蘇教教學(xué)課件微生物的培養(yǎng)基一課件

第一節(jié)第一課時微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動物特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單,多數(shù)個體十分微小(<o.1mm)的生物的總稱。通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用.

原核

原生生物界真菌界病毒界真核病毒

SARS病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉

了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。

一、課題目標(biāo)：

掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點和難點：三、技能目標(biāo)：（2）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一基礎(chǔ)知識:（3）按培養(yǎng)基的功能分：P12基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基·半合成培養(yǎng)基閱讀課本P8第三段分別說出它們的優(yōu)點、缺點。各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？答：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。

注：另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。

二無菌技術(shù)：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。閱讀P8---P9說出消毒和滅菌有何不同？1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(1)常用消毒的方法：1、灼燒滅菌:2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)常用滅菌的方法：分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑高效消毒法殺滅一切致病微生物紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等中效消毒法殺滅除芽孢外的致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚類低效消毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子無菌技術(shù)：常蠅識1．脫無菌疾技術(shù)脂包括咱：（1）對溪實驗司操作噸空間楚、操向作者疤的衣乘著和沈手進(jìn)東行清潔桶和消恰毒；（2）將柿培養(yǎng)配器皿遭、接絲式種用竿具和治培養(yǎng)啦基等奴器具擱進(jìn)行滅菌；（3）為蠟避免傘周圍瘦微生應(yīng)物污軋染，索實驗頭操作舒應(yīng)在酒精燈燈火劉焰附暖近旁進(jìn)哪行；（4）避妙免已耍滅菌罪處理盆的材惜料用爪具與周圍酸物品相接壁觸。2．樹消毒悲方法衫：（1）日扛常生淹活經(jīng)嘩常用冷到的甘是煮沸消毒捉法；（2）對計一些巷不耐偏高溫妹的液乒體，儲則使?jié)秤冒褪舷臼谭ǎǚ鹱骱喕榕浣B）槽；（3）對降接種懇室、平接種咽箱或甩超凈份工作棕臺首徑先噴族灑石炭筆酸或加煤酚敗皂等溶孔液以塔增強(qiáng)學(xué)消毒德效果隸，然淡后使深用紫外稿線進(jìn)行版物理甲消毒美。（4）實才驗操鑄作者靈的雙胡手使排用酒精進(jìn)行榆消毒沒；（5）飲耕水水羽源用氯氣進(jìn)行哀消毒爭。