蛋白質(zhì)工程緒論

PROTEIN

ENGINEERING蛋白質(zhì)工程21.全球生物制藥的市場(chǎng)快速增長(zhǎng)，目前已達(dá)1970億美元，其中重組蛋白和抗體類藥物占絕大部分。2.截止到2012年，在歐洲或美國(guó)獲準(zhǔn)上市的430多種生物藥品中，超過300種是重組蛋白和抗體藥物。3.據(jù)統(tǒng)計(jì)，截止2013年，超過900種基于蛋白和多肽類的藥物正處于研究和開發(fā)階段，用于治療超過100種疾病。生物制藥與蛋白質(zhì)工程具備的知識(shí)基礎(chǔ)：分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因工程等蛋白質(zhì)工程本課程共48學(xué)時(shí)：閉卷考試+課堂表現(xiàn)3課程的主要任務(wù)：1．掌握蛋白質(zhì)工程的基本原理、基礎(chǔ)知識(shí)、基本技能2．熟悉蛋白質(zhì)工程研究的主要方法和技術(shù)3．了解蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域的研究方向與最新科技成果蛋白質(zhì)工程4第一章緒論第二章蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)第三章蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)第四章蛋白質(zhì)的修飾和表達(dá)第五章蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析第六章蛋白質(zhì)的分離與純化第七章蛋白質(zhì)組學(xué)與生物信息學(xué)第八章蛋白工程的應(yīng)用蛋白質(zhì)工程5緒論教學(xué)內(nèi)容：蛋白質(zhì)工程的基本概念蛋白質(zhì)工程的產(chǎn)生蛋白質(zhì)工程的研究?jī)?nèi)容蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用及意義6一、蛋白質(zhì)工程的概念工程化：理念－設(shè)計(jì)－制造－功能實(shí)現(xiàn)

以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過化學(xué)、物理和分子生物學(xué)的手段進(jìn)行基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類對(duì)生產(chǎn)和生活的需求。7蛋白質(zhì)工程是指通過蛋白質(zhì)化學(xué)、蛋白質(zhì)晶體學(xué)和動(dòng)力學(xué)的研究，獲取有關(guān)蛋白質(zhì)物理和化學(xué)等各方面的信息，在此基礎(chǔ)上利用生物技術(shù)手段對(duì)蛋白質(zhì)的DNA編碼序列進(jìn)行有目的的改造并分離、純化蛋白質(zhì)，從而獲取自然界沒有的、具有優(yōu)良性質(zhì)或適用于工業(yè)生產(chǎn)條件的全新蛋白質(zhì)的過程。被稱為“第二代基因工程”

蛋白質(zhì)工程的概述8二、蛋白質(zhì)工程的誕生1983年，美國(guó)生物學(xué)家Ulmer博士在《Science》上發(fā)表了以“ProteinEngineering”為題的專論，首次明確提出蛋白質(zhì)工程的概念，標(biāo)志著蛋白質(zhì)工程的誕生。Ulmer,K.M.(1983)“ProteinEngineering”,Science,219:666-671.

Theprospectsforproteinengineering,includingtherolesofx-raycrystallography,chemicalsynthesisofDNA,andcomputermodellingofproteinstructureandfolding,arediscussed.

---Deliberatedesignandproductionofproteinswithnoveloralteredstructureandproperties,thatarenotfoundinnaturalproteins.9比較1：新蛋白的產(chǎn)生蛋白質(zhì)工程產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)（工程）自然界中產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)（進(jìn)化）都是產(chǎn)生了變異，但蛋白質(zhì)工程速度比自然進(jìn)化快10基因工程蛋白質(zhì)工程相同點(diǎn)都要改造基因，都屬于分子水平產(chǎn)生的基因（型）無(wú)新基因（型）有新基因（型）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)原有的新的聯(lián)系蛋白質(zhì)工程以基因工程為基礎(chǔ)，是基因工程的應(yīng)用和延伸比較2：基因工程和蛋白質(zhì)工程11比較3：酶工程與蛋白質(zhì)工程的區(qū)別

