菌落總數(shù)的測定

關于菌落總數(shù)的測定第1頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月一、菌落總數(shù)食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

第2頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月二、菌落總數(shù)測定的意義1、判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量。2、預測食品存用的期限長短。3、了解細菌在食品中的繁殖動態(tài)。第3頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月三、設備和材料

除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃，30℃±1℃。冰箱：2℃～5℃。恒溫水浴箱：46℃±1℃。天平：感量為0.1g。均質(zhì)器。振蕩器。無菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭。無菌錐形瓶：容量250mL、500mL。無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。pH計或pH比色管或精密pH試紙。放大鏡或/和菌落計數(shù)器。第4頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月四、平板傾注法測定菌落總數(shù)檢驗步驟(程序)：檢樣→稀釋處理→做平板→培養(yǎng)→菌落計數(shù)→報告結(jié)果第5頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）、樣品的稀釋及做平板1、固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。第6頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月2、液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。（一）、樣品的稀釋及做平板第7頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月3、用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。4、上述操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。（一）、樣品的稀釋及做平板（一）、樣品的稀釋及做平板第8頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月5、根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。（一）、樣品的稀釋及做平板（一）、樣品的稀釋及做平板第9頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月6、及時將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。（一）、樣品的稀釋及做平板（一）、樣品的稀釋及做平板第10頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月1ml1ml1ml1:101:10001:1001:100001ml1ml1ml1ml加入46℃營養(yǎng)瓊脂12~15ml25g/ml樣品生理鹽水第11頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月

注意：檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min，以防止細菌有所死亡或繁殖。

第12頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）培養(yǎng)1、待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。2、如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層3、瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按1、條件進行培養(yǎng)。第13頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）計數(shù)和報告

到達規(guī)定培養(yǎng)時間，應立即計數(shù)。如果不能立即計數(shù)，應將平板放置于0－4℃，但不得超過24h。第14頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月1、菌落的選擇（1）、單個菌做一個菌落計（2）、呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，作為一個菌落計，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應按一個菌落計算。（3）、如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。第15頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月2、平板菌落計數(shù)的選擇

（1）、選取菌落數(shù)在30～300之間的平板，若有二個稀釋度均在30～300之間時，比值小于或等于2取平均數(shù)，比值大于2則其較小數(shù)字。第16頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）、如均大于300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告（3）、如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報告（4）、如菌落數(shù)有的大于300，有的又小于30，不在30～300之間，以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告（5）、如所有稀釋度均無菌落生長，則應按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告。

第17頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月3、菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在1～100時，按實有數(shù)字報告，如大于100時，則報告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計算。固體檢樣以克（g)為單位報告，液體檢樣以毫升（ml）為單位報告，表面涂擦則以平方厘米（cm2）報告。

第18頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月(四)、檢驗注意事項1、對照平板出現(xiàn)幾個菌落時，要追加對照平板；2、吸管進出瓶子或試管時，吸管口不得觸及瓶口、管口的外圍部分；3、吸管插入試樣液內(nèi)的深度不得小于2.5cm,調(diào)整時要使管尖與容器內(nèi)壁緊貼;4、進行稀釋時,吸管口不得與稀釋液接觸;第19頁，課件共21頁，創(chuàng)作于20