3．滅詳菌方斜法：（1）接析種環(huán)壞、接肉種針注、試怎管口著等使吸用灼燒滅菌糕法；（2）玻亮璃器獄皿、布金屬田用具怒等使救用盼干熱疾滅仗菌法例，所游用器想械是干熱樂滅菌豎箱；（3）培欠養(yǎng)基扒、無死菌水警等使纏用趨高壓票蒸汽滅菌紛法，所窩用器畜械是高壓字蒸汽漫滅菌膜鍋。（4）表齒面滅病菌和云空氣竹滅菌救等使舍用紫外者線滅菌瓣法，國所用蠅器械廚是紫外業(yè)燈。三、貫實驗否操作1.制備逮牛肉伴膏蛋田白胨缸培養(yǎng)浸基（秧用于桐培養(yǎng)扣細(xì)菌金）【補(bǔ)充】培養(yǎng)現(xiàn)基的矮配制暫原則態(tài)：①目的悶要明夾確：根據(jù)芝培養(yǎng)梢的微拍生物種種類牛、培睡養(yǎng)的析目的尼等確門定培洲養(yǎng)基讓的類喝型和繼配制習(xí)量。②營養(yǎng)暈要協(xié)言調(diào)：培養(yǎng)掘基中鋸各種寶營養(yǎng)跟物質(zhì)比的濃湊度和雖比例餐要適蹄宜。戀例如夾：碳暢氮比4∶兆1時，脖谷氨斤酸棒挺狀桿竟菌大診量繁拿殖而涼產(chǎn)生略谷氨披酸少僑；碳恰氮比視為3∶濱1時，專菌體牽繁殖瘋受抑秒制而塵谷氨嚷酸合臺成量材大增趟。③pH要適持宜：細(xì)耍菌培梁養(yǎng)基pH中性緞或偏松堿性飽，霉悼菌培吉養(yǎng)基劉呈酸彈性。1．配職制：跳計算、稱量、熔化2．調(diào)咐節(jié)pH：姜用3%的HC強(qiáng)I/撫Na轎OH調(diào)節(jié)pH際7．0-負(fù)--殲7．23．分程裝：誼分裝竹過程川中注義意不尿要使毯培養(yǎng)兼基沾在嬸管口疤或瓶隆口上施，以嘩免沾班污棉畏塞而引喚起污渾染。嘩分裝炊三角茄燒瓶動的量以不齊超過付三角釣燒瓶乞容積陸的一膠半為飽宜。4．包滋扎：操作欲步驟:5．滅員菌:將50夠ml培養(yǎng)文基用玻產(chǎn)棒轉(zhuǎn)莊移至余三角繼錐瓶遼中，武塞上汗棉花笛塞，貢包上雷牛皮問紙，劍再放故入高壓湊蒸氣滅菌把鍋，灣在壓當(dāng)力為10獸0k準(zhǔn)Pa、溫餅度為12酸1℃，滅救菌15～30介mi劑n。將培養(yǎng)驚皿用舊味報紙劣包裹唇，放尺入干熱氧滅菌箱內(nèi)遍，在16執(zhí)0～17舍0彈℃下滅盡菌2h。6．倒驗平板:待培幣養(yǎng)基冷卻嘴到50桶℃左右豬時，剪在酒謀精燈幫附近搞倒平俘板。2d后觀島察平接板，枝無雜顯菌污籃染才娘可用孩來接逆種.7．無錄菌檢箭查：將滅誼菌的捧培養(yǎng)團(tuán)基放詳入37葛℃的溫格室中宣培養(yǎng)24映—4校8小時嚇，以剝檢查平滅菌堂是否如徹底投。倒平位板:菌種腫的保拆存1、臨寬時保隊藏：似接種竭到固乒體斜摩面培功養(yǎng)基慢，菌熔落長闖成后討置于4℃冰箱挖保存己。2、長獲期保默存：抓甘油帝冷凍聽管藏翠法1.培養(yǎng)起基滅奔菌后氣，需別要冷落卻到50御℃左右彈時，成才能放用來鼻倒平陜板。封你用我什么豎辦法稀來估泡計培古養(yǎng)基繡的溫晃度？問題效討論答：可以起用手日觸摸守盛有姓培養(yǎng)謊基的蘿錐形把瓶，妻感覺征錐形它瓶的驗溫度假下降殿到剛急剛不輔燙手賴時，享就可糞以進(jìn)類行倒獵平板穿了。2.為什午么需蕩要使帆錐形駛瓶的膀瓶口承通過刑火焰撲？答：雞通過歌灼燒僻滅菌大，防渴止瓶利口的雄微生途物污桃染培鞭養(yǎng)基蒜。注意:3.平板掠冷凝膽后，尺為什權(quán)么要刑將平憶板倒撤置？4.在倒茂平板單的過擺程中懂，如哨果不蒙小心治將培淺養(yǎng)基仁濺在蚊皿蓋晨與皿念底之俯間的蹈部位船，這卸個平脖板還星能用朵來培曉養(yǎng)微姥生物控嗎？粉為什班么？答：臉平板殃冷凝笑后，厲皿蓋書上會替凝結(jié)千水珠沈，凝均固后歷的培歐養(yǎng)基產(chǎn)表面蕩的濕筒度也女比較來高，牛將平約板倒沾置，漏既可慨以使美培養(yǎng)松基表鞭面的拖水分段更好榜地?fù)]瘦發(fā)，聯(lián)又可緩以防愉止皿苦蓋上位的水頑珠落財入培眾養(yǎng)基耐，造股成污裙染。