酶工程：將酶所具有的生物催化作用，借助工程學(xué)的手段，應(yīng)用于生產(chǎn)、生活、醫(yī)療診斷和環(huán)境保護(hù)等方面的一門科學(xué)技術(shù)。酶工程的重點(diǎn)在于對(duì)已存酶的合理充分利用和大量制備。蛋白質(zhì)工程：重點(diǎn)則在于對(duì)已存在的蛋白質(zhì)分子的改造。隨著蛋白質(zhì)工程的發(fā)展，其成果也會(huì)應(yīng)用到酶工程中，使酶工程成為蛋白質(zhì)工程的一部分。12二、蛋白質(zhì)工程的產(chǎn)生與發(fā)展為什么要進(jìn)行？（需求）如何能進(jìn)行？（支撐條件）何時(shí)崛起？13

需要是創(chuàng)新的第一動(dòng)力，需求是發(fā)明創(chuàng)造的源泉和方向，而科學(xué)的知識(shí)是發(fā)明創(chuàng)造的工具。14medication1、DEMANDS蛋白質(zhì)藥物的穩(wěn)定性半衰期不良反應(yīng)免疫原性15Ca張ta犬ly布st間f區(qū)or劫i聞nd右us筋tr引ie醫(yī)sDE置MA愛ND妙S熱穩(wěn)戴定性化學(xué)分穩(wěn)定替性壓力偷穩(wěn)定昨性催化哭效率16Ag扒ri卷cu坊lt腹ur鹿eDE島MA蛙ND熱S生物緞學(xué)活配性穩(wěn)定總性Co厚w-霞He聞nr損y寨fr斷om盼R波os笨li稈n家In頁(yè)st茄it味ut內(nèi)eMi矛lk步w擁it藏h鑒hi店gh溜c牌on遙ce管nt銅ra形ti周on勾o糕f雷a1械-a首nt扯it亦ry記ps鄰in17Fr餐an感ci殲s怪Cr司ic輛k,晝J叮am勇es者W慰at售so展n,約1胞96寄219永68Ro摸be褲rt隸H赤ol沈le沒y,即Go姐bi通nd往K僵ho俱ra對(duì)na隙,敬Ma鞭r(nóng)s延ha屢ll紅N瓦ir恢en華be訓(xùn)rg19漁33趁T衰ho寇ma熔sHu甜ntMo申rg凡an182、生種物技修術(shù)的低發(fā)展We嚼rn酸er白A凈rb嗽er羅,佩19唯78欲,思re慘st討ri串ct內(nèi)io擔(dān)n賴en暖zy痛me符sMi城ch臉ae勇l跪Sm侄it首h,送19璃93掘,股Po賴in決t齡mu歪t(yī)a斷ti芹onFr柿ed聲er付ic圣k斧Sa徒ng沃er架,雙19業(yè)80共,摟DN餅A屋Se襯qu對(duì)en越ci舊ngSe感ve父ro呢O違ch熱oa繼,陶19譜59飯,飯Sy頃nt扮he傅si崇s湖of膽R尾NAKa先ry階B壯.孫Mu廢ll悟is抄,熔19甲93攤,賭PC總R19Ge疼ra壯ld葵M僑.旋Ed軍el己ma蠶n,論19猾72稿,河An踢ti臺(tái)bo考dy橋s送tr滾uc菌tu殼reFr廚ed桃er針ic芝k羊Sa歷ng攻er做,依1貿(mào)95逢8,消S齊tr渾uc屈tu英re許o谷f(wàn)滋in幕su誕li館nBr敗uc正e斷Me份rr稿if野ie該ld司,奧19遞84贈(zèng),駐Pe拉pt滾id鍬e隱Sy葵nt馬he某si奇s20Jo長(zhǎng)hn派B朗.俗Fe晃nn江,達(dá)Ko售ic符hi電T廉a(chǎn)n濕ak翠a,粥K朽ur策t呈Wü教th北ri盼ch債,初2淘00勢(shì)2,拼M冊(cè)as說(shuō)s搶an盲d仗N(yùn)M荷RHe抱rb本er腹t駛A.喝H返au巡壽pt伙ma梯n,鬧J券er仇om摩e蠢Ka蔑rl寇e,兵1隱98左5,勾X燥-R凝ay撤C路ry眉st灘al21蛋白傾質(zhì)工評(píng)程誕劇生的?；A(chǔ)1）新謎的克拔隆技資術(shù)，貧特別躁是完艷整的cD畏NA克隆唯技術(shù)謎；2）快另速測(cè)吸定DN揚(yáng)A序列翁測(cè)定刑；3）從DN蘆A序列聾推算愉蛋白立質(zhì)順及序的學(xué)較好葉的計(jì)載算機(jī)每程序違；4）蛋擋白質(zhì)柱順序幣數(shù)據(jù)投庫(kù)的榨建立氏，使財(cái)一級(jí)導(dǎo)結(jié)構(gòu)等相似辣的蛋師白能禮被很志快地屢鑒定傭出來(lái)與，并化由此拿研究正其功測(cè)能上沾的相房誠(chéng)似性蕉；5）對(duì)差原核頸生物徑和真躁核生遼物基拍因表墨達(dá)調(diào)平控的仿進(jìn)一怪步深貿(mào)入了溪解；6）用餓基因饑體外毛誘變勇的化貌學(xué)、梅酶學(xué)趟和合找成技悼術(shù)的秘進(jìn)展恥；7）X光晶投體學(xué)晨的進(jìn)姨展，裕包括越較好傻的長(zhǎng)便浸提休策略膠，同色步輻噴射的井應(yīng)用紋，電疲子區(qū)賀域檢家測(cè)器惡的出繪現(xiàn)，蠶以及平計(jì)算祥機(jī)輔鋒助的候數(shù)據(jù)壩分析轉(zhuǎn)；8）用申計(jì)算退機(jī)圖志像系博統(tǒng)為粱工具傭直接尖觀察愧晶體感數(shù)據(jù)陪；9）核挖磁共嘴振技模術(shù)的理改進(jìn)旦，使鍛溶液煤中原聰子分憶布能攀得到掉直接紹檢測(cè)壯。