實驗兩對半的檢測演示文稿

實驗兩對半的檢測演示文稿目前一頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點酶免疫技術分類

酶免疫組化

酶免疫測定

固相酶免疫測定

液相酶免疫測定均相酶免疫測定非均相酶免疫測定目前二頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點ELISA的概念酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）酶聯(lián)：抗原或抗體的酶標記。免疫：以抗原抗體特異性反應為基礎。吸附：抗原或抗體包被于固相載體表面。

在固相載體表面實現(xiàn)抗原抗體的反應，通過酶標記的手段，酶催化底物形成水解、氧化或還原反應，形成有色物質，其顏色的深淺與標本中的抗原或抗體的量直接相關。

目前三頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點ELISA技術特點具有良好的靈敏度和特異性，能滿足臨床需要，應用廣泛。操作簡單、無需昂貴的儀器投入，價格便宜。對環(huán)境幾乎沒有污染。目前四頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點ELISA技術的應用檢測抗原的方法：雙抗體夾心法競爭法檢測抗體的方法：雙抗原夾心法間接法競爭法捕獲法目前五頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點實驗目的掌握ELISA法檢測“乙肝二對半”的原理、操作步驟及注意事項。掌握檢測“乙肝二對半”的臨床意義。

目前六頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點什么是“乙肝二對半”？“乙肝兩對半”是指：表面抗原（HBsAg）、表面抗體（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗體（HBeAb）、核心抗體（HBcAb）HBsAg本身不具有傳染性，只具有抗原性保護性抗體：HBsAb傳染性指標：HBeAg，HBcAgHBeAb，HBcAb不是保護性抗體，而是反映曾被HBV感染的重要指標。目前七頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點為什么不檢測核心抗原（HBcAg）HBcAg主要位于病毒顆粒中，只有少數(shù)游離。機體免疫系統(tǒng)對HBcAg很敏感，易產生高滴度的HBcAb,與HBcAg形成免疫復合物。血清中，HBcAg可丟失部分氨基酸。目前八頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點“乙肝二對半”的檢測原理HBsAg：雙抗體夾心法HBsAb：雙抗原夾心法HBeAg：雙抗體夾心法HBeAb：中和競爭法（血清中的e抗體與固相e抗體競爭結合e抗原）HBcAb：競爭抑制法目前九頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點雙抗原（體）夾心法測抗體（原）包被抗原*酶標抗原待測抗體包被抗體*酶標抗體待測抗原Anti-HIV,Anti-HBs雙抗體夾心法雙抗原夾心法HBsAg,HCVcoreAg,HBeAg,HBVpreS1,PreS2目前十頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點洗滌洗滌雙抗體夾心法測抗原+-YYYEYEYEYYEYEYEYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYY目前十一頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點競爭抑制法測抗體包被抗原待測抗體*酶標抗體

Anti-HBcAnti-HBe目前十二頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點中和競爭法測抗體包被抗體中和抗原待測抗體*酶標抗體Anti-HBe目前十三頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點試劑盒組成包被反應板：固相的抗原或抗體酶結合物：酶標記的抗原或抗體顯色劑：分A、B二瓶終止液對照：陽性對照，陰性對照濃縮洗滌液中和試劑（只有檢測HBeAb的試劑盒才有）目前十四頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點實驗準備配制洗滌液：用蒸餾水按1：20稀釋濃縮洗滌液。為節(jié)省試驗時間，除檢測核心抗體（HBcAb）組外，其余組可在加樣后的溫育時間中才配制洗滌液。目前十五頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點實驗操作1、加樣：第一、二孔為陰、陽對照孔，分別加入陰、陽對照50ul。其余各孔為樣品孔，各加入待測標本50ul（檢測HBcAb時，待測標本需用稀釋后的洗滌液做1：30稀釋）。2、加中和試劑（只有檢測HBeAb時才需要）：每孔50ul3、加酶結合物：每孔50ul4、溫育：封板→充分混勻后置37°C水浴30分鐘5、洗滌：棄去反應條孔內液體，用洗滌液注満每孔，放置或振蕩1分鐘，棄去拍干→反復5次（注意：最后一次一定要拍干）6、顯色：每孔先加顯色劑A50ul，再加顯色劑B50ul，混勻后置37°C水浴10分鐘7、中止顯色：每孔加入中止液50ul8、判斷結果：目前十六頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點①目測法：反應孔顏色結果陰性對照透明無色陰性陽性對照黃色陽性樣品黃色？？樣品淺黃色？？樣品透明無色？？HBsAg，HBsAb，HBeAg

目前十七頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點HBeAb，HBcAb反應孔顏色結果陰性對照黃色陰性陽性對照透明無色陽性樣品黃色？？樣品淺黃色？？樣品透明無色？？目前十八頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點②比色法：波長450nm讀取各孔OD值HBsAg，HBsAb，HBeAg樣品OD值/陰性對照OD值≥2.1HBeAb，HBcAb陰性對照OD值/樣品OD值≥2.1（建議雙波長比色（450/630nm）；臨界值的確定請參考實驗指導，不同的試劑盒和檢測原理，臨界值的設定均不同）陽性陽性目前十九頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點ELISA的注意事項標本：內源性（RF、補體、嗜異性抗體等）外源性因素（溶血、細菌污染、保存不當、凝集不全、防腐劑NaN3等）（P229）試劑：試劑質量、批號、是否失效（冰箱溫度）、平衡（37度°C30分鐘）、搖勻加樣：加樣準確、不可太快，避免加在上部和產生氣泡。溫育：溫度（定期觀察與登記）、時間、濕度、封片（不可重復用）洗板：洗滌液用蒸餾水或去離子水現(xiàn)配、防止洗板機堵塞、洗完要拍板。顯色：加試劑時不可重復加和漏加，或加在兩孔之間，不要產生氣泡，及時終止。比色：建議用雙波長（可排除標本濃度、干擾色、電路干擾、板底部劃痕的影響）。結果判定：反應終止后10分鐘內質量控制：內對照、室內質控、室間質評等（全程質控意識）表面抗原陽性結果、灰區(qū)標本、矛盾結果或少見模式均須復查生物安全：試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。目前二十頁\總數(shù)二十一頁\編于十九點常見的檢測模式（臨床意義2）

模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb臨床意義1+-+-+急肝、慢肝活動期、有傳染性2+---+急肝、慢性HBsAg攜帶者3+--++急性HBV感染趨向恢復、慢性HBsAg攜帶者、傳染性弱4---++既往感染、急性HBV感染恢復期、低含量攜帶者