GB坂崎腸桿菌檢驗(yàn)演示文稿

GB坂崎腸桿菌檢驗(yàn)演示文稿1目前一頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)GB坂崎腸桿菌檢驗(yàn)?zāi)壳岸?yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T4789.40-2008相比，主要變化如下：——修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱(chēng)；——?jiǎng)h除了附錄A中A.3。目前三頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)

Enterobactersakazakii(ES)4目前四頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)內(nèi)容第一部分：一般特征第二部分：流行病學(xué)特征第三部分：ES的檢驗(yàn)5目前五頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)第一部分：一般特征命名培養(yǎng)特征生化反應(yīng)抵抗力增殖能力致病性6目前六頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)1980年之前一直被稱(chēng)為黃色陰溝腸桿菌。DNA-DNA雜交生化反應(yīng)黃色素抗生素敏感性7一、命名目前七頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)二、培養(yǎng)特征G－無(wú)芽孢桿菌，兼性厭氧，在6℃-47℃范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，適溫35-37℃營(yíng)養(yǎng)要求不高：

VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他與其他常見(jiàn)腸桿菌相似8目前八頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)三、生化反應(yīng)

生化反應(yīng)結(jié)果D-山梨醇-產(chǎn)生吐溫80脂酶+細(xì)胞外Dnase+氧化酶試驗(yàn)-黃色菌落+α-葡萄糖苷酶+9目前九頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)10ES及親緣關(guān)系較近的腸桿菌生化反應(yīng)比較試驗(yàn)生化反應(yīng)1阪崎腸桿菌陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌成團(tuán)腸桿菌日勾維腸桿菌賴(lài)氨酸脫羧酶－－＋－＋精氨酸雙水解酶＋＋－－－鳥(niǎo)氨酸脫羧酶＋＋＋－＋KCN生長(zhǎng)＋＋＋v＋發(fā)酵:蔗糖＋＋＋(＋)＋衛(wèi)矛醇－(－)－(－)－核糖醇－(－)＋－－棉子糖＋＋＋v＋D-山梨醇－＋＋v－χ-甲基-葡萄糖甙＋(＋)－－－D-阿拉伯糖醇－(－)＋－＋黃色素＋－－(＋)－注：＋：90-100％；(＋)：75-89%；V：25-74％；(－)：10-24％；－：0-9％目前十頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)第三部分