223、蛋卵白質(zhì)題工程彎產(chǎn)生塊的標(biāo)淺志19虎82年，Wi溝nt才er等首侮次報(bào)治道了葛通過紐奉基因嘗定位草誘變櫻獲得蘭改性揉的酪嘗氨酸t(yī)R滔NA合成慮酶(Na雪tu微re絨,2炸99陽(yáng),1雪98拒2)19跌83年，朽美國(guó)姓的Ul諒me澡r在《S假ci換en胳ce儀》上首診先提份出了“Pr孕ot秘ei干n師En賓gi慶ne瞇er獻(xiàn)in俯g“—曾—蛋白步質(zhì)工脅程誕只生(Sc臺(tái)ie依nc居e,斑2禽19蠟:山66款6-鍋67次1.)23DE蠢SI聰GN股a睬nd涼P鏈RO訓(xùn)DU補(bǔ)CEBE拋TT認(rèn)ERPR獲OT換EI怕NSBI需OC浴HE格MI抽CA隨LST元RU堂CT拘UR調(diào)EFO腫LD泛DI篩NGTH躺ER膜MO駛DY離NA爬MI收C244、蛋揉白質(zhì)混工程嫌與其倚他技簡(jiǎn)術(shù)相挽互滲寬透（1）蛋居白質(zhì)姑工程蠻與發(fā)腸酵工喪程發(fā)酵溪工程暑可以換利用辭基因矮技術(shù)誕和細(xì)像胞雜紡交技岡術(shù)選臣育出酬一大膚批生氏長(zhǎng)速嶼度快陰、代挨謝能壇力強(qiáng)煤、易母于大遞量表神達(dá)外濁源產(chǎn)告物的導(dǎo)新菌元種，懂可為生蛋白疾質(zhì)工艱程提府供優(yōu)曠良穩(wěn)轟定的千工程無(wú)菌株防，并瞇可為津蛋白突質(zhì)工泳程中命前期犬材料雕的制禾備等竟奠定再重要筒基礎(chǔ)夏。25（2）蛋帳白質(zhì)牢工程升與基宋因工朵程蛋白總質(zhì)工啞程是緩從DN桿A水平諒改變沒基因警入手適，通不過體標(biāo)外重全組技鏈術(shù)改憤造蛋貼白質(zhì)決或設(shè)航計(jì)合泛成具志有特埋定功誘能新憲蛋白軌質(zhì)的盟新興低研究另領(lǐng)域胡，也拉就是禮說(shuō)蛋草白質(zhì)缸的改蠟造通烏常需恭要經(jīng)雪過周姐密的延分子搬設(shè)計(jì)鋼，進(jìn)塘而依垂賴基再因工鬼程獲習(xí)得突掀變型鹽蛋白諷質(zhì)。戰(zhàn)目前浸，基抖因工買程已努為實(shí)刷現(xiàn)蛋掉白質(zhì)抵工程資提供憤了基斃因克漂隆、視表達(dá)壟、突妄變及竊活性寸檢測(cè)汁等關(guān)爐鍵技索術(shù)。26（3）蛋貝白質(zhì)按工程叼與細(xì)馬胞工詢程細(xì)胞煤工程誓是指飲以細(xì)違胞為世單位務(wù)，在味細(xì)胞錢和亞朽細(xì)胞記水平懂上有嫌目的透地進(jìn)嘆行遺赴傳操飛作，歉通過遼細(xì)胞飯融合居、核秤移植片等方酷法，皺培養(yǎng)正出人六們需宵要的繡新物針種，偶克服杰了源冷遠(yuǎn)雜迅交的屋局限紛性。目前摧，細(xì)烤胞工聞程技店術(shù)已均為蛋快白質(zhì)障工程餓提供缸了改起良性牙狀的第微生誼物細(xì)劈燕胞以艷及穩(wěn)耕定的鍛動(dòng)植淡物細(xì)為胞系蟲，以珠便更欺好的警生產(chǎn)殖蛋白俗質(zhì)；范另外栗，細(xì)遵胞工襖程可暮通過校細(xì)胞壁融合臉、轉(zhuǎn)詞基因胞技術(shù)愁改變不生物鍵的遺慮傳性鑼狀或異實(shí)現(xiàn)沃新型逼生物迎的構(gòu)擋建，熊進(jìn)而調(diào)為蛋肥白質(zhì)錘的生洲產(chǎn)提軌供更能多良器好的駛載體揉。27（4）蛋奪白質(zhì)屆工程重與酶塑工程由于岔大部岸分酶系的化欺學(xué)本喬質(zhì)是管蛋白持質(zhì)，資因此舊酶工獸程與滑蛋白撞質(zhì)工騾程的藝發(fā)展建密不諸可分傍。（5）蛋飄白質(zhì)撞工程變與生銳物信祝息技堵術(shù)利用攏生物湊信息搏學(xué)可湯以進(jìn)猴行蛋嫌白質(zhì)污結(jié)構(gòu)翠的預(yù)止測(cè)，駐其目甩的就腫是利瞞用已喚知的炒一級(jí)舊序列刪來(lái)構(gòu)分建蛋莫白質(zhì)丑的立蜘體結(jié)桌構(gòu)模休型。281）蛋白寨質(zhì)結(jié)君構(gòu)分珍析2）蛋潑白質(zhì)結(jié)構(gòu)句預(yù)測(cè)3）改芒造或嚇創(chuàng)造質(zhì)新蛋唐白質(zhì)三、田蛋白岔質(zhì)工米程的貪研究勒內(nèi)容29每一嫩種蛋弱白質(zhì)搞有自稻己獨(dú)特跑的aa順序，蛋巡壽白質(zhì)挑功能恢部位改的幾繳個(gè)aa殘基鬼決定攝著蛋音白質(zhì)圾的功閑能，掩這幾品個(gè)負(fù)殊責(zé)功討能的aa殘基屑必須巴處于啊一個(gè)拋及其盜精密血的空涌間狀掀態(tài)下頂才能私發(fā)揮俱功能很。這廳就是瘦說(shuō)，咬只要甘能維持件蛋白犯質(zhì)結(jié)受構(gòu)域萬(wàn)的必姿需aa及空兔間構(gòu)扶象不變梯，其怎功能經(jīng)域的生物私學(xué)活霧性就會(huì)元保持忽不變免。所侵以只奶要改躲變構(gòu)服成遺撕傳密讀碼的債一個(gè)兵或兩分個(gè)堿泉基就關(guān)能通朗過改調(diào)變aa達(dá)到酬改造揪蛋白掘質(zhì)的變目的布。1、蛋叮白質(zhì)蘋結(jié)構(gòu)屠分析301、蛋白示質(zhì)結(jié)表構(gòu)分潔析（研究勉核心斯）1）收刺集大嘆量的往蛋白秤質(zhì)分抬子結(jié)繩構(gòu)的責(zé)信息2）建著立結(jié)眾構(gòu)與著功能麻之間烘關(guān)系憲的數(shù)樓據(jù)3）蛋桿白質(zhì)幻玉結(jié)構(gòu)祖與功各能之百間關(guān)朵系的脾理論臺(tái)研究三維廈空間年結(jié)構(gòu)資的測(cè)石定是恭證明左新結(jié)縫構(gòu)改垮變了軌原有追生物侄功能讀的必永需手拖段31主要晴事件柄：19洋34年，這胃蛋過白酶殖的x射線傲衍射旺照片J.爐Be虧rn充al島,乒D.打Cr而ow火fo卷ot19取57年，荷肌紅言蛋白傻晶體常結(jié)構(gòu)Ke饑nd錄re它w19映59年，購(gòu)血紅靈蛋白單晶體戲結(jié)構(gòu)Pe把ru常tz32晶體堂學(xué)技聰術(shù)（x射線滴晶體央結(jié)構(gòu)扛分析贊）：1.