貝克曼流式細(xì)胞儀

應(yīng)用分類1、膜表面抗原和胞漿內(nèi)蛋白分析2、DNA含量及細(xì)胞周期分析3、定量分析4、細(xì)胞功能分析5、凋亡研究6、細(xì)胞間相互左右7、細(xì)胞分選1.檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群，監(jiān)測(cè)細(xì)胞免疫狀態(tài)2.白血病/淋巴瘤免疫分型3.HLA組織配型及HLA與某些疾病的關(guān)系4.干祖細(xì)胞的定量及成分分析.5.其它:粘附分子;TCR多態(tài)性檢測(cè);腫瘤癌基因及抑癌基因蛋白產(chǎn)物的檢測(cè);細(xì)胞內(nèi)酶;耐藥蛋白的分析等等。

臨床應(yīng)用疾病診斷:為疾病診斷提供直接的或支持診斷的依據(jù)免疫調(diào)節(jié)：細(xì)胞因子/受體的相互作用共刺激分子受體/配體的相互作用

發(fā)病機(jī)理：腫瘤的發(fā)病與機(jī)體的免疫力低下、以及信號(hào)傳遞障礙有關(guān)藥物/疫苗效果的評(píng)價(jià)：腫瘤生物治療的時(shí)機(jī)選擇、以及效果的監(jiān)測(cè)免疫狀態(tài)評(píng)價(jià)：移植、放化療等.細(xì)胞周期分析:在細(xì)胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各個(gè)時(shí)期，DNA的含量隨各時(shí)相呈現(xiàn)出周期性的變化。通過核酸染料標(biāo)記DNA，并由流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，可以得到細(xì)胞各個(gè)時(shí)期的分布狀態(tài)，計(jì)算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解細(xì)胞的周期分布及細(xì)胞的增殖活性。也可利用細(xì)胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行精確的分期：G0、G1、S、G2、M.DNA含量及細(xì)胞周期分析G2MG0G1s0

200

400

600

8001000G0G1sG2MDNAAnalysisDNAcontentCount2N4NNormalCellCycle1.腫瘤的早期診斷。2.腫瘤的良惡性判斷。3.觀察細(xì)胞的增殖狀態(tài)及周期分布。4.療效監(jiān)測(cè)細(xì)胞功能分析

1.吞噬功能試驗(yàn)

2.氧爆發(fā)試驗(yàn)3.根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同將CD4+或CD8+分為介導(dǎo)細(xì)胞免疫的I型細(xì)胞和介導(dǎo)體液免疫的II型細(xì)胞.4.藥物泵的功能檢測(cè)

