第二章第一節(jié)基因操作的工具酶

基因工程張銳第二章基因操作原理第一節(jié)分子克隆的工具酶第二節(jié)載體第三節(jié)電泳技術(shù)與分子雜交技術(shù)第四節(jié)聚合酶鏈式反應(yīng)第五節(jié)基因克隆的策略第六節(jié)生物芯片第七節(jié)基因文庫的構(gòu)建第八節(jié)分子標記技術(shù)第一節(jié)基因操作的工具酶一限制性核酸內(nèi)切酶及其應(yīng)用二DNA連接酶及其應(yīng)用三DNA聚合酶及其應(yīng)用四修飾性工具酶Geneticengineeringislargelyanexerciseincarefullycontrolledenzymology.Avarietyofenzymesformthebasictoolkitofthegeneticengineer.

1、限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)2、限制性核酸內(nèi)切酶的分類和命名3、II型限制性核酸內(nèi)切酶的基本特性4、限制性核酸內(nèi)切酶的消化反應(yīng)一限制性核酸內(nèi)切酶及其應(yīng)用50年代初發(fā)現(xiàn)了由寄主控制的限制和修飾現(xiàn)象(K)(B)大腸桿菌B大腸桿菌K1110—

410—4E.O.P成斑率efficiencyofplating1、限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)E.coliC100%限制—修飾的酶學(xué)假說(B)(B)酶切位點不被修飾噬菌體DNA被切割酶切位點被修飾Methylation基因組DNA不被切割1968年，Meselson和Yuan從大腸桿菌K和B中發(fā)現(xiàn)了I型限制性核酸內(nèi)切酶；1970年，Smith和Wilcox從流感嗜血桿菌中分離純化了第一個II型限制性核酸內(nèi)切酶HindII，使得DNA分子的體外精確切割成為可能。KKBB限制性核酸內(nèi)切酶的概念

限制性核酸內(nèi)切酶（Restrictionendonucleases）：是一類能夠識別雙鏈DNA分子中某種特定的核苷酸序列，并能精確特異地切割雙鏈DNA分子的核酸內(nèi)切酶。已經(jīng)從近300中微生物中分離出了500余種限制性核酸內(nèi)切酶。2、限制性核酸內(nèi)切酶的分類合命名限制性核酸內(nèi)切酶的分類1.限制修飾活性2.內(nèi)切酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)3.限制輔助因子4.切割位點5.特異性切割6.基因克隆中I型單一多功能的酶3種不同亞基ATP、Mg2+和S-腺苷甲硫氨酸距特異性位點1000bp不是無用II型限制酶和修飾酶分開單一成分Mg2+特異性位點及其附近是非常有用III型雙功能酶2種亞基ATP、Mg2+和S-腺苷甲硫氨酸特異性位點3‘端24-26bp處是有用限制性核酸內(nèi)切酶的命名1、寄主菌屬名的第一個字母（大寫）和種名的頭兩個字母（小寫）組成3個斜體字母的略語表示酶來源的菌種名稱，如大腸桿菌Escherichiacoli

表示為Eco,流感嗜血菌Hemophilusinfluenzae

表示為Hin；2、用一個正體字母表示菌株的類型，比如EcoR、Hind；3、如果一種特殊的寄主菌株具有幾個不同的限制修飾體系，則用羅馬數(shù)字標出，比如EcoRI、HindIII。EEscherichia(屬)cocoli(種)RRY13(品系)I首先發(fā)現(xiàn)在此類細菌中發(fā)現(xiàn)的順序3.II型限制性核酸內(nèi)切酶的3大特點1、識別位點的特異性每種酶都有其特定的DNA識別位點，通常是由4、5、6或7個核苷酸組成的特定序列（靶序列）。2、識別序列的對稱性

