實(shí)驗(yàn)酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

實(shí)驗(yàn)六酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

—pH、溫度、激活劑、抑制劑

對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之－－山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1.了解pH、溫度、激活劑、抑制劑對(duì)酶活力的影響。2.學(xué)習(xí)測(cè)定酶最適pH值的方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】

對(duì)環(huán)境酸堿度敏感是酶的特點(diǎn)之一。酶表現(xiàn)最大活力時(shí)的pH值稱為酶的最適pH值。一般酶的最適pH值在4～8之間。

酶的催化作用受溫度的影響很大，反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為37～40℃，大多數(shù)植物酶的最適溫度為50～60℃。

激活劑能增加酶的活力，抑制劑會(huì)降低酶的活力。如

Cl-是唾液淀粉酶的激活劑，Cu2+則是該酶的抑制劑。

在不同pH、溫度以及激活劑、抑制劑存在下，唾液淀粉酶對(duì)淀粉水解活力的高低可通過(guò)水解混合物遇碘呈現(xiàn)顏色的不同來(lái)判斷。

淀粉及其水解產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的顏色：

淀粉呈藍(lán)色；

大分子糊精（紫色糊精）呈紫色；

其次的糊精（紅色糊精）呈紅色；

小分子糊精及麥芽精為無(wú)色。

【器材與試劑】（一）器材1.恒溫水浴鍋2.試管3.試管架4.錐形瓶（50ml或100ml）5.移液器（1000μl、100μl）

（二）試劑

1.0.5％淀粉溶液（含有0.3％NaCl）

2.0.2mol／LNa2HPO4溶液

3.0.1mol／L檸檬酸溶液

4.KI－I2溶液

5.新鮮唾液

6.0.1％淀粉溶液

7.1％NaCl溶液

8.1％CuSO4溶液

9.稀碘液【實(shí)驗(yàn)步驟】1.pH值對(duì)酶活力的影響(1)取大試管6支，編號(hào)。按下表制備pH5.0～8.0的5種緩沖溶液。編號(hào)試劑0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.1mol/L檸檬酸(ml)緩沖液pH11.551.455.021.91.16.032.30.76.842.80.27.652.90.18.062.30.76.8(2)向每支試管加入0.5%淀粉溶液2mL。

注：第6號(hào)試管與第3號(hào)試管的內(nèi)容物相同。

(3)測(cè)定淀粉完全水解所需的時(shí)間：先向第6號(hào)試管中加稀釋50～200倍的唾液2ml，搖勻后放入37℃恒溫水浴中保溫。每隔1min從試管中取1滴混合液，置于白瓷板上，加1滴KI-I2溶液，檢測(cè)淀粉水解程度，并測(cè)定淀粉完全水解所需的時(shí)間。

按照第6號(hào)試管的保溫時(shí)間，依次將各管迅速取出，并立即加入KI－I2溶液2滴，充分搖勻。觀察各管呈現(xiàn)的顏色，觀察pH對(duì)唾液淀粉酶活力的影響，并確定其最適pH。

(4)測(cè)定淀粉酶的最適pH：每隔1min依次向第1至第5號(hào)試管中加入上述稀釋的唾液2ml，搖勻，依次將5支試管放入37℃恒溫水浴鍋中保溫。2.溫度對(duì)酶活力的影響

取試管3支，編號(hào)后按下表加入試劑：

試管編號(hào)試劑123淀粉溶液/mL1.51.51.5煮沸10min的唾液/mL__1新鮮的稀釋唾液/mL11_第1、3號(hào)試管放入37℃，第2號(hào)試管放入冰水中，各10min。取出后，2號(hào)管分為兩份，一份放入37℃。

KI-I2溶液/滴222記錄觀察結(jié)果3.激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響（1）取試管3支，按下表編號(hào)加入相應(yīng)試劑：試管編號(hào)試劑0.1％淀粉(ml)1％NaCl(ml)1%CuSO4(ml)H2O(ml)1:20唾液(ml)121－－122－1－132－－11(2)搖勻，置37℃水浴中保溫，每隔2min取液體，用稀碘液檢測(cè)淀粉水解程度，至淀粉完全水解?！咀⒁馐马?xiàng)】pH值對(duì)酶活力的影響實(shí)驗(yàn)：1.掌握第6號(hào)試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一。2.嚴(yán)格控制溫度。在保溫期間，水浴溫度不能波動(dòng)，否則影響結(jié)果。3.嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間,保證每管反應(yīng)時(shí)間相同。激活劑、抑制劑對(duì)酶活力的影響：每管中加入的底物應(yīng)是不含NaCl的0.1％淀粉溶液?！舅伎碱}】1.高溫導(dǎo)致酶活性喪失的分子機(jī)理是什么？如何在酶的分離純化中克服這種影響？2.什么是酶的最適溫度？