中藥制劑分析含量測定

中藥制劑分析含量測定第一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四【目的要求】掌握中藥制劑含量測定的樣品前處理方法及測定方法的效能指標(biāo)。掌握可見-紫外分光光度法、TLCS、HPLC、GC在中藥制劑分析中的應(yīng)用。熟悉熒光分光光度法及原子吸收光度法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。了解雙波長、三波長、差示、導(dǎo)數(shù)光譜法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。藥物分析學(xué)科第二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理樣品處理的主要作用釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測定的要求一、樣品的粉碎目的——取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備——粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī)※粒度大小合適，全部過篩※防止污染或損失藥物分析學(xué)科第三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理樣品處理的主要作用釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測定的要求一、樣品的粉碎目的——取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備——粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī)※粒度大小合適，全部過篩※防止污染或損失藥物分析學(xué)科第四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理二、樣品的提?。ㄒ唬├浣ú僮鳎簶悠贰芊Q定→置容器內(nèi)→精密加入溶劑→稱定重量→浸泡（12~24h）→稱重→補足重量→測定測定方法：全部測定法：過濾→濾液→蒸干→定容→測定（低濃）部分測定法：過濾→濾液→取若干體積進(jìn)行測定（高濃）優(yōu)缺點及適用范圍：操作簡便，適用于熱不穩(wěn)定的樣品，提取雜質(zhì)較少，但是費時，費溶劑藥物分析學(xué)科掌握每種提取方法的操作、優(yōu)缺點及應(yīng)用范圍第五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理二、樣品的提?。ǘ┗亓魈崛》ú捎没亓餮b置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱提取優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，提取時間短，為0.5～2小時；提取雜質(zhì)較多，不適用于熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分（三）連續(xù)回流提取用索氏提取裝置，少用混合溶劑，其余操作同回流提取法。

優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，所需溶劑少，提取雜質(zhì)較少操作簡便；不適用于受熱易分解的成分。藥物分析學(xué)科第六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理二、樣品的提?。ㄋ模┏曁崛》悠分萌萜髦?，加入提取溶劑，放入超聲振蕩器中進(jìn)行提取

優(yōu)缺點及適用范圍：提取效率高，速度快30min；超聲波可引起化學(xué)成分的改變

（五）超臨界流體提取法（SFE）優(yōu)點：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性高、節(jié)省溶劑、易于自動化，而且可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用藥物分析學(xué)科第七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（1）沉淀法樣品+沉淀劑→沉淀→過濾→濾液→測定→沉淀→重量法或溶解后測定藥物分析學(xué)科處理樣品的核心復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。

第八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（2）蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等最常用的水蒸氣蒸餾法：共水蒸餾法通水蒸氣蒸餾法水上蒸餾法利用鹽析作用，提高蒸餾效果藥物分析學(xué)科第九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（3）液-液萃取法直接萃取法萃取劑的選擇：親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚；弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃?。?-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿利用鹽析作用，提高提取率藥物分析學(xué)科第十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（3）液-液萃取法離子對萃取法

BH++In-

→BH+·In-（水相）→BH+·In-（有機(jī)相）適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃水相酸度的控制離子對試劑的選擇有機(jī)溶劑的選擇藥物分析學(xué)科第十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱操作程序：①柱的活化；②上樣；③清洗；④洗脫。微柱色譜（固相萃?。┲盍希汗枘z、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔硅藻土、離子交換樹脂、鍵合相硅膠C8、C18等

藥物分析學(xué)科第十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，強烈保留堿性化合物洗脫順序：極性小→大氧化鋁：弱堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)酯等類型的化合物分離中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于中性、酸性成分的分離鍵合相硅膠（C18或ODS）：分開脂溶性和水溶性成分洗脫順序：極性大→小藥物分析學(xué)科第十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）大孔樹脂：分為極性（丙烯酰胺聚合物）和非極性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型非極性型（XAD-2等）：分開脂溶性和水溶性成分※使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時還需用酸、堿清洗

聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離硅藻土、纖維素：以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動相的分配色譜藥物分析學(xué)科第十四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子及萃取可離解化合物(弱酸、弱堿藥物)（5）固相微萃?。⊿PME）集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體的樣品前處理新方法藥物分析學(xué)科第十五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（6）消化法--測定中藥制劑中的無機(jī)元素目的：破壞有機(jī)物，使無機(jī)物游離濕法消化：硝酸-高氯酸法：適用于血，尿、組織等生物樣品和含動植物藥制劑的破壞，無機(jī)金屬離子均為高價態(tài)?！鶎s環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。

硝酸-硫酸法：適用于大多數(shù)有機(jī)物的破壞。※與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采有此法。

硫酸-硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞，破壞后得到三價砷或銻。藥物分析學(xué)科第十六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§1樣品的處理三、樣品的分離純化（6）消化法--測定中藥制劑中的無機(jī)元素目的：破壞有機(jī)物，使無機(jī)物游離干法消化：供試品灰分※控制溫度在420℃以下※不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機(jī)樣品的破壞?！绻一煌耆梢约尤胂跛?水（1：3）或稀鹽酸-水（1：3）水浴上蒸干后，繼續(xù)小火灰化藥物分析學(xué)科灼燒灰化(+NaCO3/MgO)第十七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證需驗證的分析項目1.鑒別試驗；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。藥物分析學(xué)科第十八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證一、準(zhǔn)確度是指以測得結(jié)果與真實值之間的接近程度。由于真實值是未知的，故常用回收率試驗來表示。二、精密度是指一種均勻樣品經(jīng)多次取樣重復(fù)分析后，各次結(jié)果之間的符合程度。常用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性藥物分析學(xué)科第十九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證1.重復(fù)性