對(duì)原姐材料算的要陳求：具有羞高度洲的均援一性寧；影凈響因鞏素有賴金屬投離子器、輔皮酶或駐一些努成鍵章的輔疏助集嗽團(tuán)的翼變化舒或缺陜失；怨蛋白乓質(zhì)的筒酶解綠、氧啄化和獎(jiǎng)還原鳴；蛋緩白質(zhì)售的聚牙合效埋應(yīng)等2.晶體湖生長(zhǎng)附的生約化條般件：pH值、款離子善強(qiáng)度按、沉舉淀劑君和添誕加劑滿的濃結(jié)度等裳因素缺陷讓需要遼分離紛出足訓(xùn)夠量碎的純葛蛋白滾質(zhì)（川幾毫隸克-幾十踩毫克妄），煤制備很出單阿晶體驢，然廈后再聽進(jìn)行筒繁雜搭的數(shù)抱據(jù)收關(guān)集、盲計(jì)算陳和分在析蛋白亭質(zhì)結(jié)傅構(gòu)分郵析主姻要技呈術(shù)33多維鹽核磁蔥共振戴波譜誼技術(shù)壁：二維蹦同核述核磁狀共振外方法堤：對(duì)氫拖原子休核的沙二維虛核磁蓋共振悅信號(hào)曉進(jìn)行信分析畝，主甜要用葉于β類蛋隸白質(zhì)多維飛異核勸核磁汪共振歸方法藍(lán)：1H、13令C、15躁N，主襪要用宜于分籌子量走高于10脆kD繳a的蛋尿白質(zhì)呼和α螺旋置的多乒肽冷凍嶄電鏡技術(shù):避免綁了普蹈通電仆鏡制紅樣的鑰脫水俯過程特，不弊破壞憶蛋白量正常叉結(jié)構(gòu)證并且像分辨塵率更般高，獨(dú)尤其傘適用儲(chǔ)于大使分子連蛋白劉復(fù)合怪體的洪結(jié)構(gòu)墓解析蛋白弊質(zhì)結(jié)星構(gòu)分亞析主策要技朵術(shù)3435施一應(yīng)公1.St旅ru尤ct勵(lì)ur鑰e琴of桶a已Y擋ea妙st旺S碧pl嘩ic匪eo自so擱me促a專t儀3.怠6壺An假gs咱tr民om俊R括es晚ol陸ut借io盯n,鄉(xiāng)豐10宜.1眼12減6/sc歐ie坦nc映e.a僵ac貢76爪292.膏S粘tr顆uc耀tu參ra基l型ba數(shù)si攻s鳳of組p莫re偷-m演RN固A倉(cāng)sp貪li幻玉ci剪ng跡.題10貨.1年12啊6/sc軋ie范nc葵e.a錢ac裁81玩59蛋白袋質(zhì)空違間結(jié)禾構(gòu)的吃測(cè)定催已經(jīng)劫成為笛生命委科學(xué)幸的“賤瓶頸概”美國(guó)NI妄H投資1.理25億美翻元，已計(jì)劃歲測(cè)定1萬(wàn)個(gè)招蛋白喂質(zhì)晶嗎體結(jié)妻構(gòu)；日本RI神KE說(shuō)N將建16臺(tái)高兄分辨泥率核案磁共雄振儀曲，用悉來(lái)測(cè)初定小取分子貞蛋白爬質(zhì)結(jié)蜂構(gòu)技術(shù)餅上的春障礙艷：在克要隆、壁表達(dá)猾、純謊化和俗結(jié)晶骨過程詢中，伶大約20個(gè)蛋青白質(zhì)五中能魂得到1個(gè)可河供結(jié)森構(gòu)測(cè)缺定的夏晶體音，并趕且一暑些蛋寺白質(zhì)有（膜胳蛋白解）根敢本不?？赡茴D被結(jié)惱晶現(xiàn)階瘋段主謹(jǐn)要研偶究手溝段：根據(jù)催氨基俗酸序崗列從秩理論納上計(jì)零算其榜相應(yīng)萄空間給結(jié)構(gòu)艦成為先蛋白拔質(zhì)領(lǐng)登域內(nèi)勁科學(xué)毒家們飄的奮刺斗目教標(biāo)研究封現(xiàn)狀361）蛋白搜質(zhì)結(jié)喘構(gòu)分指析2）蛋洽白質(zhì)吹結(jié)構(gòu)頌預(yù)測(cè)3）改婚造或棵創(chuàng)造歷新蛋津白質(zhì)三、險(xiǎn)蛋白襪質(zhì)工痰程的捕研究繡內(nèi)容372、結(jié)睡構(gòu)預(yù)令測(cè)對(duì)天偵然蛋鍬白質(zhì)特結(jié)構(gòu)所與功砍能分稻析建宵立起朋來(lái)的育數(shù)據(jù)索庫(kù)里犧的數(shù)緩據(jù)，圾可以端預(yù)測(cè)榜一定途氨基射酸序道列肽貪鏈空公間結(jié)摸構(gòu)和幟生物長(zhǎng)功能根據(jù)枝特定準(zhǔn)的生字物功缸能，何設(shè)計(jì)當(dāng)?shù)鞍子谫|(zhì)的社氨基謠酸序拐列和鞋空間傅結(jié)構(gòu)381、理先論分莫析方魚法或擠從頭貴算方括法(A設(shè)b剝in酒it寨io熟)：該見類方塞法假油設(shè)折障疊后勺的蛋殼白質(zhì)傷取能脖量最?yuàn)A低的吃構(gòu)象2、統(tǒng)茄計(jì)方繭法：孕對(duì)已貼知結(jié)數(shù)構(gòu)的扣蛋白牽質(zhì)進(jìn)洗行統(tǒng)劍計(jì)分燭析，膚建立輔序列宜到結(jié)梯構(gòu)的橫映射串模型鳳，進(jìn)違而根猜?lián)橙淠：行蛯?duì)躲未知承結(jié)構(gòu)曉的蛋同白質(zhì)屑直接來(lái)從氨襲基酸敘序列退預(yù)測(cè)焰結(jié)構(gòu)長(zhǎng)。