上海市臨檢中心 生化繼教課件 王煜非-特殊HbA1c樣本檢測(cè)結(jié)果分享

.王煜非上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院上

海

市

糖

尿

病

研

究

所上海市糖尿病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室治療糖尿病及其并發(fā)癥的醫(yī)療總費(fèi)用每年超過(guò)1000億元,占醫(yī)療衛(wèi)生總費(fèi)用

2002

年4%,2006

年

8%,

2010

年13%2002年2006年2010年全球糖尿病患者達(dá)到

3.82億IDFDiabetes

Atlas,Sixthedition,2013在適合工作年齡人群中導(dǎo)致失明的首要原因1心血管死亡率和中風(fēng)危險(xiǎn)性增加2到4倍3糖

尿

病

患者中每10人有8人死于心血管事件4終末期腎病的首要原因2導(dǎo)致非創(chuàng)傷性下肢截肢手術(shù)的首要原因51FongDS,

et

al.

DiabetesCare

2003;26(Suppl.1):S99–S102.2MolitchME,

et

al.

DiabetesCare

2003;26(Suppl.1):S94–S98.3

KannelWB,

et

al.AmHeart

J

1990;120:672–676.4GrayRP&

YudkinJS.In

Textbook

of

Diabetes

1997.IDFDiabetes

Atlas,Seventh

edition,20155MayfieldJA,

et

al.

DiabetesCare

2003;26(Suppl.1):S78–S79.1血糖監(jiān)測(cè)是糖尿病管理的重要組成部分眾多國(guó)內(nèi)外指南推薦?實(shí)時(shí)反映血糖情況，了解各種因素對(duì)血糖影響，及時(shí)發(fā)現(xiàn)低血糖糖尿病患病率猛增糖尿病患者應(yīng)進(jìn)行血糖監(jiān)測(cè)??有助于評(píng)估糖尿病患者糖代謝紊亂的程度，制定合理的降糖方案反映降糖治療的效果，調(diào)整治療方案1.Yang

WY.et

al.NEnglJMed.2010;362(12):1090-101.2.中華糖尿病雜志.2011;3(1):13-21.

3.DiabetesCare.2012Jan;35Suppl1:S11-634.

中國(guó)血糖監(jiān)測(cè)臨床應(yīng)用指南

2011年版.5.UmpierrezGE,etal.JClinEndocrinolMetabol.2012,97:16-38??糖化血紅蛋白（HbA1c）是反映既往2~3月平均血糖水平的指標(biāo)，在臨床上已作為評(píng)估長(zhǎng)期血糖控制狀況的金標(biāo)準(zhǔn)，也是臨床決定是否需要調(diào)整治療的重要依據(jù)。無(wú)論是1型糖尿病的糖尿病控制與并發(fā)癥研究（

DCCT）還是2型糖尿病的英國(guó)前瞻性糖尿病研究（

UKPDS）等大型臨床試驗(yàn)，均已證實(shí)以降HbA1c為目標(biāo)的強(qiáng)化血糖控制可降低糖尿病微血管及2??血紅蛋白在高糖作用下，發(fā)生緩慢的非酶促糖化反應(yīng)HbA1c是血紅蛋白?亞基N末端與葡萄糖的醛基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)胚胎血紅蛋白新生兒血紅蛋白成人血紅蛋白gower

1-ζ(2),

ε(2)gower

2-

α(2),

ε(2)Portland-

ζ(2),

γ(2)HbF-

α(2),

γ(2)HbA

-

α(2),

β(2)HbA2-

α(2),

β(2)???葡萄糖可自由擴(kuò)散通過(guò)紅細(xì)胞紅細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖濃度

≈血漿中的葡萄糖濃度血漿葡萄糖水平上升時(shí)，紅細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的濃度也上升肝臟骨髓孕周（周）出生出生周齡（周）HbA

(22)~94–96%~10–30%HbF(2

2)HbA2(22)~2–3%~0%成人<1%新生兒~70–80%HbHbA(??)HbAHbF()2()97%2.5%0.5%HbA094%HbA16%A1a和A1b：1,6二磷酸果糖和6-磷酸葡萄糖A1c：葡萄糖結(jié)合HbA1aHbA1bHbA1c31.

