動(dòng)物細(xì)胞工程第二節(jié)課用

動(dòng)物細(xì)胞工程第二節(jié)課用第一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)第二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五1．在課本上劃出動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的概念，用雙色筆圈出關(guān)鍵詞，嘗試進(jìn)行解讀。2.動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的地位：3.選材和原因：4.結(jié)合圖解2-13，圈出關(guān)鍵詞5.培養(yǎng)過程中使用胰蛋白酶的作用：6.動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的主要區(qū)別：7.區(qū)分一組名詞：原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株和細(xì)胞系、細(xì)胞的接觸性抑制現(xiàn)象8.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程的具體條件有哪些？O2和CO2的作用？9.培養(yǎng)基的類型及區(qū)別10.合成培養(yǎng)基需添加什么成分，目的是什么？11.培養(yǎng)過程中需保證什么條件？必要時(shí)可添加什么成分？原因是什么？12.比較不同細(xì)胞體外培養(yǎng)的難易度。13．列表比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)五、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(閱讀課本61-62，獨(dú)學(xué)思考下列問題）第三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五歸納過程取

的組織、器官，剪碎細(xì)胞懸浮液

酶

貼滿瓶壁的細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加入

液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白培養(yǎng)接觸抑制原代

培養(yǎng)(分裝前)1-10代細(xì)胞第四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五遺傳物質(zhì)

改變?cè)?xì)胞培養(yǎng)加

液40—50代細(xì)胞(細(xì)胞株)未遺傳物質(zhì)

改變無限傳代（細(xì)胞系）已傳代培養(yǎng)胰蛋白

酶

原理：細(xì)胞增殖目的：細(xì)胞株(系），獲得細(xì)胞產(chǎn)物第五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五有關(guān)概念

細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。4、細(xì)胞膜的主要成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？能注意時(shí)間的控制7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？

不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近第七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五1、無菌、無毒的環(huán)境

保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖

添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。8.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2、營(yíng)養(yǎng)3、溫度和PH

培養(yǎng)室中控制,使之達(dá)到36.5±0.5℃,7.2~7.44、氣體環(huán)境：培養(yǎng)箱中提供O2和CO2（95%空氣和5%CO2）9.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用（1）培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植（2）基因工程的受體細(xì)胞（3）細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

第八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的

細(xì)胞培養(yǎng)基特有成分

、植物激素葡萄糖、培養(yǎng)結(jié)果植物體培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得全能性增殖蔗糖動(dòng)物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞,某些蛋白質(zhì)第九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五前景展望資料一：第十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)。許多致畸、致癌物質(zhì)加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異。根據(jù)變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可以判斷某種物質(zhì)的毒性?，F(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)成為檢測(cè)有毒物質(zhì)的快速而靈敏的有效手段。資料二：第十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五人工關(guān)節(jié)——軟骨再生1.第一次手術(shù):從病人關(guān)節(jié)軟骨中未受力的部分，取出一片約為葡萄干大小的健康軟骨組織。2.分離軟骨細(xì)胞并經(jīng)三星期的體外培養(yǎng)，使細(xì)胞數(shù)增加約10～20倍。3.第二次手術(shù):清理軟骨受損的部分，從下方骨頭部位取出一片約與傷口大小相同的骨膜，縫在傷口上方，再將軟骨細(xì)胞注射到骨膜下方。資料三：結(jié)果:經(jīng)過復(fù)健一年后即可恢復(fù)正常的生活。第十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物第十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五1.核移植的概念和種類2.選用去核卵母細(xì)胞的原因3.通過分析“多莉”的產(chǎn)生過程描述核移植的過程4.“多莉”羊培育中的相關(guān)技術(shù)及原理5.“多莉”羊的遺傳物質(zhì)組成6.體細(xì)胞核移植的應(yīng)用7.體細(xì)胞核移植和克隆的存在問題六、動(dòng)物細(xì)胞核移植與體細(xì)胞克隆(閱讀獨(dú)學(xué)材料、課本62-63及圖2-14，獨(dú)學(xué)思考下列問題）第十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.克隆動(dòng)物：用核移植的方法得到的動(dòng)物。第十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體第十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五（二）、分類：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難克隆動(dòng)物:用核移植方法得到的動(dòng)物.

克?。╟lone）是指通過無性生殖而產(chǎn)生的遺傳上均一的生物群，即具有完全相同的遺傳組成的一群細(xì)胞或者生物的個(gè)體?？寺≡谙ＥD語中是“小樹枝葉”的意思，用以指無性增殖物。

第十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五去核卵細(xì)胞供體細(xì)胞電刺激使兩細(xì)胞融合重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵細(xì)胞培養(yǎng)無性生殖（三）、體細(xì)胞的核移植過程高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B1.核移植的概念和種類2.選用去核卵母細(xì)胞的原因3.通過分析“多莉”的產(chǎn)生過程描述核移植的過程4.“多莉”羊培育中的相關(guān)技術(shù)及原理5.“多莉”羊的遺傳物質(zhì)組成6.體細(xì)胞核移植的應(yīng)用7.體細(xì)胞核移植和克隆的存在問題第二十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五（四）、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景

1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程2、保護(hù)瀕危物種3、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植的供體第二十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五（五）、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題

1、克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚。2、克隆技術(shù)效率低，畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。3、生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴。第二十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五2、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是（）

A．獲得不死性的細(xì)胞B．10代以內(nèi)細(xì)胞

C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

AD課堂反饋練習(xí)第二十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五3、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（）A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中D、培養(yǎng)至50代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變B第二十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五4、一般說來，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（）①無毒的環(huán)境②無菌的環(huán)境③培養(yǎng)基需要加入血清④溫度與動(dòng)物體溫相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D(zhuǎn)第二十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)（）①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③細(xì)胞分化④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥原代培養(yǎng)一般傳1－10代A、①②④⑥

B、②③④⑤C、①③④⑥

D、③④⑤⑥A第二十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五6、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答：（1）容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自______________________。（2）容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是

，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來，這樣做的目的是

。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物剪碎胰蛋白使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)第二十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有

________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第

代，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為__。（4）為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用

處理，然后配置成

，再分裝。`動(dòng)物血清10原代培養(yǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液第二十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第二十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體第三十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五一、動(dòng)物細(xì)胞融合

受精作用第三十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五動(dòng)物細(xì)胞融合第三十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法第三十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核第三十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？第三十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第三十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第三十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第三十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第三十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第四十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第四十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五二、單克隆抗體什么是抗體？

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。第四十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五單克隆抗體

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高

第四十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第四十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞第四十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體第四十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤資料：目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。第四十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第四十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五第四十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體第五十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期五

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)