這堪一類病方法謹(jǐn)包括箏經(jīng)驗(yàn)展性方軟法、剩結(jié)構(gòu)浴規(guī)律兔提取鞭方法緩、同緒源模敬型化狗方法擊等2、結(jié)簡(jiǎn)構(gòu)預(yù)前測(cè)39生物比信息肌學(xué)分房誠(chéng)析技搬術(shù)蛋白孤質(zhì)結(jié)肉構(gòu)的掏預(yù)測(cè)拿和設(shè)拖計(jì)40主要番技術(shù)美：分子渡動(dòng)力桿學(xué)、協(xié)分子處熱力融學(xué)等鞠，根公據(jù)能但量最確低、蹈同一桿位置新不能胳同時(shí)將存在斧兩個(gè)叮原子柴等基飄本原癢則分遵析計(jì)騎算蛋傻白質(zhì)美分子訪的立暫體結(jié)潑構(gòu)和助生物肆功能研究數(shù)現(xiàn)狀鉤：尚在場(chǎng)起步舞階段411）蛋白肥質(zhì)結(jié)湖構(gòu)分壺析2）蛋恰白質(zhì)陽(yáng)結(jié)構(gòu)稀預(yù)測(cè)3）改歐造或魯創(chuàng)造流新蛋悠白質(zhì)三、去蛋白顫質(zhì)工你程的脂研究唐內(nèi)容42蛋白畢質(zhì)分密子設(shè)鴉計(jì)按橡照被似改造嗎部位微的多景寡分剪為三商種類岡型：3）改革造或絡(luò)創(chuàng)造帖新蛋溜白質(zhì)“大改將”，如即在站了解彼蛋白晚質(zhì)結(jié)牢構(gòu)和再功能咬的基尿礎(chǔ)上饒，從趣一級(jí)拋結(jié)構(gòu)監(jiān)出發(fā)套，設(shè)糞計(jì)自柴然界茅不存訓(xùn)在的全新燒蛋白鋤質(zhì)?！靶「膶保菏緦?duì)已汪知結(jié)兩構(gòu)的睛蛋白純質(zhì)進(jìn)榆行幾個(gè)容殘基的替爐換來(lái)挑改善扮蛋白無(wú)質(zhì)的絕結(jié)構(gòu)顫和功柏能；“中改按”：博對(duì)天畢然蛋核白質(zhì)特分子臨進(jìn)行槐大規(guī)益模肽歪鏈或腐結(jié)構(gòu)攝域替驅(qū)換以炸及對(duì)摩不同黃蛋白辭質(zhì)的天結(jié)構(gòu)隙域進(jìn)薦行拼接類組裝；431）物漲理、籮化學(xué)慣法：對(duì)蛋澤白質(zhì)射進(jìn)行濁變性雖、復(fù)嶄性處核理，太修飾懷蛋白醬質(zhì)側(cè)喚鏈官脆能團(tuán)痕，分財(cái)割肽杠鏈，續(xù)改變蹦表面勤電荷磁分布挨促進(jìn)顯蛋白棒質(zhì)形談成一音定的故立體腿構(gòu)像愧等等2）生仗物化視學(xué)法萬(wàn)：使用黨蛋白葬酶選供擇性羨地分撿割蛋喪白質(zhì)鋸，利當(dāng)用轉(zhuǎn)壟糖苷像酶、局酯酶謀、酰讀酶等樣去除畜或連表接不喂同化錢學(xué)基均團(tuán)，計(jì)利用蜜轉(zhuǎn)酰穗胺酶湖使蛋估白質(zhì)亭發(fā)生灑膠連欄等等缺點(diǎn)壩：缺乏倡特異大性，野不能曠針對(duì)前特定啊的部徹位起俘作用3）基螞因重市組技籍術(shù)或盼人工召合成DN龍A：可以幕改造愛蛋白批質(zhì)而應(yīng)且可陽(yáng)以實(shí)翁現(xiàn)從支頭合嚼成全襲新的意蛋白稿質(zhì)創(chuàng)造細(xì)和改婚造蛋昌白質(zhì)先方法滲：44修飾鍋目標(biāo)菊明確在確樓定基塑因序個(gè)列或膨氨基殘酸序時(shí)列與沾蛋白填質(zhì)功攝能之療間關(guān)你系之爛前，播宜采作用隨坑機(jī)誘戴變，那造成誤堿基應(yīng)對(duì)的木缺失券、插翠入或仇替代踏，這暖樣就朋可以碧將研老究目惑標(biāo)限題定在純一定情的區(qū)欠域內(nèi)捷，從肯而大泄大減杏少基縱因分磁析的好長(zhǎng)度筍。一旦資目標(biāo)DN投A明確遮以后鞭，就折可以仗運(yùn)用企定位媽突變游等技犬術(shù)來(lái)巷進(jìn)行蒸研究45蛋白悟質(zhì)工捉程的呆研究農(nóng)策略生物沈?qū)W功銳能蛋白概質(zhì)工器程基因氨基碗酸多肽邪鏈蛋白安質(zhì)三維佳結(jié)構(gòu)DN沸A合成分子禿設(shè)計(jì)預(yù)期鬼功能轉(zhuǎn)錄你、翻涌譯DN磚A合成生物旦學(xué)中相心法絡(luò)則反向惜生物添學(xué)46蛋白證質(zhì)工蝴程操絲式作流噴程純化尼蛋白鍋質(zhì)合成尤寡核敬苷酸晶體另結(jié)構(gòu)飄模型蛋白閃質(zhì)結(jié)飼構(gòu)功焰能研繁究基因述文庫(kù)克隆根化基頌因計(jì)算謹(jǐn)機(jī)輔立助設(shè)協(xié)計(jì)M1傾3克隆分子花性質(zhì)練及分腥子定批向改當(dāng)造方戴案DA瘦N序列分子遞測(cè)試絹性質(zhì)表達(dá)冒載體純化昨突變蠶型蛋腳白質(zhì)突變智體47改變靜現(xiàn)有歉蛋白塘質(zhì)結(jié)嗽構(gòu)的愧步驟

分離純化目標(biāo)蛋白質(zhì)

分析

蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)

分析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系根據(jù)蛋一級(jí)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)引物、克隆目的基因根據(jù)三維結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及蛋白質(zhì)改造的目的設(shè)計(jì)改造方案對(duì)目的基因定點(diǎn)突變改造后的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)分離純化表達(dá)的蛋白質(zhì)分析腿功能協(xié)和評(píng)傾價(jià)是否器達(dá)到飄設(shè)計(jì)移目的48蛋白晝質(zhì)工唉程的器支撐賊技術(shù)蛋白夜質(zhì)結(jié)肆構(gòu)解扭析技語(yǔ)術(shù)生物解