答：鼠空氣縣中的義微生擴(kuò)物可盟能在塔皿蓋慎與皿確底之架間的初培養(yǎng)剖基上耐滋生漿，因南此最辜好不輪要用貌這個為平板嫩培養(yǎng)卻微生邀物。選擇盤培養(yǎng)蕉基加入青霉斗素的培跨養(yǎng)基:分離秋酵母苦菌、疤霉菌壩等真博菌加入限高濃盞度食鹽的培吉養(yǎng)基:分離聞金黃鵝色葡楚萄球占菌不加殃氮源乘的無氮培養(yǎng)傭基:分離柜固氮胃菌不加慕含碳逢有機(jī)閣物的無碳培養(yǎng)閱基:分離偶自養(yǎng)顛型微幅生物加入青霉舒素等葵抗生驗素的培便養(yǎng)基:分離巧導(dǎo)入席了目線的基胃因的化受體愁細(xì)胞加入氨基愛喋呤月、次目黃嘌如呤和泛胸腺瓦嘧啶踩核苷的培妙養(yǎng)基:分離位雜交腸瘤細(xì)杠胞2、純團(tuán)化大光腸桿裹菌:接種秤方法施有：平板持劃線送法和茂稀釋皇涂布叢平板硬法平板抵劃線漆法:通過哥接種敗環(huán)在鐘瓊脂鏈固體齊培養(yǎng)朋基表姿面連震續(xù)畫罩線的形操作,將聚瓣集的及菌鐘嚴(yán)逐步槽稀釋羊分散恐到培怖養(yǎng)基貢的表竭面.在數(shù)植次畫貴線后,可以港分離蔽到由襪一個繞細(xì)胞揀繁殖哨而來州的肉絡(luò)眼可雖見的蒸子細(xì)叛胞群孝體,這就術(shù)是菌臉落.微生亮物的苦接種蛙技術(shù)劃線件后策培坊養(yǎng)一腔段時角間后微生客物的柴恒溫阿培養(yǎng)微生釋物的窩恒溫旨培養(yǎng)問題佛討論1.為什隊么在榨操作培的第趟一步叉以及珠每次傳劃線銀之前倚都要做灼燒串接種李環(huán)？請在劃戲線操千作結(jié)速束時賴，仍熟然需叛要灼覽燒接充種環(huán)獸嗎？迫為什鋸么？答：仙操作瓜的第漂一步揭灼燒帥接種護(hù)環(huán)是啞為了蛾避免牛接種冤環(huán)上囑可能勤存在旨的微汗生物榮污染樹培養(yǎng)認(rèn)物；華每次策劃線何前灼任燒接謹(jǐn)種環(huán)商是為縣了殺寶死上嗚次劃廊線結(jié)取束后休，接搏種環(huán)載上殘揪留的抹菌種習(xí)，使伶下一歐次劃踢線時弄，接務(wù)種環(huán)吩上的姜菌種別直接斤來源尼于上削次劃弄線的旦末端曠，從鏡而通途過劃睛線次海數(shù)的劣增加蹈，使授每次腎劃線緞時菌養(yǎng)種的姿數(shù)目碼逐漸騰減少攏，以五便得背到菌塑落。競劃線愉結(jié)束嘉后灼慨燒接倆種環(huán)告，能踢及時嘉殺死快接種山環(huán)上糾殘留暑的菌谷種，午避免松細(xì)菌上污染隆環(huán)境雀和感燦染操媽作者姐。2.在灼匪燒接匙種環(huán)對之后碼，為身什么所要等尸其冷充卻后匠再進(jìn)前行劃客線？答：寺以免拒接種著環(huán)溫遍度太化高，知殺死盒菌種刮。3.在作范第二贈次以躲及其焦后的猾劃線篇操作愛時，遞為什冬么總泊是從勉上一鞭次劃電線的裙末端縱開始已劃線？答：嚼劃線異后，賤線條境末端虎細(xì)菌向的數(shù)局目比總線條略起始漠處要仇少，弄每次疤從上俘一次箏劃線恰的末咱端開桃始，暢能使禿細(xì)菌瞞的數(shù)捕目隨令著劃淺線次詢數(shù)的今增加侵而逐圣步減粘少，船最終看能得追到由剛單個孟細(xì)菌辣繁殖皮而來桑的菌倡落。四、地課題少成果撞評價（一娛）培戶養(yǎng)基要的制抽作是毫否合截格如果棒未接巨種的筆培養(yǎng)挽基在擴(kuò)恒溫皺箱中下保溫1～2增d后無鍵菌落陣生長主，說纏明培器養(yǎng)基刻的制望備是賭成功駕的，小否則烏需要她重新秘制備支。（二織）接飽種操脖作是糠否符恩合無京菌要津求如果微培養(yǎng)哀基上騰生長幫的菌良落的黨顏色元、形藏狀、稍大小挖基本駁一致浴，并結(jié)符合柄大腸嗎桿菌勵菌落怎的特耕點，磁則說熔明接諷種操村作是踢符合際要求圈的；本如果戚培養(yǎng)仁基上佛出現(xiàn)兼了其脹他菌柱落，意則說追明接擾種過處程中兆，無立菌操漂作還貪未達(dá)紗到要閣求，獸需要慈分析煎原因岸，再淋次練揉習(xí)。（三?。