5.NK細(xì)胞的腫瘤殺傷活性檢測(cè)6.血小板的粘附,聚集功能檢測(cè)樹突狀細(xì)胞分析（DendriticCells,DC)DC是主要的抗原遞呈細(xì)胞，同時(shí)又是重要的先天免疫細(xì)胞，還是具有免疫調(diào)控功能的一個(gè)細(xì)胞群，沒有發(fā)現(xiàn)特異性的抗原標(biāo)記DC研究的主要內(nèi)容包括直接分析計(jì)數(shù)、體外誘導(dǎo)檢測(cè),一般分為兩群－PDC,MDC當(dāng)前DC檢測(cè)的方法：1）Lin-,CD11c,CD123,同時(shí)可能表達(dá)CD80,CD86,CD83,DR等2）利用BDCA1,2,3,4對(duì)外周血或其它組織DC進(jìn)行分析3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123T細(xì)胞分析相對(duì)計(jì)數(shù)－淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量檢查項(xiàng)目和意義疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫病降低增高降低降低AIDS降低嚴(yán)重降低增高降低SARS降低降低降低降低降低慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化降低正?；蛟龈呓档徒档湍[瘤降低降低增高降低降低CD4細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)對(duì)AIDS病人的診斷、療效和預(yù)后有重要的指導(dǎo)意義，一般認(rèn)為CUTOFF值為200/ul.絕對(duì)計(jì)數(shù)是加入濃度已知的標(biāo)準(zhǔn)微球與標(biāo)本一起測(cè)定，流式細(xì)胞儀控制軟件在設(shè)置后能自動(dòng)計(jì)算出濃度對(duì)任何細(xì)胞群體都可以進(jìn)行絕對(duì)計(jì)數(shù)Th1Th2細(xì)胞因子分泌細(xì)胞測(cè)定根據(jù)產(chǎn)生的細(xì)胞因子的類型和生物學(xué)功能,人的ＣＤ4+Ｔ細(xì)胞可以分為Ｔｈ1、Ｔｈ2Ｔｈ1細(xì)胞產(chǎn)生ＩＬ2、ＩＬ12、ＩＦＮγ、ＴＮＦβ等細(xì)胞因子,主要參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)、遲發(fā)性過敏反應(yīng),并在清除病毒等細(xì)胞內(nèi)致病因子方面起著重要作用Ｔｈ2細(xì)胞分泌ＩＬ4、ＩＬ5、ＩＬ6、ＩＬ10、ＩＬ13等細(xì)胞因子,主要促進(jìn)體液免疫反應(yīng),中和胞外病原體相應(yīng)地，CD8+T細(xì)胞也可以分為Tc1和Tc2Th1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長(zhǎng)和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理損傷。Th2細(xì)胞：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長(zhǎng)、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。Th1Th2檢測(cè)Tips一定要確定T細(xì)胞是否已經(jīng)活化，細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)阻滯是否成功，胞膜打孔是否有效一定要用胞漿內(nèi)同型對(duì)照（特別是FITC標(biāo)記時(shí)），以便分別部分弱表達(dá)的細(xì)胞因子。TETRAMER抗原遞呈細(xì)胞（APC）攜帶抗原片段通過與TCR復(fù)合物結(jié)合，在APC和T細(xì)胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T細(xì)胞并產(chǎn)生細(xì)胞免疫效應(yīng)。MHC-四聚體染色技術(shù)用于抗原特異性T細(xì)胞分析的原理在于體外模仿上述抗原遞呈的過程來實(shí)現(xiàn)對(duì)特異性T細(xì)胞的鑒定，通過流式細(xì)胞儀這種高通量分析儀器對(duì)標(biāo)本中這群細(xì)胞進(jìn)行分析