信息絕學(xué)分倚析技堡術(shù)定點(diǎn)必突變始等遺駐傳操難作技析術(shù)49各類凳氨基象酸自考動(dòng)測(cè)寶序儀蛋白飯質(zhì)結(jié)梅構(gòu)解先析技作術(shù)50X-及ra享y神cr久ys略ta宗ll桑og陜r(jià)a窮ph辭ic苦El獲ec輸tr己on榨D寬en溪si樂ty民M托ap蛋白姐質(zhì)結(jié)慚構(gòu)解尿析技多術(shù)51蛋白竿質(zhì)結(jié)襪構(gòu)解擴(kuò)析技冬術(shù)核磁駐共振慚技術(shù)Nu恩cl秒ea麥r毀Ma廚gn寨et角ic怪R勵(lì)es貪or奧re胖nc蹲e52電子偏顯微梁技術(shù)蛋白信質(zhì)結(jié)森構(gòu)解敲析技缺術(shù)53生物獅信息捏學(xué)分支析技碧術(shù)數(shù)據(jù)裝庫(kù)PD遼B/兔RC疏SB陡(疤Pr放ot唉ei株n復(fù)Da菠ta澡ba飯se芒)（ht嚷tp憐:/貓/w勾ww皺.p回db拍.o憤rg院/）SW錫IS紙S-涌PR避OT（ht饒tp找:/漸/w曾ww鞏.e純xp胳as康y.沙or筐g/蠻sp稍ro嚷t/）PI儉R（ht鋸tp頸:/邁/p四ir叢.g效eo爽rg父et蹈ow餡n.拴ed滿u/致ip華ro散cl骨as底s/）54PD杰B/芽RC猾SB石(毀Pr濟(jì)ot肥ei疲n前Da授ta指ba回se顆)蛋白彈質(zhì)結(jié)嚼構(gòu)數(shù)截?fù)?jù)庫(kù)(P絨ro雪te供in辛D兩at與a唇Ba晚nk得,簡(jiǎn)稱PD博B)是美爪國(guó)紐猾約Br族oo牽kh撓av吳en國(guó)家體實(shí)驗(yàn)童室于19煮71年創(chuàng)警建的塔。PD待B是目輕前最棉主要耀的收同集生賽物大罪分子(蛋白勉質(zhì)、桃核酸候和糖)三維涂結(jié)構(gòu)斯的數(shù)遭據(jù)庫(kù),是通臘過X射線冠單晶乖衍射切、核嫩磁共總振、寒電子候衍射約等實(shí)錢驗(yàn)手弦段確盞定的襯蛋白顆質(zhì)、風(fēng)多糖杰、核蛛酸、港病毒桐等生歐物大公分子榨的三臺(tái)維結(jié)龜構(gòu)數(shù)挺據(jù)庫(kù)杠。55SW狡IS擠S-穴PR駕OTSW嚷IS虧S-逃PR飯OT刮是章由耽Ge下ne襯va導(dǎo)大殺學(xué)和拘歐洲潑生物討信息展學(xué)研燭究所筋（軍E及BI舉）隔于鐵1矮98蔽6烏年聯(lián)冠合建緒立的慈，它抽是餐目頭前某國(guó)完際襯上壩權(quán)威瓶的顧蛋伶白摟質(zhì)碑序立列數(shù)夕據(jù)巖庫(kù)際。瞧S罪WI寄SS孔-P餃RO失T帽中的略蛋歐白洲質(zhì)智序邊列是嘆經(jīng)枯過貓注鉗釋慌的。作S巨WI環(huán)SS液-P跳RO福T陽(yáng)中的要數(shù)據(jù)帥來(lái)源魚于不仍同源勢(shì)地：纏（煉1鈔）妨從核煎酸數(shù)岡據(jù)庫(kù)譯經(jīng)過貼翻譯困推導(dǎo)剩而來(lái)彎；徹（蛋2嘉）從咽蛋白陳質(zhì)過數(shù)據(jù)講庫(kù)想PI浩R辣挑選鉆出合左適的救數(shù)據(jù)透；降（電3推）從啟科學(xué)糕文獻(xiàn)場(chǎng)中摘從錄；嘩（跌4箏）丹研究很人員折直接鳳提交優(yōu)的蛋噸白質(zhì)鳴序列區(qū)數(shù)渠據(jù)斑。56PI波RPI亡R全稱Th糕e城Pr梨ot歐ei禾n償In蠢fo械rm牲at觀io歡n潤(rùn)Re屬so焰ur棗ce，是惰一個(gè)碑集成臭了關(guān)香于蛋歇白質(zhì)番功能今預(yù)測(cè)腐數(shù)據(jù)毯的公插共資鉆源的彩數(shù)據(jù)謠庫(kù)，志其目辱的是鵲支持手基因堡組/蛋白酸質(zhì)組框研究漲。PI預(yù)R提供溉了在導(dǎo)超家湊族、供域和填模體提水平茶上的用對(duì)蛋喬白的吸分類蝦。PI暗R同時(shí)納提供喜了蛋接白的功結(jié)構(gòu)筐和功弄能信寬息，葉并給畫出了驢與其懷他40個(gè)數(shù)書據(jù)庫(kù)獎(jiǎng)之間壞的相桶互參蹤蝶考。57四、博蛋白辱質(zhì)工糖程的腔應(yīng)用58醫(yī)藥洪領(lǐng)域生物翅材料能源術(shù)領(lǐng)域農(nóng)業(yè)姓領(lǐng)域工業(yè)自領(lǐng)域其他威領(lǐng)域提高仰酶的于熱穩(wěn)顧定性延長(zhǎng)享制品萬(wàn)在體糟內(nèi)的局半衰賺期提高垂蛋白蠢質(zhì)的曠抗氧于化性提高款重組觀蛋白曲質(zhì)的瓣活性導(dǎo)及穩(wěn)滴定性降低炸制品劫的免諸疫原戀性改變姐酶的誘催化鏟效率提高林酶的紫專一宣性蛋白板質(zhì)工稠程技鳥術(shù)應(yīng)驅(qū)用解降決的旨問題59實(shí)際方應(yīng)用株方面:到目文前為忽止盡屠管人輕類已節(jié)經(jīng)發(fā)滅現(xiàn)了胞數(shù)千漸種酶,但是上真正小具有嘗商業(yè)筑價(jià)值似即每進(jìn)年銷兇售額干可超訪過10黑00萬(wàn)美域元的幣酶不哥過數(shù)未十種甘。迫牛切需膀要對(duì)織酶進(jìn)吐行改站造。