A種動物為小鼠，B種動物為兔，交叉點為折算系數(shù)W=0.37，故家兔用藥量為0.37×20mg/kg=7.4mg/kg，1.5kg家兔用藥量為11.1mg。第五十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五人與動物用藥量換算的簡易方法人與動物對同一藥物的耐受性是相差很大的。一般說來，動物的耐受性要比人大，也就是單位體重的用藥理動物比人要大。人的各種藥物的用量在很多書上可以查得，但動物用藥量可查的書較少，而且動物用的藥物種類遠不如人用的那么多。因此，必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算：人用藥量為1，小白鼠、大白鼠為25-50，兔、豚鼠為15-20，狗、貓為5-10。第五十四頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五五、實驗動物的麻醉

在實驗中為減少動物的掙扎和保持其安靜，并便于操作，常對動物采用必要的麻醉。由于動物種屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和選用的麻醉劑亦有不同。第五十五頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五1、常用麻醉劑：

揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等。乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所發(fā)安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醚時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)上情況。

非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。中藥麻醉劑洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。第五十六頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

2、動物的麻醉方法（1）全身麻醉：①吸入法用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒可其中，迅速轉(zhuǎn)入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4-6分鐘即可麻醉，麻醉后應(yīng)立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，當(dāng)然也可用于較大的動物只是要求有麻醉口罩或較大的玻璃箱罷了。由于乙醚燃點很低，遇火極易燃燒，所以在使用時，一定要遠離火源。

②腹腔和靜脈給藥麻醉法非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別。所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定控制藥物的濃度和注射量。第五十七頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（2）局部麻醉①貓的局部麻醉一般應(yīng)用0.5-1.0%鹽酸普魯卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%鹽酸可卡因。②兔在眼球手術(shù)時，可于結(jié)膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。③狗的局部麻醉用0.5-1%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。

第五十八頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五（3）麻醉注意事項①靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應(yīng)，當(dāng)這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以兔麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。②麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調(diào)節(jié)機能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應(yīng)根據(jù)動物的肛門體溫而定。常用實驗動物正常體溫：貓為38.6℃±1.0℃，兔為38.4℃±1.0℃，大鼠為39.3℃±0.5℃。③作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動物體溫水平第五十九頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五六、實驗動物的采血方法

實驗研究中，經(jīng)常要采集實驗動物的血液進行分析，故必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術(shù)。采血方法的選擇，主要決定于實驗的目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動脈血液。采血時要注意：⑴采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃為宜；⑵采血用具有采用部位一般需要進行消毒；⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。第六十頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五(一)小鼠、大鼠采血法

1.割(剪）尾采血當(dāng)所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀）割去尾尖0.3-0.5cm，讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。

2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多時（僅做白細胞計數(shù)或血紅蛋白檢查），可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果長期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。第六十一頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

3.眼眶靜脈叢采血采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套），應(yīng)防止動物窒息。當(dāng)取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號針頭的1ml注射器或長頸（3～4cm）硬質(zhì)玻璃滴管（毛細管內(nèi)徑0.5-1.0mm），使采血器與鼠面成45℃的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約2～3mm，大鼠約4～5mm。當(dāng)感到有阻力時即停止推進，同時，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學(xué)項目的檢驗。

4.斷頭取血采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大（?。┦蟮念i部皮膚，并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8～1.2ml;大鼠約5-10ml。第六十二頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五5.心臟采血鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血，先將動物作深麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml；大鼠約0.8-1.2ml。6.頸動靜脈采血先將動物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。7.腹主動脈采血最好先將動物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使腹主動脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血?；蛴脽o齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動脈，使血液噴入盛器。8.股動（靜）脈采血先由助手握住動物，采血者左手拉直動物下肢，使靜脈充盈?；蛘咭圆珓訛橹笜?，右手用注射器刺入血管。體重15-20g小鼠采血約0.2-0.8ml，大鼠約0.4-0.6ml。第六十三頁，共六十八頁，編輯于2023年，星期五

（二）豚鼠采血法

1.耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液，阻止血凝，則血可自切口自動流出，進入盛器。操作時，使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。

2.心臟采血取血前應(yīng)探明心臟搏動最強部位，通常在胸骨左緣的正中，選心跳最顯的部位作穿刺。針頭宜稍細長些，以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血，其操作手法詳見兔心臟采血。因豚鼠身體較小，一般可不必將動物固定在解剖臺上，而可由助手握住前后肢進行采血即可。成年豚鼠每周采血應(yīng)不超過10ml為宜。

3.肌動脈采血將動脈仰位固定在手術(shù)臺上，剪去腹股溝區(qū)的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切開長約2-3cm的皮膚，使股動脈暴露及