靶序列通常具有雙重旋轉(zhuǎn)對稱的結(jié)構(gòu)，即雙鏈的核苷酸順序呈回文結(jié)構(gòu)。3、切割位點的規(guī)范性

雙鏈DNA被酶切后，分布在兩條鏈上的切割位點旋轉(zhuǎn)對稱（可形成粘性末端或平末端的DNA分子）。與II型核酸內(nèi)切酶有關(guān)的幾個概念粘性末端

cohesive

ends因酶切位點在兩條DNA單鏈上不同（對稱）酶切后形成的具有互補堿基的單鏈末端結(jié)構(gòu)，酶切產(chǎn)生的兩個粘性末端很容易通過互補堿基的配對而重新連接起來。平末端

Bluntend因酶切位點在兩條DNA單鏈上相同，酶切后形成的平齊的末端結(jié)構(gòu)，這種末端不易重新連接起來。同位酶識別相同序列的酶稱為同位酶。同裂酶

isoschizomers能識別和切割同樣的核苷酸靶序列的不同內(nèi)切酶。（切割位點不同）（同序同切酶、同序異切酶）同尾酶

isocaudamers識別的靶序列不同，但能產(chǎn)生相同粘性末端的一類限制性核酸內(nèi)切酶。注意：由同尾酶產(chǎn)生的粘性末端序列很容易重新連接，但是兩種同尾酶消化產(chǎn)生的粘性末端重新連接形成的新片段將不能被該兩種酶的任一種所識別。幾種II型限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點PstIProvindenciastuartii164

CTGCAGGACGTCHaemophilusinfluenzaeRd

經(jīng)同尾酶消化的DNA末端連接示意圖5’XXXXGGATCCXXXXXX3’3’XXXXCCTAGGXXXXXX5’BamHI5’XXXXGGATCCXXXXXX3’3’XXXXCCTAGGXXXXXX5’5’XXXXAGATCTXXXXXX3’3’XXXXTCTAGAXXXXXX5’BglII5’XXXXA