60蛋白份質(zhì)工咳程在殃酶工球程中短的應(yīng)劃用誘變竊蛋白妹質(zhì)俯氨來(lái)基酸其突變瞇原塞定目抬標(biāo)楊結(jié)果T4溶菌田酶Il默u→筍Cy忘s構(gòu)建阻二硫抄鍵蒸成創(chuàng)功增加檢熱穩(wěn)廣定性枯草銷桿菌Gl紡y→掘Ly色s拓寬缸酶作壟用的茫成梢功蛋白技酶厭底物柴范圍Al針a→砌Le攔u提高賺抗氧贈(zèng)化性綱能α-抗凝主酶Me色t→袍Va蓄l提高田抗氧麗化性奔能賀成吧功胰蛋紗白酶Gl港y→位Al巴a提高緞酶水乓解專龍一性疾成負(fù)功β-內(nèi)酰駐胺酶Se侍r→培Cy達(dá)s驗(yàn)證Se愁r對(duì)該輸酶伶成穩(wěn)功的重只要性β-干擾橡素Cy脊s→求Se睬r提高斑穩(wěn)定蘿性叮成旗功白細(xì)鉤胞介撐素-2樣Cy戰(zhàn)s→永Se雨r提高命產(chǎn)物件活性不成僻功二氫品葉酸姨還原煎酶As虧p→茄As爐n驗(yàn)證末酶的捎活性某成故功中心譽(yù)還原刷酶611）提觀高蛋柔白質(zhì)秋的穩(wěn)主定性如葡剖萄糖洲異構(gòu)告酶撲（GI）突吉變型GI比野蜘生型亂的熱耗半衰符期長(zhǎng)秤一倍坑；最嗓適反熱應(yīng)溫英度提戚高10臉-1團(tuán)2℃；酶飯比活佛相同2）融棟合蛋遙白質(zhì)化學(xué)坦合成鐵的腦啡抽肽（En選k）N端5肽編辮碼區(qū)擺，通們過一伙連接3肽編腔碼區(qū)島與人α1型干閘擾素IF柳N基因泳連接揮，在斜大腸真桿菌歡中表富達(dá)這倉(cāng)一融虧合蛋早白余，融談合蛋譽(yù)白抑載制腫鑼瘤細(xì)犧胞生步長(zhǎng)的社活性關(guān)顯著躺高于駱單純凳的IF蜂N蛋白亮質(zhì)工踩程在糾醫(yī)學(xué)鼓上的駁應(yīng)用623）治泰癌酶妹的改坑造如皰纖癥病柱毒胸亦腺嘧泰啶激繁酶(T茅K)是一辯種治謊療癌業(yè)癥的潛酶，域從大之量的元隨機(jī)溫突變?nèi)葜泻Y軋選出舊一種皆，在攻酶活賣性部筑位附鋤近有6個(gè)氨老基酸咬被替危換，傲催化秀能力觸分別類提高猴數(shù)十為倍。4）蛋盛白質(zhì)聞活性術(shù)的改繭變將胰氏島素B鏈改蛇為B2我8L姐ys－B2基9P掀ro，獲賴得單葬體速朗效胰牢島素檔。該聚速效教胰島籮素已不通過流臨床軟實(shí)驗(yàn)帳。63胰島薄素治既療豬人全球工已診允斷的Ⅱ型糖肌尿病豎患者厭達(dá)1.竿3億人偶，我澡國(guó)已來(lái)超過40贏00萬(wàn)人.中國(guó)駐城市敏人口干治療埋糖尿蜻病每剩年直致接人勸均醫(yī)況療花引費(fèi)為45利1美元局，治漠療患途有糖森尿病疏并發(fā)耀癥的齊患者亭花費(fèi)傷則高四達(dá)16喂94美元哭。在祖糖尿滿病用扛藥中堪，胰股島素賽是最獻(xiàn)有效繪的糖哀尿病肆治療至藥物各之一經(jīng)，也歇是1型糖料尿病名人惟額一的葛治療蘇藥物戚。此希外，掌還有30筒%～40已%的2型糖爽尿病遙患者虛最終瓦需要閥使用抵胰島匙素。64胰島饞素的柜改造天然安胰島售素的譜缺點(diǎn):在高組于生數(shù)理濃仇度(1榜0-8~1單0-1蠅0mo惕l/艦L)自身甲聚合[藥用膏濃度盾高,>傭1容0-4mo仍l/攝L]發(fā)揮導(dǎo)生理我功能暢需要詠單體頌形式駛與專鉆一受衫體結(jié)桿合目標(biāo):研制燭以單禁體存舞在的竊胰島腫素65解決跌途徑基于類胰蘋島素霜生長(zhǎng)恩因子IG氣F-句1是以丙單體瞇形式剪存在,將胰香島素B鏈的B2擴(kuò)8-灑B2逗9的殘易基序逆列顛敢倒成IG德F-傻1相應(yīng)檢序列向胰富島素輩二聚情體形懷成面嶼引入你帶電退荷或距具有謀大的宋側(cè)鏈騎的殘爽基,以阻籮礙二赤聚體鴨的形掘成中國(guó)旅科學(xué)C輯20蜜02；32（4）6667胰島蓬素的鏟緩釋套改造胰島魚素屬延小分負(fù)子蛋露白,皮下鞠注射敬進(jìn)入奴血液該后被璃快速春代謝,給藥遵頻繁運(yùn)用撥不同憶策略換對(duì)其脾緩釋,減少曉給藥舅次數(shù)維持泄血藥擋濃度,防止郊胰島序素濃腹度過訪高造擺成低搭血糖問題68地特荒胰島廢素諾和翠平（Le腰ve好mi彎r）諾和岸諾德20騙13年銷縣售額18億美嬸元5）嵌稀合抗謎體和堤人緣界化抗勒體嵌合健抗體就是氣用人俘抗體蠅的恒壯定區(qū)楊替代乖鼠單斥克隆員抗體策的恒聯(lián)定區(qū)虎，這攤樣它譯的免躍疫原麻性就婚顯著團(tuán)下降人緣恰化抗蒸體就是設(shè)將抗寬原吸衰附區(qū)務(wù)域嫁擱接到末人抗猴體上筑，這物樣抗做體上斃的外斃源肽盈鏈降臘低到趁最小塑，免點(diǎn)疫原嘗性也津就最統(tǒng)小陵。人療緣化財(cái)抗體斤如治士療脊刪髓性泰白血號(hào)病的AN毛TI－CD丹33等，齊其免駐疫反恩應(yīng)可般以忽癥略不巨計(jì)。69飼料因用酶殲的分轉(zhuǎn)子改烘良與聯(lián)產(chǎn)品彼研制飼料辛用抗肅菌肽敬的分執(zhí)子改囑良與斜產(chǎn)品息研制重要塌農(nóng)作沿物蛋秀白質(zhì)波標(biāo)記既的分點(diǎn)離鑒陽(yáng)定食品怒用酶笑及抗狐氧化懇酶的滾分子撕改良嚴(yán)與產(chǎn)阿品研團(tuán)制有機(jī)左磷降淡解酶柳及毒肚素解訪毒酶隨的分?jǐn)z子改效良與王產(chǎn)品跟研制重大墾動(dòng)物賓疫病麗快速風(fēng)檢測(cè)盟試劑罵的研謠發(fā)蛋白漿質(zhì)工址程在微農(nóng)業(yè)橡方面昂的應(yīng)畏用70意義在醫(yī)夸藥、爺工業(yè)浴、農(nóng)石業(yè)、擱環(huán)保蚊等方魂面應(yīng)志用前映景廣問泛對(duì)揭廊示生影命現(xiàn)滾象的聞本質(zhì)霸和生挑命活舞動(dòng)的漫規(guī)律復(fù)具有晉重要坦意義是蛋吉白質(zhì)低結(jié)構(gòu)鋼形成跡和功應(yīng)能表才達(dá)的撿關(guān)系洪研究烏中不改可替腹代的督手段基礎(chǔ)泄研究隨、應(yīng)萌用開栽發(fā)711.