熒光定量技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用演示文稿

熒光定量技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用演示文稿目前一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)（優(yōu)選）熒光定量技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用目前二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)目前三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)九十年代中期PCR臨床應(yīng)用在國(guó)內(nèi)全面展開(kāi)1998年熒光定量PCR技術(shù)開(kāi)始在中國(guó)應(yīng)用于臨床檢測(cè)PCR發(fā)展簡(jiǎn)史PCR

(Polymerase

ChainReaction)1983Cetus公司的KaryMullis于12月16日第一次成功實(shí)驗(yàn)發(fā)明了PCR1985關(guān)于PCR的文章首次由KaryMullis及其同事等人在《Science》上發(fā)表198912月《Science》雜志將PCR和它所使用的TaqDNA聚合酶命名為第一個(gè)“年度分子”。1993KaryMullis，NobelPrizeinChemistry1995PerkinElmer公司研制出熒光定量PCR技術(shù)目前四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)循環(huán)次數(shù)DNA的鏈數(shù)12122224323810210102420220

1,048,57630

230

1,073,741,82410億

PCR循環(huán)次數(shù)與DNA產(chǎn)量關(guān)系PCR循環(huán)PCR特點(diǎn)：高效擴(kuò)增、忠實(shí)復(fù)制目前五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)靈敏度高快捷簡(jiǎn)便對(duì)樣品純度要求低可以相對(duì)定量PCR反應(yīng)的特點(diǎn)目前六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)Ct值的意義Ct值與重復(fù)性同一樣本在相同條件下同時(shí)進(jìn)行96次擴(kuò)增FQ-PCRCt值與濃度不同的模板達(dá)到熒光域值時(shí)的Ct值不同目前七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)感染性疾病的診斷母嬰傳播的控制與觀察遺傳疾病的診斷腫瘤的診斷法醫(yī)學(xué)鑒定熒光定量PCR的臨床應(yīng)用目前八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)早期診斷病情評(píng)估和預(yù)后判斷抗病毒藥物療效的觀察、指導(dǎo)新藥驗(yàn)證目前九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)一感染性疾病1.病原體含量與病情之間的關(guān)系2.病原體含量與用藥之間的關(guān)系3.藥物及療法的研究與開(kāi)發(fā)4.新的病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn)5.新的愈后指標(biāo)6.傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預(yù)測(cè)與預(yù)防臨床應(yīng)用目前十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)臨床應(yīng)用二腫瘤1.腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原、同功酶、抗體、激素、細(xì)胞因子、受體等2.腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)：包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因目前十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)三遺傳病1.等位基因檢測(cè)2.多基因遺傳病的突變檢測(cè)3.基因表達(dá)異常所致遺傳病檢測(cè)目前十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)熒光定量PCR在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用一肝炎病毒定量檢測(cè)二性病病原體檢測(cè)三結(jié)核桿菌及呼吸道病原體檢測(cè)四優(yōu)生優(yōu)育(TORCH)相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)臨床應(yīng)用目前十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)肝炎病毒定量檢測(cè)HBVHCV臨床應(yīng)用目前十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)（一）乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好HBV目前十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV（二）HBV-DNA與“兩對(duì)半”1.“兩對(duì)半”：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；2.“攜帶者”、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。FQ-PCR：檢測(cè)的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。目前十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)3.血清學(xué)指標(biāo)(－)不能排除HBV感染。

HBV（二）HBV-DNA與“兩對(duì)半”HBsAg(－)HBV-DNA(＋)

HBeAg(－)HBV-DNA(＋)4.也可能出現(xiàn)HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。5.HBsAb(＋)、HBcAb(＋)、HBeAb(＋)三抗體陽(yáng)性與HBVDNA2.5×103copy/ml結(jié)果解釋。目前十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV(三)HBV-DNA定量檢測(cè)的臨床意義3.HBV-DNA定量與預(yù)后

a.含量高者急性肝炎患者易慢性化b.癌變的幾率明顯高于含量低者1.HBV-DNA定量與HBV復(fù)制水平及傳染性2.HBV-DNA定量與乙肝藥物療效

a.專(zhuān)家提出<103copy/ml做為陰性或臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)b.HBV-DNA定量分析與干擾素治療(前、中、后)c.拉咪呋啶目前十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV感染與干擾素治療治療前：

a:治療前HBV低水平復(fù)制者對(duì)干擾素的反應(yīng)性明顯優(yōu)于高水平復(fù)制者。b:治療前HBVDNA含量特別高者大多沒(méi)有療效。c:HBsAg轉(zhuǎn)陰的幾乎都是那些治療前血清HBVDNA含量較低者。目前十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV感染與干擾素治療治療中：a:病毒復(fù)制水平迅速降低者，有望治愈。

b:相反，治療期間HBVDNA復(fù)制水平下降較慢，或下降幅度較小，或者變化不明顯者，大多是干擾素治療無(wú)效。目前二十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV感染與干擾素治療治療后：

a:治療結(jié)束后，采用PCR定量法檢測(cè)，HBVDNA<103copy/ml者，可能不再?gòu)?fù)發(fā)。b:終止治療后HBVDNA仍保持較低水平者，反跳的可能性較大。目前二十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)ALTMonthsafterStartofTherapy0NormalAlt治療前1234561224HBVDNAHBeAgHBsAgPoorResponsetoIFNTherapyCHRONICHEPATITISB