GATCTXXXXXX3’3’XXXXTCTAG

AXXXXXX5’5’XXXXAGATCCXXXXXX3’3’XXXXTCTAGGXXXXXX5’5’XXXXAGATCCXXXXXX3’3’XXXXTCTAGGXXXXXX5’BamHIBglII

推測酶切割位點出現(xiàn)的頻率對于推斷DNA酶切片段大小很有用。假定4種核苷酸在DNA分子上出現(xiàn)的頻率相同，那么靶序列為6個核苷酸的內(nèi)切酶在每46（=4096）個核苷酸中酶切位點就有一次出現(xiàn)機會。據(jù)此推算，一條49000bp長的DNA中有12個6核苷酸識別序列的酶切位點（49000/4096）。但事實上并非真正如此，因為DNA分子中4種堿基的出現(xiàn)頻率并不均等。識別位點在DNA分子上出現(xiàn)的頻率一個蹤蝶酶活期單位（U）指：在理滅想的霞反應(yīng)球條件澡（適區(qū)宜的群緩沖懇液和困反應(yīng)寺溫度削，通溜常為37梨℃）下中，50L反應(yīng)易體系望中完貍?cè)禇罱?恒g糟誓D額NA所需納要的柱酶量奔。影響焦酶活膜性的速因素圣很多酬，最阻重要復(fù)的有猾：A。DN鼻A的純準度和時甲基刻化程蓄度B。甘油振的含思量（往不超目過5%）C。反應(yīng)肌體系挽中的輸離子倉強度D。反應(yīng)使體系慮的pH值F。反應(yīng)述的溫蚊度條洽件（通敢常為37菜℃）酶單鴉位的丟定義挖和影鑰響酶啊活性蒙的因赤素Bu考ff受er草(考10X)害2.屑0LWa震te摟r她1堤6.桃5LDN躁A蘭1嗚.0LEn海zy恩me擔(dān)0.運5LVo丙lu紋me剩20據(jù).0L4、限忠制性飛核酸啊內(nèi)切等酶的映消化淋反應(yīng)酶蹤蝶切服反假應(yīng)襯的扣基糟本賽步窩驟＋－電泳紫外您分析37呈℃弄1h加反假應(yīng)液CKMBu軋ff中er偽(品10X)揉2.范0LWa頂te略r換1糾6.盤5LDN衰A泳1.下0L（1g/L）En繳zy寧me糞0.豬5LVo嚷lu騾me減20直.0L1.統(tǒng)0k濤b1.屯0k海b0.贊4k兄b0.字5k流b0.歸6k周bCKMTT限制活性核竿酸內(nèi)枯切酶錯的應(yīng)待用用于鵝轉(zhuǎn)基松因后怕轉(zhuǎn)化躲子的抬鑒定用于辟分子失標記歲（RF讓LP）分峰析遺樸傳多淡樣性用于露構(gòu)建楊基因薦庫（Ge層no糞me表w康al捎ke您r）1、DN載A連接付酶作害用的角特點2、DN唐A連接雕酶的凡反應(yīng)專條件3、DN拼A連接勾的策太略二DN杯A連接康酶及腎其應(yīng)絡(luò)用DN談A連接攔酶的睡發(fā)現(xiàn)環(huán)形DN頃A分子突的發(fā)娘現(xiàn)使螺科學(xué)秧家相望信一區(qū)定有掘一種擾能連武接這帆種Ni您ck的酶濕存在吵。19餐67年，承世界鄭上幾撤個實刃驗室而幾乎仿同時揚發(fā)現(xiàn)污了一芳種能賀夠催易化在2條DN漂A鏈之漸間形嶺成磷酸夕二酯墳鍵的酶——DN丑A連接盼酶（li偶ga蛾se）。DN將A連接療酶由大害腸桿旋菌基路因組DN含A編碼叔，以NA烘D+作為嗽能源吃輔助進因子；T4思DN軌A連接刑酶由大疊腸桿壟菌T4噬菌愈體DN塑A編碼耳，以AT存P作為載能源趙輔助齡因子現(xiàn)。（19好70年）副容勝易制域備，滿而且欺可以抬連接果完全守配對送的平朱末端DN仰A分子祖，所以在交基因只克隆聽中應(yīng)普用廣伯泛。NickNick1、DN粗A連接耽酶作苗用的蝴特點DN損A連接扯酶作若用的額特點A.連接幼的兩門條鏈驕必須痛分別窮具有3′端自布由羥桂基（-O括H）和5邁′端磷咽酸基屬團（-P），岸而且壤只有貍這兩紹個基遮團彼此相虧鄰時懷才能初進行秋連接悶反應(yīng)拆；B.在羥栽基和躬磷酸盈基團鍵間形擁成磷邪酸二誼酯鍵撲是一榴種耗鹽能過程，寧因此機連接毯反應(yīng)類必須粗有能寄量分臂子的甘參與錄，通找常有兩種妖能量闖分子賊，即AT苦P和NA癢D+。OKNO連接城酶的騰酶活絨單位垃（U）：缺以T4客D托NA連接補酶命夢名，嶼在最罪佳的橫緩沖漠體系件及15撿℃、1h之內(nèi)恢，在10軟~1既5μ武L反應(yīng)孫體系承中完美全連踩接1μ天g疏λD煤NA的Hi匹nd訂Ⅲ片段層所需略的酶破量，世稱為1U。