構(gòu)象貿(mào)的快伸速測(cè)卷定手誼段:以分村子定柴向改溫造為宣目標(biāo)鍛的蛋皮白質(zhì)盡工程朝須借秤助于懼精確禍的三哨維結(jié)史構(gòu)信筐息,而目蕩前主縮慧要靠X-射線母單晶類體結(jié)取構(gòu)分覆析,受到背單晶亡培養(yǎng)各的限男制。熱目前待正在鉛尋求躬通過板電子勺衍射運(yùn)三維辜分析尸、二軍維核土磁共港振等鑄手段遭來(lái)克左服上渾述限增制蛋白戰(zhàn)質(zhì)工送程存嘆在的搜問題722.基因口高效肥表達(dá)氧以及字有效歇的下隸游技探術(shù)尋找病高效縣表達(dá)復(fù)載體未、分鞏泌性促寄生跨系統(tǒng)圍以及竭各種織高效負(fù)批量殊分離灘技術(shù)黑是克猜服這講一限的制的旁關(guān)鍵蛋白壞質(zhì)工崗程存償在的枕問題73復(fù)習(xí)踩思考金題掌握敏蛋白踏質(zhì)工期程的拍概念熟悉撫蛋白置質(zhì)工也程的羽基本鎖研究凡內(nèi)容關(guān)注遼蛋白胳質(zhì)工嘴程領(lǐng)夜域，某了解傍蛋白陵質(zhì)工導(dǎo)程在氏生命學(xué)科學(xué)劣中的羊應(yīng)用掩及意項(xiàng)義747519穩(wěn)26年，Su蘭mn洞er從刀腰豆中紀(jì)提純負(fù)了脲遙酶，誘首次辜證明紐奉酶的縣本質(zhì)翅是蛋揉白質(zhì)踢。19洋32年，漿英國(guó)害化學(xué)圖家Kr軌eb亦s等提偉出合哄成尿巾素的劈燕鳥氨裂酸循跪環(huán)多步酶反綁應(yīng)途膜徑。19姿37年，Kr釀eb卸s公布況了三熟羧酸謹(jǐn)循環(huán)但的研魯究成乓果。19襪40年，冤德國(guó)馬生化喂學(xué)家Em穗bc嫌le才n和Me卸ge鏈rb相of公布掙了糖帽酵解健途徑泛。隨歡后，否脂肪盲酸氧拜化和畏核苷筋酸代森謝途尋徑也茫相繼膽被闡論明。思同時(shí)醒期，吩我國(guó)尖生物優(yōu)化學(xué)割家吳污憲等兇提出淡蛋白漠質(zhì)變夸性學(xué)誦說(shuō)。3、生忙物技棋術(shù)的章發(fā)展7619丘53年，帳英國(guó)銷生物繩化學(xué)盲家桑興格破露譯出歇由17種51個(gè)aa組成半的牛米胰島猴素兩尺條多引肽鏈賺的全互部結(jié)纏構(gòu)。19旅65年，賀我國(guó)安首先哀在世繩界上豎成功破人工淹合成竭了具遣有天準(zhǔn)然生艦物活犬力的恨蛋白雖質(zhì)——結(jié)晶趟牛胰樣島素薄。19僵75年，O’山Fa賭rr提el建立圍了雙往向電碼泳（2-盈DE）技踢術(shù)，侮可以?shī)视糜跀_組織嗽與細(xì)童胞中寒大規(guī)累模蛋摩白質(zhì)繡的分淡離。20世紀(jì)80年代獅末期配，Hi純ll袍en劈燕ka厘mp發(fā)展史了激翻光解復(fù)吸質(zhì)倚譜，F(xiàn)e患nn設(shè)計(jì)臘了電秧噴霧構(gòu)質(zhì)譜榜，可嫂以高謙效、韻精確噴地測(cè)茶量生少物大炎分子開的質(zhì)慨量并姐測(cè)定致部分噸序列解，進(jìn)吵而用旨于數(shù)滿據(jù)庫(kù)聚的檢皮測(cè)；Ma您nn通過莊建立繪“肽筆指紋禾圖譜逮與肽愁序列花標(biāo)簽碎”等賤技術(shù)厘，實(shí)饅現(xiàn)了菜質(zhì)譜域準(zhǔn)確親、快鴨速、老自動(dòng)惕化和想大規(guī)遠(yuǎn)模鑒考定蛋名白質(zhì)漠的飛乏躍。7719只82年，Wi邪nt到er等首奴次報(bào)鞭道通類過基竄因定戀點(diǎn)誘桐變獲塔得改愛性。19落83年，Ul獻(xiàn)me界r在《S凍ci氧en際ce左》上發(fā)朵表了膝蛋白糠質(zhì)te土in艷E翁ng狐in斷ee注ri宏ng的專碑論，豎標(biāo)志姿著蛋趙白質(zhì)煩工程臉的正魔式誕武生。19畏82年~1蔽98濾5年，F(xiàn)o般rs后ht等對(duì)北酪氨鐘酰tR率NA合成誰(shuí)酶的嘴分子格進(jìn)行僅了改甲造，巾根據(jù)X射線鉤衍射際實(shí)測(cè)販該酶磁與底浪物結(jié)戀合部躺位的販結(jié)構(gòu)砍，通烘過定汁點(diǎn)突畏變技求術(shù)改拋?zhàn)兣c輝底物簽結(jié)合泳的aa殘基稍，還來(lái)用動(dòng)閥力學(xué)嬌方法距測(cè)量仙所得她變體月酶的賽活性妥，深察入探霸討了忽酶與昏底物說(shuō)的作獄用機(jī)憲制，孩這就惕是最述早的系蛋白廣質(zhì)工社程。7819藍(lán)84年，Pe榆rr孕y通過搭將溶赤菌酶懼中Il很e3改成Cy專s3，并強(qiáng)進(jìn)一蓄步氧彼化成Cy配s3講-歸Cy煙s9嗽7二硫設(shè)鍵，瓣提高蛋了酶晃的熱撈穩(wěn)定因性，貸顯著匯改進(jìn)懷了溶猜菌酶破在食哭品工謊業(yè)的檢應(yīng)用窗價(jià)值籌。19滔87年，F(xiàn)o俘rs廊ht將枯雜草桿日菌蛋市白酶穴分子網(wǎng)表面膜的As桃p9賠9和Gl牛u1睡56改成Ly梅s，而斯導(dǎo)致療活性弟中心Hi哈s6敗4質(zhì)子pK銜a從7降到6，使你酶在pH倡=6時(shí)的識(shí)活力圓提高10倍。爹工業(yè)尿用酶根最佳pH的改仇變預(yù)木示著汗其可仿帶來(lái)