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次；或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)行評價。2.中間精密度

同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。3.重現(xiàn)性

不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。藥物分析學(xué)科第二十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證三、專屬性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確，專一地測定分析物的能力。四、檢測限檢測限是指在規(guī)定的實驗條件下，分析方法能夠檢測（但不需要定量）樣品中分析物的最低濃度。1．非儀器分析目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2.信噪比法藥物分析學(xué)科第二十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證五、定量限是指在規(guī)定的實驗條件下和具有可接受的精密度和準(zhǔn)確度前提下，分析方法能夠測定樣品中分析物的最低濃度。六、線性七、范圍八．耐用性是指測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的程度為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。衡量方法不受參數(shù)微小變差影響的能力。藥物分析學(xué)科第二十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§2含量測定方法的驗證分析方法效能指標(biāo)的要求1、用于鑒別試驗：只對專屬性、耐用性二項指標(biāo)有所要求，其余均無須要求2、雜質(zhì)測定或制劑中降解物測定：當(dāng)用于定量除檢測限不必要求外，其余七項指標(biāo)均應(yīng)有所要求；用于限度檢查只對專屬性、檢測限、和耐用性有要求。3、用于原料藥中主成分或制劑中有效成分含量測定及溶出度測定，除了檢測限和定量限外，其余均要求。藥物分析學(xué)科第二十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法一、化學(xué)分析法適用于含量較高的成分及無機(jī)成分的測定（一）重量分析揮發(fā)法：如水分測定萃取法：如冰片散中冰片的含量測定沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測定藥物分析學(xué)科第二十四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法一、化學(xué)分析法（二）滴定分析酸堿滴定法：測定生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類

沉淀滴定法銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機(jī)鹵化物四苯硼鈉法：+生物堿→白色沉淀配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：測定鞣質(zhì)、生物堿及Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量氧化還原滴定法：酚類、糖類及礦物藥中Fe、As等藥物分析學(xué)科第二十五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法（一）單波長分光光度法1、吸收系數(shù)法（CHP最為常用）例題左金丸的含測

A=ECL（百分吸收系數(shù)，單位g/100ml）2、對照品比較法

對照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（100±10％）3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法藥物分析學(xué)科第二十六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法（二）計算分光光度法1、雙波長分光光度法法系數(shù)倍率法等吸收點法2、三波長分光光度法3、導(dǎo)數(shù)光譜法討論：計算分光光度法在中藥及其制劑中的應(yīng)用前景藥物分析學(xué)科第二十七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS（一）薄層吸收掃描法光源：氘燈(190-340nm)和W燈(340-900nm※薄層板引起的散射現(xiàn)象（散射系數(shù)SX）→標(biāo)準(zhǔn)曲線（Kubella-Munk曲線）彎曲→校正（曲線校直法和計算機(jī)回歸法）（二）薄層熒光掃描法光源：汞燈(250-580nm)直線式掃描，無需曲線校直藥物分析學(xué)科第二十八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS（三）定量分析方法1、方法學(xué)考察工作曲線：①檢查所選散射參數(shù)SX是否適宜；②考察工作曲線是否過原點，以便確定是用外標(biāo)一點法還是二點法測定；③確定點樣量的線性范圍。

分離度：R≥1.0重復(fù)性考察：RSD≤3%準(zhǔn)確度考察：95%~105%2、定量方法（討論常用定量方法）外標(biāo)法：一點法、兩點法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法內(nèi)標(biāo)法藥物分析學(xué)科第二十九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS健脾丸中熊果酸的含量測定[含量測定]取小蜜丸或重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約4g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，濾過，殘渣用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟粉末狀或低溫干燥后研細(xì)，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時，提取液回收乙醚至干，殘渣用石油醚（30~60℃）浸泡兩次，每次10ml（浸泡約2分鐘），傾去石油醚，殘渣加適量三氯甲烷-無水乙醇（2:3）混合液使溶解，轉(zhuǎn)移至2ml量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄VIB）試驗，精密吸取供試品溶液4ul與6ul，對照品溶液2ul與4ul，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長λS=540nm，λR=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得。本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）計，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。藥物分析學(xué)科第三十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（一）應(yīng)用范圍揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等中藥制劑含水量、含醇量（二）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗理論塔板數(shù)n＝5.54(tR/W1/2)2※最小理論塔板數(shù)，柱長，柱填充、載體性能等有影響分離度R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)※R≥1.5（兩峰完全分離）重復(fù)性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2.0％

(n=5)拖尾因子T=W0.05h/2d1(d1峰極大至峰前沿之間的距離)※1.05≥T≥0.95藥物分析學(xué)科第三十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四樣品沸點范圍柱溫固定相配比300~400℃200~250℃1~5%200~300℃150~180℃5~10%100~200℃各組分的平均沸點2/3左右10~15%氣體等低沸點樣品室溫或50℃下15~25%§3常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇1、固定相的選擇氣固色譜－硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣液色譜－烴類、硅氧烷類、醇類、酯類，特殊固定液（手性）2、柱溫的選擇藥物分析學(xué)科寬沸程樣品：程序升溫法第三十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇3、載氣的選擇H2、He：流速大，柱長，熱導(dǎo)檢測器N2：流速小，氫焰檢測器，電子捕獲檢測器流速：20－80ml/min4、其它條件的選擇進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣、頂空進(jìn)樣（兼有分離分析作用）進(jìn)樣口（汽化室）溫度：樣品的沸點或稍高于沸點，30℃/50℃+T柱≤T汽≤50℃+T沸點檢測室溫度：30℃+T柱≤T檢≈T汽藥物分析學(xué)科第三十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期四§3常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實驗條件的選擇4、其它條件的選擇進(jìn)樣