載體褲去磷辰防止覽自連各的應(yīng)虛用示障例POHPOHOHOHOHOHPOHPOHOHOHOHOH連接梳酶連接黨酶連接證酶堿性四磷酸蘆酶2P誓i寄主慣修復(fù)赴缺口載體屑自連你或產(chǎn)大生二經(jīng)具體泡等2.山DN視A連接奸反應(yīng)命的條峰件連接信反應(yīng)哭最佳減溫度鞋為37平℃，但撫是此樣時粘教性末緣瑞端間舒氫鍵墊結(jié)合罩不夠葉穩(wěn)定融，而裹且酶舍活性熊也會踐迅速切降低音。比郵如，Ec罩oR朽I粘性唯末端選連接院部位奸只有4個堿說基對咸，很徑容易貓斷開周。所錢以通常菊在4-斷15紡℃連接活。影響宴連接荒效率彈的因航素有船：A.溫度匠（最謊主要隙的因磚素）B.謹A等TP的濃奶度(第1M意-訓(xùn)1悅0五M)C.連接游酶濃浮度（由平末喚端較面粘性籮末端拉要求六高）D.反應(yīng)上時間晌（通每常連呀接過掠夜）E.插入忘片段潮和載此體片惹段的摩鄙爾比轉(zhuǎn)化4℃過夜加反應(yīng)液CK-重組菌落CK+粘性部末端DN瞧A片段截的連搶接NickNick3、DN盈A連接霜的策漢略平末裹端DN墳A片段臟的末民端加施尾連盡接法3’3’5’5’3’3’5’5’末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶+dATP+dTTP3’3’5’5’AAAAA3’3’5’5’TTTTDN崖A聚合倒酶和T4視DN礙A連接買酶平末捏端DN乏A片段量加接固頭連弄接法銜接配物(l受in繡ke省r)，也悼叫接鋒頭，是由杰人工彎化學(xué)肥合成配的一胳段10騙-1秘2個核錯苷酸蔽的DN集A雙鏈縫，其號中包拜含有1個或托幾個婚限制距性酶犁切位鄰點。后使用只時只爽須將碼銜接刺物和托目的嘴片段愿的5′端用恭多核崇苷酸礎(chǔ)激酶淋處理籍使之殖磷酸濕化，對然后友用T4煩DN櫻A連接陳酶進澇行連梁接，疑就可賄獲得行能產(chǎn)洗生粘盛性末受端的DN哭A片段炭。CC舟GA親AT濁TC卵GGGG虹CT請TA側(cè)AG擔(dān)CC磷酸到化CC撿GA宗AT呀TC眨GGGG刪CT勝TA搖AG肺CCPOHOHPPPOHOHT4連接才酶CC柜GA疏AT擾TC況GGGG崗CT訴TA仰AG耍CCPOHPOHEc陸oR錘ICC芬GA識AT瞞TC劇GGGG沒CT寨TA能AG跑CCAA玻TT誕CG且GGC爺CCC蛇GGG納CT收TA扁A當不端同的膨酶產(chǎn)娃生的和黏性振末端搖不能拉互補靜配對控時如甚何連槽接？連接廳酶的同應(yīng)用DN漫A的重箱組加接傍合適存的接匠頭第一宣節(jié)鳳基精因操咱作的傷工具喝酶一死限門制性煮核酸房誠內(nèi)切翼酶及夏其應(yīng)醉用二DN啟A連接氣酶及似其應(yīng)巧用三DN味A聚合妹酶及叼其應(yīng)豎用四乎修染飾性唯工具化酶Ge恥ne然ti旬c歷en腥gi茄ne疼er厚in抖g誕is滔l圈ar扎ge仙ly洪a菊n授ex鴉er污ci廳se陶i刑n響ca加re午fu浪ll持y落co凈nt負ro蹲ll槳ed扒e肯nz驢ym窩ol父og涼y.戲A歡v厲ar恥ie評ty齡o怖f析en雁zy漲me習(xí)s掉fo圖rm廣t何he阿b朝as咸ic態(tài)t辦oo鞭lk麗it痰o勤f巧th月e承g(shù)e坐ne粉ti陷c散en掘gi烘ne爪er返.1、大管腸桿挖菌DN傾A聚合點酶I2、Kl史en膨ow片段3、T4溝D宴NA聚合名酶4、逆欺轉(zhuǎn)錄拔酶（丸反轉(zhuǎn)饑錄酶做）三DN籮A聚合渡酶及頃其應(yīng)路用大腸牙桿菌DN毯A聚合系酶I（E。Co斤liDN用A唐po移l疲I）是Ko習(xí)rn贏be按rg條A膛.暗19歉56年首盛先從壇大腸瘡桿菌E。Co輛li細胞吸中分掃離出園來的弓。它或是一筍種多薯功能管性的信酶，奮包括3種不次同的咳酶活欺力：5′姿-萄3′聚合男酶活臣性以雙欲鏈DN很A為模熟板，頌催化贊單核細苷酸榆結(jié)合士到引置物的3′認-O恩H末端活，并奮不斷爺延伸業(yè)。5′捐-島3′外切庫酶活從性將雙口鏈DN艱A中游曲離的5′末端斬逐個堅切去晉。3′續(xù)-餅5雷′外切牲酶活燒性將游綿離的隔雙鏈集或單偏鏈DN鋸A的3′端降廁解。義不過氣對于聾雙鏈兔的降境解可檢被5′矮-3?！涞亩嚯u聚活韻性所漂抑制晝。CC橫GGG透CT貼AT逐CG福GACCGGGCTATCGGAPolI+Mg2+ATAGCC再TCC江GA耕TA合GC瞧CTGG卵CT獲AT修CG擦GACC點GA戚TA雜GC友CTGG奶CT顆ACCGATAGCCTGGCTATCGGAPolI+Mg2+CCGATAGCCTGGCTAPolI+Mg2+T大腸腫桿菌DN暢A聚合謎酶I的三叔種用鴉途A.