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)?zāi)壳笆豁?yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)主要內(nèi)容一、制訂的主要依據(jù)二、《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)》12目前十二頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)制訂的主要依據(jù)ISO2006年“乳和乳制品中阪崎腸桿菌的檢測(cè)”（Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakii）方法；美國(guó)FDA2002年頒布的“嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的分離和計(jì)數(shù)”（IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula）方法；2004年荷蘭乳及乳制品控制中心對(duì)各種阪崎腸桿菌檢測(cè)方法的比較研究；雀巢研究中心2005年環(huán)境樣品中阪崎腸桿菌快速檢測(cè)方法；阪崎腸桿菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基DFI研究資料。目前十三頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)SN第一部分：分離與計(jì)數(shù)方法第二部分：PCR方法第三部分：熒光PCR方法目前十四頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)常見(jiàn)選擇性培養(yǎng)基DFI(Oxoid,UK)ESIA(AES,France)R＆F（R&FLaboratories，Switzerland）OKmedium其他：國(guó)內(nèi)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、CES(Merck,Germany)，NA+-MUG15目前十五頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)顯色培養(yǎng)基的特點(diǎn)-葡萄糖苷酶活性指示劑：5-溴-4-氯-3-吲哚-，D-吡喃葡糖甙（XGlc）4-甲基傘形酮--D-葡糖苷（-MUG）4-鄰硝基苯--D-吡喃葡糖甙16目前十六頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)17目前十七頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)選擇性培養(yǎng)基的選擇1.FDA方法使用VRBGA，ISO方法中使用ESIA，本方法中我們選用DFI。2.ESIA和DFI的基本原理相似，二者都是根據(jù)ES能產(chǎn)生α-葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產(chǎn)生有色菌落。3.VRBGA對(duì)ES的選擇性差，ES、陰溝腸桿菌和成團(tuán)腸桿菌等多種腸道菌都可以在該平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生粉紫色菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。即：不能觀察到ES的特征性菌落。18目前十八頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)顯色培養(yǎng)基的選擇性較好DFI對(duì)ES的選擇性較好，ES形成的藍(lán)綠色特征性菌落易于辨認(rèn)，而且：硫化氫指示劑可以區(qū)分ES和產(chǎn)生少量α-葡萄糖苷酶但H2S陽(yáng)性菌株（如普通變形桿菌）。ES都可以在DFI平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生藍(lán)綠色菌落其他常見(jiàn)菌在DFI平板的菌落顏色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等黃色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心藍(lán)綠菌落：少量菌種ESIA:藍(lán)色，1-3mm19目前十九頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)選擇性增菌肉湯的選擇FDA方法選擇EE肉湯，ISO方法選擇mLST-Vm，即在LST中加入Nacl和Vm。本標(biāo)準(zhǔn)使用mLST-Vm。EE肉湯適合所有腸道菌群的生長(zhǎng)繁殖，這就可能對(duì)ES的生長(zhǎng)產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，降低檢出率。研究證明與其他腸桿菌科細(xì)菌（如沙門(mén)氏菌，大腸埃希氏菌等）相比，ES具有較高的耐滲透壓能力。加入0.5M的Nacl在保證ES良好生長(zhǎng)的同時(shí)，可以有效地抑制上述其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。Vm可有效地抑制G+菌的生長(zhǎng)。而較高的生長(zhǎng)溫度可以進(jìn)一步抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。目前二十頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)二、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)

阪崎腸桿菌檢驗(yàn)21目前二十一頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)本標(biāo)準(zhǔn)修改采用ISO/TS22964（1stedition2006-02-01）Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakiiFDAJuly2002;RevisedAugust2002IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula22目前二十二頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)第一法：阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)

第二法：阪崎腸桿菌的計(jì)數(shù)

23目前二十三頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)第一法

阪崎腸桿菌的檢驗(yàn)24目前二十四頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)程序報(bào)告TSA25℃±1℃，48h±4h生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃±1℃，24h±2h挑取藍(lán)綠色菌落1mL+mLST-Vm10mL44℃±0.5℃，24h±2h檢樣100g（mL）+BPW稀釋液900mL36℃±1℃，18h±2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定100g（mL）目前二十五頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)5.1前增菌和增菌左圖：未混合；右圖：混合后。26加樣入已預(yù)熱到44℃的BP中目前二十六頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)5.2分離DFI36℃±1℃24h±2h27目前二十七頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)TSA：25℃培養(yǎng)后典型ES：黃色陰性對(duì)照E.coliATCC25922：白色菌落28黃色素目前二十八頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)5.3鑒定（生化反應(yīng)）29生化試驗(yàn)特征黃色素產(chǎn)生＋氧化酶－L-賴(lài)氨酸脫羧酶－L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酶（＋）L-精氨酸雙水解酶＋檸檬酸水解(＋)發(fā)酵：D-山梨醇（－）L-鼠李糖＋D-蔗糖＋D-蜜二糖＋苦杏仁甙＋注：＋＞99%陽(yáng)性；－＞99%陰性；（＋）90%－99%陽(yáng)性；（－）90%-99%陰性。目前二十九頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用推薦使用的ES生化鑒定方法有很多，主要有API20E，ID32E，BiologGN2MicroPlate，VITEKGNI+等。上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國(guó)家和組織的標(biāo)準(zhǔn)采用。在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API20E和VitekGNI+。30目前三十頁(yè)\總數(shù)三十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)API20E生化鑒定板典型生化反應(yīng)圖示

API20E反應(yīng)編碼API20E結(jié)果評(píng)價(jià)3345373Excellentidentification3305173Excellentidentification3305363Verygoodidentification3305373Goodidentification31目前三十