細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆

關(guān)于細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆第1頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)目標(biāo)了解動(dòng)物細(xì)胞融合的原理、過(guò)程和意義。理解單克隆抗體制備的過(guò)程和應(yīng)用第2頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月重點(diǎn)難點(diǎn)1.教學(xué)重點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w的制備和應(yīng)用2.教學(xué)難點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w的制備過(guò)程第3頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月問(wèn)題探討

“番茄—馬鈴薯”（理想圖）

通過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)，科學(xué)家們采用體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了“番茄—馬鈴薯”植株。第4頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶嗎？動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？第5頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)過(guò)程一.動(dòng)物細(xì)胞融合1.動(dòng)物融合的過(guò)程請(qǐng)同學(xué)們閱讀課本P52動(dòng)物融合第6頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞

滅活的病毒有絲分裂兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞第7頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。第8頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月思考題1.植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？

酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法4.動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？不能第9頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7.你推測(cè)一下動(dòng)物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題

利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8.在生產(chǎn)實(shí)際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？

生產(chǎn)單克隆抗體6.你能歸納出什么叫做動(dòng)物細(xì)胞融合嗎？第10頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合

細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較第11頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.動(dòng)物細(xì)胞融合的概念

動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞。第12頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）－2個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒離心振動(dòng)電激聚乙二醇第13頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月提問(wèn)？1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。2.一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？每一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。3.一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上。4.簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？抗原動(dòng)物體抗體抗原不純抗體不純二、單克隆抗體刺激漿細(xì)胞第14頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？

體外培養(yǎng)單個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎?怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？產(chǎn)量低，純度低，特異性差第15頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能夠無(wú)限增殖雜種細(xì)胞二、單克隆抗體2.制備過(guò)程：第16頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞

單克隆抗體制備過(guò)程示意圖多種雜交細(xì)胞第17頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

單克隆抗體制備過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第18頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.單克隆抗體的應(yīng)用：

①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義

②在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有

③生物導(dǎo)彈二、單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)越性。第19頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來(lái)的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對(duì)胎兒造成不利影響。該方法檢測(cè)的準(zhǔn)確率在90％以上。第20頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第21頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月知識(shí)結(jié)構(gòu)兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活的病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)第22頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)反饋1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞B2.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （）

A.B淋巴細(xì)胞B.T淋巴細(xì)胞C.骨髓瘤細(xì)胞D.雜交瘤細(xì)胞

D3.（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是 （）

A.效應(yīng)B細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞

C.骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞

ABCD第23頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體不能，沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：________________(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(3).A是從小鼠的脾臟中取得__________該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______。(4).圖中B為________________過(guò)程，常用_________________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。(5).C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括________培養(yǎng)和__________培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代50第24頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月課后習(xí)題1.單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A.②④B.①③⑤

C.①②③④

D.②③

C2.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于()

A.細(xì)胞膜的流動(dòng)性B．細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性

C.細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性D．細(xì)胞質(zhì)酶的活性A一.選擇題第25頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.“生物導(dǎo)彈”是指 （）A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物

D4.只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （）

A．PEG

B．滅活的病毒C．電刺激D．離心A二.簡(jiǎn)答題1.淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體---------------------中的---------------------細(xì)胞分化發(fā)育而來(lái)的。2.雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是---------------------骨髓造血干主動(dòng)運(yùn)輸?shù)?6頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三.思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？2.制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。

提示：哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過(guò)程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細(xì)胞大量增殖。B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。

第27頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)參考1.已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例還有哪些？

生物種類細(xì)胞來(lái)源成功年代酵母菌—雞原生質(zhì)體—血紅細(xì)胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細(xì)胞—原生質(zhì)體1976年人—小鼠纖維肉瘤細(xì)胞—畸胎瘤細(xì)胞1978年要知道更多的實(shí)例，需經(jīng)常查閱更多科研報(bào)道。第28頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.為什么不用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？

就目前常用的細(xì)胞融合方法來(lái)看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)