制備乳高比紹活度僵的DN務(wù)A探針利用西其5′映3告′的外愿切酶翁活性惜及其織聚合每酶活扒性。B.用于DN沸A連接蜓后的未大缺秋口填少充利用5′征3它′的聚攤合酶擠活性險。C.用于DN登A的序剪列分頭析利用5′哪3′的聚恰合酶套活性用。大腸設(shè)桿菌須聚合極酶I的應(yīng)斗用示四例CC穗GA靜TA科GC唉CTGG甜CT黨AT獸CG劉GACCGATAGCCTGGCTATCGGAPolI+Mg2+切口惠平移(N添ic莊k洲tr項an膚sl弓at蘇io姓n)CC仇GGG車CT蔬AT記CG賄GACCGGGCTATCGGAPolI+Mg2+ATAGCC瓶T1、大遵腸桿掛菌DN襯A聚合安酶I2、Kl療en到ow片段3、T4評D界NA聚合膝酶4、逆槍轉(zhuǎn)錄嫁酶（路反轉(zhuǎn)寄錄酶斃）三DN控A聚合急酶及磚其應(yīng)冬用Kl束en滲ow片段讀的主盆要用椅途Kl胳en童ow片段大腸誦桿菌蘋聚合折酶I全酶墊經(jīng)枯草籌桿菌烘蛋白巴酶處理虛后產(chǎn)電生的惜大片世段酶妖分子率，它臥仍然艦有5′然3懸′的聚丹合酶神活性擋和3′5找′的核績酸外殊切酶斯活性背，但廟失去早了5′辣3′的外木切酶劣活性錘。Kl尼en爭ow片段的主反要用崖途修補稻限制懂性酶哭消化DN葉A形成新的3′隱蔽撓末端標記DN是A片段健的末念端cD聞NA克隆騾中第株二鏈cD舒NA的合需成DN縣A序列嫌的測毛定GAACT瀉TA傘A1、大脆腸桿杜菌DN抖A聚合倚酶I2、Kl困en繁ow片段3、T4、T7欄D孫NA聚合倚酶4、逆逝轉(zhuǎn)錄桐酶（熊反轉(zhuǎn)姑錄酶庸）三DN倡A聚合煮酶及配其應(yīng)禮用T4、T7俗DN頃A聚合顛酶的恥特點T4房誠D也NA聚合猶酶是從T4噬菌攔體感程染了掠的大泡腸桿傘菌中檢分離乘出來刑的，桂它和大腸占桿菌撥聚合容酶I一樣具有5′渣3蛙′的聚電合酶膽活性點、5′盈3士′的外薪切酶杠活性票和3撕′寒5只′的核鑰酸外主切酶攤活性欺。其外編切酶銹活性答要比輕大腸府桿菌次聚合昨酶I的活胸性高20展0倍。T7頑D歡NA聚合閑酶是從T7噬菌闊體感蛇染了栽的大副腸桿嫂菌中療分離萌出來版的，T7何D藏NA聚合降酶是究所有DN綢A聚合仔酶中陪持墾續(xù)合場成能亞力最維強的把一種歸酶，其3獲′考5四′的核舊酸外陣切酶容活性去是Kl倦en拌ow索D礎(chǔ)NA聚合倉酶的10粱00倍。T7麻D顧NA聚合舒酶可內(nèi)以替閃代T4條D否NA聚合禾酶的槳功能瀉并能躲用于書大片委斷的廢擴增旺。T4四D駱NA聚合誕酶的轎用途1、以設(shè)填充搖反應(yīng)急標記壩有5′端延元伸的節(jié)雙鏈DN堤A片段獲；2、以配取代赤反應(yīng)解標記適延伸預(yù)末端葵或平黎頭末烏端的雙頓鏈DN滾A片段踐；3、用暫于DN搬A序列蓄分析黃；耐熱悟的DN釋A聚合雪酶耐熱掀的DN靈A聚合黃酶是舅在高愧溫下之具有澡活性善的DN撐A聚合悄酶，樓來自鑄嗜高響溫的蹦細菌諒主要起用于PC捕R反應(yīng)共，如Ta絕q國DN母A聚合鹿酶、Pf執(zhí)u個DN另A聚合蟻酶等泰。1、大峽腸桿腎菌DN失A聚合薯酶I2、Kl膝en種ow片段3、T4殘D療NA聚合膠酶4、逆改轉(zhuǎn)錄桿酶（偷反轉(zhuǎn)主錄酶晌）三DN王A聚合銹酶及綱其應(yīng)霸用逆轉(zhuǎn)哲錄酶—R竭ev甲er湖se世t邊ra重ns塌cr炊ip停ta頃se逆轉(zhuǎn)膊錄酶王是一種扶可以委有效凈地將mR叔NA轉(zhuǎn)錄盜成為DN模A的酶踢，其炎產(chǎn)物羞稱為cD艷NA虜(挺co肝mp植le淹me蠢nt狗ar冰y再DN店A)換.實際果上，愁它也總是一草種RN洋A依賴舉的DN嫩A聚合艇酶。逆轉(zhuǎn)服錄酶顧首先違是19西70年從搏鼠白掩血病菌毒和朽勞氏槽肉瘤銀病毒透中發(fā)梅現(xiàn)的虛。這兩聰個課繩題組顧的論盲文都皮發(fā)在款了同蜂一期塘的《N礦at生ur桿e》雜志距上。主要脊用途趣是將mR巷NA轉(zhuǎn)錄虜成cD以NA以制鄙備基恨因片批段。3’收A害AA雞AA漆AA廳AAAAAAAAA5’TTTTTTTTTAAAAAAAATTTTTTTTT5’TTTTTTTTT3’AAAAAAAA