四聚體技術(shù)的優(yōu)勢(shì)是：可以對(duì)特異性免疫細(xì)胞進(jìn)行定量；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)可以快速測(cè)定大量細(xì)胞，可以同時(shí)進(jìn)行其它表面染色，可以直接用外周血測(cè)定而不需要培養(yǎng)；四聚體染色不會(huì)殺傷細(xì)胞，因此染色后的細(xì)胞可以進(jìn)行分選或其它功能分析；四聚體對(duì)所有的特異性T細(xì)胞都能夠結(jié)合，而不僅僅是對(duì)有功能的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。不同廠家的MHC四聚體產(chǎn)品不太一樣：貝克曼庫(kù)爾特公司創(chuàng)造性地構(gòu)建和表達(dá)了MHC分子α3鏈的區(qū)域突變的蛋白（iTAg），能降低其與非特異性T細(xì)胞結(jié)合，大大提高了特異性。并且將MHC四聚體直接標(biāo)記熒光，和常用的抗原多肽負(fù)載后整體商品化，也有單獨(dú)的MHC分子（iTAg）單獨(dú)出售，極大方便了研究者CD藝4C環(huán)D2勇5Tr梢eg調(diào)控張性T細(xì)胞幕的主確要功盒能是挺抑制扣機(jī)體鐵免疫嫁功能蛛，太拳強(qiáng)則執(zhí)免疫寨耐受灰，太頃弱會(huì)技引起育自身恒免疫督反應(yīng)調(diào)控鳴性T細(xì)胞朽調(diào)節(jié)泊抗原信遞呈景細(xì)胞春對(duì)抗但原的會(huì)遞呈調(diào)控險(xiǎn)性T細(xì)胞盤的表盲型是CD飄4+浙CD立25雷br施ig帖ht欠，逐漸服發(fā)現(xiàn)銹越來侄越多籃的其房誠(chéng)它分伴子可賭能能陳夠更醋精確滔限定園（eg詠.F危OX孤-1期?)CD諸25也是牛免疫壞細(xì)胞們晚期靜活化照的標(biāo)喂記，性但表改達(dá)的狡平均滾熒光留強(qiáng)度遣不足亦夠強(qiáng)非特洽異性劇的先慮天免用疫細(xì)品胞δＴ細(xì)匹胞:負(fù)占外幼周血T細(xì)胞位的1弄0％蜂以下雀，非瓣抗原膚依賴?yán)研兔忏曇呒?xì)渡胞，廳在傳請(qǐng)染病溪、腫續(xù)瘤病趕人外沉周血紛數(shù)量穗增加栽，表需達(dá)CD新3量較馳普通T細(xì)胞設(shè)多NK細(xì)胞塊：占籮外周識(shí)血淋梢巴細(xì)絮胞8責(zé)－2占5％供，傳拖染病撈和腫懇瘤病磁人數(shù)障量偏牲低。NK細(xì)胞悠可以糾根據(jù)NK停R的不仰同而號(hào)分類病，丙培型肝歐炎的染發(fā)生歡和預(yù)乎后可白能與NK細(xì)胞研的表趨型相依關(guān)DC勒：分布管與淋滅巴組柿織和氧外周礙血，辱為非主成熟石狀態(tài)遲，遇笛到相早應(yīng)的粗抗原攔后主移要分舒泌IF模N-宇al撐ph非a來發(fā)挑揮左份右其它意重要妹分子紹的流候式分烈析的遠(yuǎn)意義粘附倒分子典：物扒種間蕉高度蜘保守資，與剩細(xì)胞竟間通皂訊，呀干細(xì)扮胞HO避MI牢NG恨，腫瘤櫻的發(fā)劑生可觸能有染很重兔要的田關(guān)系添，如CD經(jīng)11滑C/丈CD燙18姿-C陰D5矩4與DC成熟受和遷怎移有茫關(guān)；CD聲20滾9-劑CD陽10僑2與抗棒原遞傳呈有謝關(guān)CD補(bǔ)26咽:移植迅后造誕血干盜細(xì)胞衛(wèi)表達(dá)藍(lán)可能牽不利小于該疏細(xì)胞疫的ho籌mi廢ng萍，有證趁據(jù)表國(guó)明抑翼制造犧血干押細(xì)胞掉有利倉(cāng)用移聰植成渾功流式排細(xì)胞澡術(shù)在扁移植疼中的輕應(yīng)用移植源配型資和群?jiǎn)T體反的應(yīng)性頌抗體淹的檢需測(cè)熒光川示蹤鐮標(biāo)記房誠(chéng)的移椅植細(xì)茫胞：CF蛙SE是一眠個(gè)確謹(jǐn)定的潔熒光脅標(biāo)記偵物，伯開發(fā)沈其它語穩(wěn)定尼的熒鍋光素帽應(yīng)該逢更有禿幫助流式籌細(xì)胞廟儀分目選為達(dá)改到最汽高的哲分選登效率棵，實(shí)愉用中穿最好游先用預(yù)磁珠超分選申系統(tǒng)谷進(jìn)行巖初步順分選活細(xì)間胞分振選非扁常有欠用流式解細(xì)胞努術(shù)在跨生物疾醫(yī)學(xué)僚研究傷的新文方向細(xì)胞尾多態(tài)逗性分溉析：詳受體粒、抗仁原折莖疊、HL園A等，線包括CX口CR沈4,蛛CC胖R5誕,D亡C-拼SI房誠(chéng)GN杯(與AI姜DS易感曬性有所關(guān)）晨，NK框R(中國(guó)樸科大侍研究鼓領(lǐng)先戶項(xiàng)目喚）信號(hào)渾傳導(dǎo)勢(shì)（實(shí)恐際主信要為的胞漿達(dá)內(nèi)磷拖酸化透及去食磷酸址化蛋燥白的捐檢測(cè)仍）新型含熒光愛特異顫性探償針：鹿胞內(nèi)繁病原隨體檢解測(cè)、業(yè)轉(zhuǎn)錄輪因子退檢測(cè)給、細(xì)汗胞器啊或細(xì)危胞生貝命活砌動(dòng)指蜜標(biāo)的匹新熒收光素軌的應(yīng)搜用利用況分選探的細(xì)東胞進(jìn)姐行體跨內(nèi)和愚體外倚功能修研究與其另它定耍位性彩的熒橡光設(shè)羨備聯(lián)付合使靈用（扁如MP囑E,桂CO外NF朝OC厲AL馳,I年C1母00等）Ce錘ll芹L毫ab潑I俊C物10騾0Co眉mp熟le籠te系d崇at炊a尾mi伯ni鞭ng碼a沾nd德a州na評(píng)ly愧si介sFl凳ex惰ib登le鴿A輝na射ly介si犁sPl快ug衫-i曬n秤ar周