《影響酶活性的因素》

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作

一.玻璃儀器的洗滌在生化實(shí)驗(yàn)中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無(wú)水珠附著在玻壁上。㈠常用的洗滌方法：1.一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。

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2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時(shí)用自來(lái)水多次沖洗，細(xì)心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。（1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；（2）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡4~6小時(shí)，然后按上法順序操作，即先用自來(lái)水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥。.

二.刻度吸量管刻度吸量管的種類(lèi)：按容量規(guī)格來(lái)分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移取量的0.1~1%。通常將管身標(biāo)明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類(lèi)推。..

刻度吸量管的正確使用方法：用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過(guò)刻度以上時(shí)，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)吸量管，使試液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點(diǎn)與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊，松開(kāi)食指讓液體流出。液體流完后再等15秒鐘，捻動(dòng)一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去）。.

三.溶液的混勻

㈠混勻的目的：⒈使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進(jìn)行反應(yīng)；⒉使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。

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㈡混勻的方法通常有以下幾種：⒈使盛器作離心運(yùn)動(dòng)。⒉左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。.

㈢混勻的注意事項(xiàng)：⒈防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。⒉嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。.實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.實(shí)驗(yàn)原理3.實(shí)驗(yàn)步驟4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.實(shí)驗(yàn)分析.影響酶作用的因素.一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)對(duì)唾液淀粉酶活性的觀察，驗(yàn)證溫度、pH、激活劑、抑制劑等對(duì)酶活性的影響。.二、實(shí)驗(yàn)原理

唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。

淀粉

I2：藍(lán)色淀粉酶糊精（大分子，小分子）紫紅色、暗褐色或紅色淀粉酶麥芽糖+少量葡萄糖棕黃色，碘本身顏色

淀粉水解過(guò)程中與碘反應(yīng)，其顏色的變化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判斷淀粉酶活力強(qiáng)弱。.三、實(shí)驗(yàn)試劑及器材1.試劑

1%淀粉溶液

碘液

pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸鹽緩沖液

1%CuSO4溶液

1%NaCl溶液

Na2SO4溶液.2.器材

恒溫水浴鍋

電爐

比色板.四、實(shí)驗(yàn)操作1.唾液淀粉酶的制備取干凈的紙杯，盛上蒸餾水。用蒸餾水漱口。口含約20ml蒸餾水，2-3分鐘后，吐入一干凈試管中，棉花過(guò)濾。.管別淀粉管稀釋唾液蒸餾水同時(shí)放于30-40oC水浴中2分鐘后對(duì)照組3ml——2ml實(shí)驗(yàn)組3ml2ml——

2分鐘后做碘液檢查：在比色板上滴上碘液，于二管各取一滴加入，看是否開(kāi)始水解，以后每隔2分鐘再取一滴加以檢查，約6-10分鐘后實(shí)驗(yàn)管水解過(guò)程由藍(lán)紫紅棕?zé)o色，此時(shí)水解完成。但對(duì)照管仍藍(lán)色。觀察兩管淀粉在水解后的乳樣光澤分別取兩管溶液5滴，加入班氏試劑0.5ml，加熱煮沸，觀察有何現(xiàn)象發(fā)生。..2.pH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響.一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鈖H對(duì)酶活性的影響及最適pH的定義。二、原理酶的催化活性與環(huán)境pH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才具有活性，酶活性最高時(shí)的pH，稱(chēng)為酶的最適pH，高于或低于此pH時(shí)酶的活性都逐漸降低。不同酶的最適pH不同。酶的最適pH不是一個(gè)特征性的物理常數(shù)，對(duì)于一個(gè)酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。.操作管號(hào)

123pH5.0磷酸緩沖液(ml)100pH6.8磷酸緩沖液(ml)010pH8.0磷酸緩沖液(ml)0011%淀粉溶液(ml)111唾液淀粉酶溶液(ml)111

搖勻，置于常溫下，立即自PH6.8的一管中取出一滴置于比色盤(pán)中，以后每隔2分鐘左右檢查一次，觀察與碘液的顯色反應(yīng)，當(dāng)出現(xiàn)淡紅褐色時(shí)，向每管滴加碘液1滴，比較各管顏色。取試管3支，按下表操作.3.溫度對(duì)唾液淀粉酶活力的影響.一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鉁囟葘?duì)酶活性的影響并了解最適溫度的定義。二、原理對(duì)溫度敏感是酶的一個(gè)重要特性，酶作為生物催化劑，和一般催化劑一樣呈現(xiàn)出溫度效應(yīng)，提高溫度可以提高酶促反應(yīng)速度，但另一方面又會(huì)加速酶蛋白的變性速度，所以在較低的溫度范圍內(nèi)，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，但是超過(guò)一定溫度后，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達(dá)到最大時(shí)的溫度稱(chēng)為酶的最適溫度。酶的最適溫度不是一個(gè)常數(shù)，它與作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)系。.

取3支試管，按下表操作：操作項(xiàng)目管號(hào)

1231%淀粉溶液(ml)222唾液淀粉酶溶液(ml)111溫度處理（℃）37沸水0-41.在上述溫度情況下，保溫10分鐘2.從上3管各取水解液少許用碘液試之。有何變化？3.將2、3管從水中取出，放入37℃水浴中保溫10分鐘，再以碘液試之，有何變化？.4.激活劑和抑制劑對(duì)唾液淀粉酶活性的影響.一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧せ顒┖鸵种苿?duì)酶活力的影響。二、原理酶的活性受某些物質(zhì)的影響，能使酶活性增加的稱(chēng)為激活劑，能使酶活性降低的稱(chēng)為抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會(huì)影響酶的活性，而且常具有特異性，但激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。.

置于常溫下，同時(shí)向各管中加入等量唾液1ml，立即混勻，并