Labile-A1c:是GHb的初期不穩(wěn)定的糖基化反應(yīng)產(chǎn)物Camargo等研究發(fā)現(xiàn)L-A1c可使離子交換色譜法測(cè)定的GHb值比實(shí)際值高1.64％2.

常見(jiàn)的化學(xué)衍生物:氨基甲酰Hb在尿毒癥患者血濃度升高––研究發(fā)現(xiàn)，用離子交換色譜法測(cè)定

GHb時(shí)，如尿素濃度超過(guò)17mmol／L，每升高1mmol／L會(huì)使HbA1C值升高0.04％免疫法和親和色譜法不受影響3.

Hb變異體:臨床中最常見(jiàn)的Hb變異體是HbE、HbG、HbD、HbS和HbCRohlfingCL,etal.DiabetesCare.2002,25:275-278Schiff

base??生物個(gè)體內(nèi)的變化(例如餐后、血糖控制不佳的糖尿病患者

)極度不穩(wěn)定結(jié)構(gòu):

大部分labileA1c會(huì)迅速釋放葡萄糖，回到

non-glycatedHbA0?干擾HPLC檢測(cè)結(jié)果:

LabileA1c和

HbA1c不會(huì)被完整分開(kāi)

(1-2%)氨基甲?；嬖谟谡€(gè)體內(nèi)

,

腎損傷和高血尿患者體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)更高的氨基甲?；?/p>

HbN異氰酸??干擾:

氨基甲?；疕b和HbA1c不會(huì)被完整分離開(kāi)尿毒癥、腎衰患者體內(nèi)的

氨基甲?；疕b可以高達(dá)

2%-3%4Acetylsalicylicacid???血紅蛋白乙?；l(fā)生在血紅蛋白鏈

N端多見(jiàn)于酗酒,孕婦和服用阿司匹林的患者長(zhǎng)期服用阿司匹林的患者體內(nèi)乙?；?/p>

Hb

可達(dá)1.1%?電荷差異–

離子層析法：HPLC?

BioRad—D10,Variants

II,Turbo??Arkary—HA

8160,

HA8180Tosoh

–G7,

G8–

毛細(xì)管電泳法?

Sebia—Capillary2

FP,

MiniCAP

FP結(jié)構(gòu)特異性?–

免疫法:

雅培、羅氏、西門(mén)子–

親和層析法：Primus、AlereDavidB.Sacks;

AACCWebinar

April10th2012%HbA1c

=HbA1carea

/∑

HbAarea??年齡

種族

妊娠影響紅細(xì)胞壽命–溶血性貧血，脾切，再障??藥物

阻斷糖基化或乙?；l(fā)性1型糖尿病?血紅蛋白變異體HbC,HbD,HbE,HbG,HbS

等甲酰化血紅蛋白??糖化血紅蛋白前體5患者信息：52歲,女,高血壓,高血脂,乙肝空腹血糖：5.9mmol/L檢測(cè)儀器：離子交換樹(shù)脂-HPLC(VARIANTII)%HbA1c

=HbA1carea

↑↑

/∑

HbAarea硼酸Hb不與硼酸結(jié)合糖化Hb與硼酸結(jié)合ClinChem.2011Feb;57(2):153-6%HbA1c

=AnnClinBiochem.2012,49(4):408-4116Hb

Variants平均RBC壽命（天）Hb

SSHb

SC1728Hb

CC29HbS-beta地貧Hb

AC7587Hb

AS93Hb

ADbeta

地貧11581-93HbA120RossJ.Molinaro;January2013地區(qū)地貧

%地貧

%合計(jì)

%廣西云南17.69.812.78.54.23.54.12.21.91.06.47.32.72.55.12.91.52.02.22.324.017.115.411.09.3海南廣東貴州江西（南部）福建6.45.6湖南4.2四川4.1重慶3.3利用beta珠蛋白氨基末端4-10個(gè)氨基酸的抗體N-terminalGlucoseMethodADAMSA1cHA-818023?0.25

?0.09310.170.64???38?0.23

?0.08in2it23230.590.9941410.07?0.070.16760.3400.7039400.180.260.350.25VIITurbo2.0?0.100.16?0.0676740.04抗體識(shí)別位點(diǎn)利用抗體檢測(cè)β6HbS/HbCβ26