目前二十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)拉咪呋啶：

有顯著降低高病毒載量作用，近期療效頗有優(yōu)勢(shì)，但是長(zhǎng)期使用可導(dǎo)致HBV變異，患者易出現(xiàn)耐受性，而且容易出現(xiàn)停藥后反彈。HBV感染與拉咪呋啶治療目前二十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)0-20-40-60-80-100治療周數(shù)拉米夫定安慰劑血清HBVDNA;中位%變化0481216202428323640444852n=192n=404n=171n=359拉米夫定抑制血清HBVDNA目前二十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HBV(三)HBV-DNA定量檢測(cè)的臨床意義4.HBV-DNA定量有助于指導(dǎo)懷孕與孕期，哺乳期檢查5.肝臟移植與HBV-DNAMazzaferro等報(bào)告：<103copy/ml無(wú)一例再發(fā)肝炎>105copy/ml發(fā)生了嚴(yán)重HBV再感染6.血液制品和獻(xiàn)血員的篩選目前二十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)病毒特點(diǎn)：1.單正鏈RNA病毒2.E1和E2區(qū)基因高度變異性（一）丙型肝炎病毒特點(diǎn)HCV感染特點(diǎn)：HCV在血中含量極微輸血后肝炎主要致病因子免疫學(xué)標(biāo)志僅有抗-HCV，非中和抗體，產(chǎn)生時(shí)間不一有一部分人感染HCV后，不產(chǎn)生抗-HCV感染易于慢性化(50-85%)疫苗研制尚不成功單鏈RNA目前二十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)(二)HCV-RNA定量檢測(cè)的臨床意義1.早期診斷

a.臨床以<80copy/ml做為無(wú)感染或治愈標(biāo)準(zhǔn)。b.HCV感染1-3W，即可檢出HCV-RNA的存在。c.嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員,提高對(duì)窗口期感染者的檢出率。d.醫(yī)療糾紛中的“舉證倒置”，病人入院前后進(jìn)行HCV-RNA檢測(cè)。

HCV目前二十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HCV(二)HCV-RNA定量檢測(cè)的臨床意義2.HCV-RNA載量與抗-HCV滴度、ALT水平之間的相關(guān)性。

抗-HCV滴度和ALT異常率隨著HCV-RNA載量升高而增加。3.HCV-RNA是評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的重要指標(biāo)。4.慢性丙型肝炎長(zhǎng)期抗-HCV陽(yáng)性，這時(shí)如果進(jìn)行HCV-RNA定量檢測(cè)可以鑒別活動(dòng)性、復(fù)制程度。目前二十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)二常見(jiàn)性傳播疾病病原體一淋球菌（NGH）二沙眼衣原體（CT）三解脲脲原體（UU）四梅毒螺旋體（TP）五單純庖疹病毒（HSV）六乳頭瘤病毒（HPV）七人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）八EV71A16通用型STD目前二十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)艾滋病

艾滋病是英文AIDS（AcquiredImmunityDeficiencySyndrome)的中文譯音，全稱(chēng)是“獲得性免疫缺陷綜合征”。它可以由人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV,Human-beingImmunityDeficiencyVirus），又稱(chēng)艾滋病病毒引起的疾病。當(dāng)病毒侵入人體后，經(jīng)一段時(shí)間的潛伏期，破壞人體的免疫力，從而發(fā)病，病死率高，是一種嚴(yán)重的傳染病。目前三十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)艾滋病是一種有明確病原體的可通過(guò)人之間一定傳播途徑傳播的慢性傳染病，屬于《傳染病防治法》中規(guī)定的乙類(lèi)傳染病目前三十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HIV病毒：多亞型和多變異HIV-1和HIV-2M組、O組和N組亞性型：A-KCRF：基因重組亞型，主要是HIV-1型毒株亞型監(jiān)測(cè)的意義不同亞型與不同傳播途徑的關(guān)系：B主要通過(guò)男性同性性行為和靜脈注射吸毒傳播，C主要異性性接觸傳播流行地理和傳播線路的分析：東南亞區(qū)域的C亞型和B亞型重組亞型傳播效力變化及對(duì)流行的影響：東歐的B/A重組流行、泰國(guó)的A/E重組目前三十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)艾滋病病毒在外界的抵抗力HIV病毒一旦離開(kāi)宿主細(xì)胞在外界環(huán)境中生存能力很快消失HIV對(duì)環(huán)境中的物理因素和化學(xué)因素抵抗力均較弱，比乙型肝炎病毒（HBV）的抵抗力低得多對(duì)HBV有效得消毒和滅活方法均適用于HIV目前三十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)

