TSSX 007-2023 植物油生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定反相高效液相色譜法

ICS67.050A019團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/SSX007—2023植物油生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定反相高效液相色譜法Vegetableoils-Determinationoftocopherolandtocotrienolcontentsbyreversed-phasehighperformanceliquidchromatography2023-03-24發(fā)布 2023-04-24實(shí)施陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)發(fā)布T/SSX007—2023T/SSX007—2023PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前??言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)定義 1原理 1試劑 1儀器和設(shè)備 2取樣 2操作步驟 2結(jié)果表示 3精密度 3附錄A（資料性）4種生育酚和4種生育三烯酚混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖 4前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件負(fù)責(zé)起草單位：陜西師范大學(xué)、西安市糧油質(zhì)量檢驗(yàn)中心。本文件參與起草單位：陜西省糧油科學(xué)研究院、西安市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院。本文件主要起草人：李建科、武利梅、吳麗華、孟永宏、張玉環(huán)、趙晶晶、龔珊、王峰、趙佳、蔡靜薇、雷亞楠。本文件由陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)負(fù)責(zé)解釋。本文件為首次發(fā)布。T/SSX007—2023T/SSX007—2023PAGEPAGE1植物油生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定反相高效液相色譜法范圍本文件規(guī)定了用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定植物油中α-、β-、γ-、δ-生育酚及α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的方法。當(dāng)取樣量為0.5g，定容25mL時(shí)，α-生育酚的檢出限為2.5μg/g，定量限為8.5μg/g；β-、γ-、δ-生育酚、α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚的檢出限為1μg/g，定量限為3.5μg/g。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5524動(dòng)植物油脂扦樣GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T15347化學(xué)試劑L(+)-抗壞血酸GB/T26635動(dòng)植物油脂生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定高效液相色譜法術(shù)語(yǔ)定義下列術(shù)語(yǔ)定義適用于本文件。生育酚含量Tocopherolcontentsα-、β-、γ-、δ-生育酚含量的總和。生育三烯酚含量Tocotrienolcontentsα-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的總和。原理植物油樣用正己烷溶解，甲醇水溶液均質(zhì)萃取后，甲醇水層通過(guò)高效液相色譜儀將各生育酚及生育三烯酚單體分離，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜保留時(shí)間對(duì)目標(biāo)物質(zhì)定性，采用外標(biāo)法定量。試劑除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。生育酚及生育三烯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。α-生育酚：CAS號(hào)：10191-41-0，純度≥95%；β-生育酚：CAS號(hào)：148-03-8，純度≥95%；γ-生育酚：CAS號(hào)：54-28-4，純度≥95%；δ-生育酚：CAS號(hào)：119-13-1，純度≥95%；α-生育三烯酚：CAS號(hào)：10191-41-0，純度≥95%；β-生育三烯酚：CAS號(hào)：190-23-3，純度≥95%；γ-生育三烯酚：CAS號(hào)：54-28-4，純度≥95%；δ-生育三烯酚：CAS號(hào)：25612-59-3，純度≥95%。0.22μm尼龍過(guò)濾器過(guò)濾后使用。GB/T15347的規(guī)定。2,6-BHT。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有熒光檢測(cè)器。均質(zhì)機(jī)。高速冷凍離心機(jī)。紫外分光光度計(jì)。氮吹儀。取樣采用GB/T5524扦樣。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液制備標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱量4種生育酚和4種生育三烯酚標(biāo)準(zhǔn)品各10.0mg于10mL容量瓶中，用正己烷溶解并稀釋至刻度，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，密封后，在-20℃下避光保存，有效期６個(gè)月。臨用前需要進(jìn)行濃度校正：用帶10mm比色皿的紫外分光光度計(jì)（6.4），在270nm～310nm之間選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)（見(jiàn)表1）測(cè)吸光度。測(cè)得的吸光度應(yīng)在0.2~0.8之間。用吸光度除以表1中相應(yīng)的校正系數(shù)計(jì)算濃度（用mg/mL表示）。標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液：用移液管分別吸取4種生育酚和4種生育三烯酚單體儲(chǔ)備液0.5mL至棕色試管，在30℃的條件下，用氮吹儀除去正己烷。用移液管向試管中準(zhǔn)確加入10mL流動(dòng)相振蕩溶解殘余物，此溶液中4種生育酚和4種生育三烯酚濃度為50μg/mL。密封后，在-20℃下避光保存，有效期半個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確吸取生育酚和生育三烯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液0.0125mL、0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2mL于10mL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)系列4種生育酚和4種生育三烯酚濃度分別為0.0625μg/mL、0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)工作液在0℃~4℃之間避光儲(chǔ)存，現(xiàn)用現(xiàn)配。表1校正系數(shù)波長(zhǎng)/nm物質(zhì)校正系數(shù)292α-生育酚0.0076296β-生育酚0.0089298γ-生育酚0.0091298δ-生育酚0.0087注：以上參數(shù)是根據(jù)生育酚的E值（1%/1cm）換算得到。例如，α-生育酚在292nm（在甲醇中）的E值（1%/1cm)為76，因此，1μg/mL的α-生育酚在292nm的吸光度為0.0076。生育三烯酚與對(duì)應(yīng)的生育酚校正系數(shù)相同。樣品制備0.5g0.01g50mL0.1gBHT1g5mL正6mL90%9000r/min90s4°C5min，收25mL棕色容量瓶，90%325mL0.22μm尼龍過(guò)濾器過(guò)濾，待測(cè)，整個(gè)操作須在避光環(huán)境中完成。測(cè)定色譜參考條件色譜柱：Poroshell120PFP250mm×4.6mm，填充平均粒徑為4μm；流動(dòng)相：甲醇+水=90+10（v+v）；294nm328nm；柱溫：30；進(jìn)樣體積：10.0μL；流速：0.8mL/min。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將生育酚和生育三烯酚混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液（8.1）按質(zhì)量濃度由低到高順序依次進(jìn)行分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣測(cè)定依次將空白溶液和試樣溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖，以色譜保留時(shí)間進(jìn)行定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中各生育酚和生育三烯酚的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。8種生育酚和生育A。結(jié)果表示樣品中生育酚及生育三烯酚單體含量根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算，公式（1）如下：………………（1）式中：X——植物油中生育酚或生育三烯酚單體的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線算出生育酚或生育三烯酚的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；D——樣品定容后的稀釋倍數(shù)，如未進(jìn)行稀釋，則D=1；V1——定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。精密度重復(fù)性在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)