第一嫩節(jié)芹基扮因操戒作的究工具謀酶一駕限淋制性曬核酸磚內(nèi)切摧酶及辛其應(yīng)阿用二DN捷A連接咬酶及傾其應(yīng)混用三DN處A聚合扁酶及幫其應(yīng)辛用四饞修念飾性飛工具短酶Ge塑ne窗ti鋒c獎en揚gi放ne僵er排in報g夢is例l訂ar荷ge斧ly量a我n袋ex教er卸ci驗se刺i趟n憶ca致re溫fu竊ll急y葛co貨nt駝ro葵ll笑ed涌e油nz稍ym灶ol邁og想y.堂A鞠v斗ar芝ie法ty野o恐f神en休zy丹me壇s離fo票rm汪t體he佳b催as蕉ic廈t批oo描lk晉it愁o州f驅(qū)th雅e誓ge謎ne廢ti各c趕en怨gi對ne鼓er激.1、末危端轉(zhuǎn)括移酶齒（te渠rm幟in會al扭t敞ra捕ns智fe私ra稼se）2、核竹酸酶SI（SI芬n姨uc缸le某as是e）4、堿感性磷厚酸化庭酶四仰修趣飾性唯工具灰酶末端暴轉(zhuǎn)移鵝酶的房誠特性末端殘轉(zhuǎn)移襖酶是道一類哈不依灑賴于DN漠A模板慮的DN叮A聚合宰酶。該類蹲酶可合以在額沒有考模板催鏈存跟在的推情況傲下，煙將核播苷酸霧連接牲到DN光A的在3‘羥基竿，特莫別是系對于誼平末凡端的加雙鏈DN膽A末端神加尾虛十分繳有效憂。最常頃見的孤用途丘是在藥酶切災(zāi)產(chǎn)生報的平拍末端元加尾申以便哄于創(chuàng)群造粘基性的臣互補咸末端。平末輝端DN斯A片段蔬的末亭端加牧尾連才接法3’3’5’5’3’3’5’5’末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶+dATP+dTTP3’3’5’5’3’3’5’5’AAAAATTTTDNA聚合酶和T4DNA連接酶1、末顯端轉(zhuǎn)牙移酶默（te恐rm槳in撈al丈t別ra浙ns扮fe冰ra棟se）2、核平酸酶SI（SI跳n鋪uc枝le養(yǎng)as祥e）3、堿蘇性磷裳酸化蓋酶（Al溫ka爬li旺ne瞎p宰ho押sp膜ha奏ta緩se）四魯修舉飾性凝工具移酶核酸欣酶SI的特覺性這是盯一種鑰從米警曲霉裹（As捎pe袖rg遇il觀lu榜s換or排yz閃ae）中埋分離扇的可榴以降榮解單碌鏈DN施A或RN奔A的外霸切酶。其主自要用連途有（降畫解單恩鏈核撿酸）A、在cD賄NA合成漂過程凈中，累切開cD布NA的發(fā)董夾末慎端；B、載胳體構(gòu)疊建過遷程中怖，切曲去DN據(jù)A片段呢的單蓮鏈尾付巴，形成知平末隆端結(jié)殼構(gòu)。3’悲A御AA拾AA慈AA誦AAAAAAAAA5’TTTTTTTTTAAAAAAAATTTTTTTTT5’TTTTTTTTT3’AAAAAAAA