┦撬]否進(jìn)映行了舅及時慰細(xì)致鄙的觀卵察與拒記錄培養(yǎng)12儉h與24溫h后的華大腸宴桿菌縮慧菌落值的大亡小會婦有明透顯不鍋同，休及時訪觀察執(zhí)記錄綁的同壟學(xué)會胸發(fā)現(xiàn)捉這一飼點，梅并能汁觀察透到其譽(yù)他一皺些細(xì)好微的鼠變化頌。這廊一步按的要賞求主求要是欺培養(yǎng)刷學(xué)生因良好鎖的科污學(xué)態(tài)丟度與希習(xí)慣座。本課腎題知鞭識小市結(jié):【典例擔(dān)解析】例1．關(guān)見微生煌物營育養(yǎng)物泉質(zhì)的流敘述遙中，踩正確昂的是:A.是碳喪源的正物質(zhì)啞不可寨能同兵時是企氮源B.凡碳貧源都類提供敵能量C.除水枕以外統(tǒng)的無罩機(jī)物久只提逗供無秤機(jī)鹽D.無機(jī)屋氮源艱也能弊提供涂能量解析日：不同行的微盤生物島，所中需營趣養(yǎng)物硬質(zhì)有頁較大囑差別昌，要肥針對舍微生曲物的嘉具體醬情況勒分析麻。對鹽于A、B選項鑼，它脫的表換達(dá)是揪不完投整的套。有盈的碳洲源只訴能是啞碳源莫，如告二氧笑化碳勤；有彩的碳科源可堆同時煌是氮擾源，殿如NH4HC尊O3；有策的碳命源同若時是亮能源芽，如椅葡萄本糖；悄有的慶碳源吃同時在是氮凱源，侮也是柳能源湊，如持蛋白疼胨。蜻對于C選項陽，除鎮(zhèn)水以饑外的織無機(jī)踩物種貼類繁禾多，孤功能致也多燒樣。桃如二哥氧化杏碳，努可作望為自鋒養(yǎng)型編微生就物的襯碳源殼；Na今HC另O3，可檢作為援自養(yǎng)客型微脫生物鍵的碳逮源和薪無機(jī)仍鹽；辟而Na頂Cl則只儲能提趁供無逮機(jī)鹽錢。對屋于D選項畜，無捷機(jī)氮句源提們供能圓量的沉情況荒還是路存在街的，燒如NH3可為斜硝化繡細(xì)菌則提供坦能量冬和氮慨源。答案爆：D例2．下敵面對捆發(fā)酵腹工程仙中滅捎菌的厚理解不正秧確的是:A.防止倦雜菌怎污染B.消滅垮雜菌C.培養(yǎng)店基和報發(fā)酵寄設(shè)備辮都必征須滅勞菌D.滅菌也必須斥在接川種前答案理：B解析驚：滅菌做是微斥生物胞發(fā)酵怨過程餃的一敞個重綁要環(huán)摔節(jié)。A說的籮是滅色菌的堂目的旱，因物為發(fā)胸酵所柄用的貪菌種欄大多斥是單抽一的邀純種立，整格個發(fā)炎酵過隆程不作能混訓(xùn)入其儀他微道生物翠（雜暗菌）更，所慘以是哨正確號的；B是錯閉誤的易，因配為滅凡菌的狐目的響是防夠止雜夠菌污止染，季但實秘際操訪作中鉤不可俱能只遮消滅營雜菌蜓，而稀是消系滅全樸部微雪生物乖。C是正哲確的淺，因性為與吃發(fā)酵匹有關(guān)順的所汽有設(shè)嘴備和走物質(zhì)息都要浮滅菌擊；發(fā)界酵所鬼用的鍵微生寸物是扁滅菌茅后專慣門接防種的辰，滅揀菌必游須在冠接種迎前，干如果哥接種痰后再逝滅菌皆就會狼把所坑接菌旱種也默殺死紋。編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例3．右?guī)П硎谴耗澄⑺┥锿囵B(yǎng)丹基成盼分，蓮請據(jù)閑此回榆答：（1）右窗表培驗養(yǎng)基生可培六養(yǎng)的穴微生飯物類鐮型是（2）若啊不慎搜將過矩量Na琴Cl加入說培養(yǎng)勾基中敢。如不些想浪鵲費(fèi)此烈培養(yǎng)暑基，俗可再朽加入.用于跌培養(yǎng)炎金黃域色葡憐萄球潛菌.自養(yǎng)著型微鑒生物含碳奔有機(jī)慮物（3）若基除去情成分闊②，闖加入犬（CH2O），濁該培燙養(yǎng)基熊可用右于培露養(yǎng)。（4）表逝中營拖養(yǎng)成鍵分共影有類。（5）不逼論何麻種培娘養(yǎng)基溝，在煎各種斜成分蠻都溶懷化后銜分裝賭前，渾要進(jìn)殃行的算是。（6）右臟表中征各成祥分重嗽量確負(fù)定的巾原則梢是。（7）若橫右表證培養(yǎng)干基用乏于菌效種鑒畜定，智應(yīng)該席增加胡的成景分是。固氮愿微生坦物3調(diào)整pH依微巧生物尺的生窄長需雷要確持定瓊脂殘（或爹凝固