β121HbE

HbD23?0.200.1734?0.030.29?0.020.2537?0.01

?0.02?HbA1c(α2β2):

YESG7G82323?0.204141?0.33?0.26?0.32?0.3076764040?0.36

?0.58?0.37

?0.60?0.46a??1.451.37??2.011.94?GlycatedHbF(α2γ2):

NO?GlycatedHbA2(α2δ2):

YES?HbX1c

(α2β2):

YES(X=S,C,D,E)?0.33

?0.08ClinChim

Acta.2012

Apr11;413(7-8):819-21756歲，F(xiàn)，體檢

（樣本號(hào)Hb81）FPG5.9

GA

15.1%VariantIIturbo離子交換HbA1c=11.2%PrimusHb9210親和層析法CapillarysFlex-Percing毛細(xì)管電泳HbA1c=4.3%34歲，M，感染

（樣本號(hào)SH6）FPG5.75~8.32

GA13.9%VariantIIturbo離子交換

PrimusHb9210CapillarysFlex-Percing

毛細(xì)管電泳HbA1c=6.2%56歲，F(xiàn)，體檢

（樣本號(hào)Hb81）FPG

5.75

GA

13.9%?經(jīng)血紅蛋白電泳分析，

DNA測(cè)序確認(rèn)：HbJ-Bangkok(beta

56(D7)Gly>Asp

HBB:c.170G>A)HbA1c=5.4%親和層析法HbA1c=5.8%34歲，M，感染

（樣本號(hào)SH6）FPG5.75~8.32

GA13.9%?經(jīng)血紅蛋白電泳分析，

DNA測(cè)序確認(rèn)：HbG-Taipei

變異體,(beta

22(B4)Glu>Gly

HBB:c.68A>G)?紅細(xì)胞壽命縮短?

指南推薦的HbA1c診斷截?cái)嘀岛椭委煱兄挡辉龠m用臨床要求：??HbA1c檢測(cè)技術(shù)能夠在最后圖譜中給出血紅蛋白病的提示以警示臨床醫(yī)生相應(yīng)更改對(duì)糖尿病的治療和監(jiān)測(cè)8SebiacapillarysFlex-Percing毛細(xì)管電泳法提示例數(shù)Bio-radVariantIIturboHPLC方法提示例數(shù)PrimusHb9210親和層析法提示例數(shù)39歲，M，貧血，經(jīng)確認(rèn)為

IDA患者（樣本號(hào)HB24）例數(shù)VariantIIturbo離子交換

PrimusHb9210

CapillarysFlex-Percing

毛細(xì)管電泳HbA1c=6.3%親和層析法HbA1c=4.2%HbA1c=4.7%IDA2024112024111*4*3*000（缺鐵性貧血）β

thalassemias(β地中海貧血）α

thalassemias(α地中海貧血）血紅蛋白變異體包括:HbE,HbG,HbJ-Bangkok,HbNewYork,HbS,HbD313122*00樣本提示比例100%35%*以variantwindow

提示45歲，F(xiàn)，貧血待查（樣本號(hào)HB58）70歲，F(xiàn)，糖尿病，

GLU=

30.85mmol/l

（樣本號(hào)HB17）VariantIIturbo離子交換HbA1c=5.3%PrimusHb9210親和層析法CapillarysFlex-Percing

毛細(xì)管電泳VariantIIturbo離子交換HbA1c=6.2%PrimusHb9210親和層析法CapillarysFlex-Percing

毛細(xì)管電泳HbA1c=5.4%HbA1c=6.4%HbA1c=NAHbA1c=6.2%70歲，F(xiàn)，糖尿病，

GLU=

30.85mmol/l

（樣本號(hào)HB17）54歲，

F，

體檢，

GLU=

5.57

mmol/l

（樣本號(hào)HB63）VariantIIturbo離子交換

PrimusHb9210HbA1c=6.6%CapillarysFlex-Percing

毛細(xì)管電泳?

血紅蛋白電泳分析，

DNA測(cè)序確認(rèn)：β-地中貧血（654/N）親和層析法HbA1c=5.0%HbA1c=5.8%944歲,M,T2DM

FPG:7.2

mmol/l