發(fā)夾縱結(jié)構(gòu)鞠的切贊除TTAAAATT單鏈梢尾巴侍的切硬除1、末題端轉(zhuǎn)答移酶膛（te孟rm更in燃al妖t廢ra生ns病fe內(nèi)ra側(cè)se）2、核筋酸酶SI（SI膚n減uc表le缸as限e）3、堿壓性磷哄酸化火酶四姻修丘飾性架工具割酶堿性驚磷酸肌化酶鍋的特戚性從細漿菌中俗分離邪的堿兼性磷椅酸化翁酶簡避稱BA書P（Ba伏ct有er珍ia糾l懇Al諒ka鳳li揭ne憑P潔ho徐sp蒸ha急ta蘆se），膜從小擠牛腸它中分罵離的培簡稱CA第P（Ca洋lf跳A迎lk順al各in刃e吩Ph桂os棋ph濤at斤as將e）.其主鐘要功泉能是運將DN誕A或RN倒A5氧′端的拖磷酸喚切除仔。其主具要用搜途有救：A、在滅用P標記DN別A懇5′端之胖前，紀去除5′端的視磷；B、在DN招A重組描技術(shù)遙中，姓去除DN摸A片段顫的5′磷酸菜，防止載預(yù)體的擔(dān)自身市環(huán)化質(zhì)。載體股去磷糖防止襪自連港的應(yīng)陵用示董例POHPOHOHOHOHOHPOHPOHOHOHOHOH連接盯酶連接狡酶連接秀酶堿性管磷酸油酶2P揪i寄主則修復(fù)刊缺口載體防自連倘或產(chǎn)舟生二再具體乞等小罰結(jié)第一員節(jié)腔基傭因操鞏作的努工具沿酶一單限活制性問核酸魂