典型進(jìn)展者：8-10年潛伏期后成為艾滋病人，80%-90%快速進(jìn)展者：CD4細(xì)胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒載量一直維持較高水平，而且分離的HIV有均一性。長(zhǎng)期存活者（又稱(chēng)長(zhǎng)期不進(jìn)展者）：維持15年以上，而且CD4計(jì)數(shù)維持正常，在所有感染者中比例一般在8%-10%。HIV感染的三種結(jié)局目前三十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)艾滋病的診斷HIV感染者：確定HIV感染的個(gè)體抗體檢測(cè)：初篩和確認(rèn)輔助診斷艾滋病病人：臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《HIV/AIDS的診斷標(biāo)準(zhǔn)和防治原則》GB16000-1995目前三十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)熒光定量PCR的應(yīng)用為艾滋病的初篩和輔助檢查提供了有力的工具目前三十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)NGH淋球菌感染與致病1.人是淋球菌的惟一宿主。2.發(fā)病率最高，在所STD疾病中，高達(dá)60%左右。3.發(fā)病趨勢(shì)：a.男性多于女性。b.城市走向農(nóng)村，c.高收入階層向低收入階層擴(kuò)展4.人對(duì)淋球菌感染無(wú)天然抵抗力，免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。5.如母親為淋病患者，嬰兒出生時(shí)易患上淋球菌性結(jié)膜炎目前三十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)CT沙眼衣原體感染與致病1.嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生。2.不僅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要病原體。3.近年來(lái)在歐美等國(guó)，沙眼衣原體的感染率和危害性已超過(guò)淋球菌而居STD之首。4.在我國(guó)，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。5.泌尿生殖道感染，妨礙妊娠。6.盆腔感染，可致生殖能力損害。目前三十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)UU解脲脲原體感染與致病合成尿素酶，分解尿素2.在非淋球菌性尿道炎其感染率僅次于衣原體感染，居第二位。3.流產(chǎn)超過(guò)4次以上者，檢出率高達(dá)80%。4.有30-40%男性尿道炎是由感染UU所致。5.與男性不育相關(guān)。男性不育患者精液中，脲原體檢出率高達(dá)66.6％。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動(dòng)力下降而升高。目前三十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)1.非培養(yǎng)或形態(tài)學(xué)檢查的診斷技術(shù)，快速、特異、敏感。2.對(duì)無(wú)癥狀或癥狀輕者，可以早期確診。3.對(duì)NGH、CT、UU等混合感染者，診斷和鑒別診斷。4.指導(dǎo)用藥、考核療效。

熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義NGH/CT/UU目前四十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)NGH/CT/UU熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義5.不孕不育、優(yōu)生優(yōu)育。6.流行病學(xué)調(diào)查，為性傳播疾病的監(jiān)控提供依據(jù)。7.

CT、UU是FDA批準(zhǔn)的PCR檢測(cè)試劑盒，可作為首選方法，在臨床推廣應(yīng)用。目前四十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)人乳頭瘤病毒感染與致病1.HPV具有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細(xì)胞，人是HPV的惟一宿主。2.有100多個(gè)型。3.低危型：HPV6、11引起良性病變(尖銳濕疣、喉乳頭瘤等)HPV目前四十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)人乳頭瘤病毒感染與致病HPV4.高危型：HPV16、18引起惡性腫瘤(宮頸癌、肛門(mén)癌、口腔癌等)5.免疫原性低，易形成持續(xù)性感染。6.新生兒產(chǎn)道感染。目前四十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HPV目前四十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)1.對(duì)典型病例可以明確診斷。2.對(duì)臨床表現(xiàn)和組織病理改變都不典型的病例同樣可以做出診斷。3.對(duì)亞臨床和隱性HPV感染做出診斷。4.基因分型。5.考核療效與預(yù)后。6.病毒載量與患癌癥風(fēng)險(xiǎn)。HPV熒光定量PCR檢測(cè)HPV的意義目前四十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HPV目前四十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)手足口病（hand-foot-mouthdisease，HFMD）為全球性傳染病，世界大部分地區(qū)均有流行的報(bào)道。1957年在加拿大首次報(bào)告，新西蘭Seddon于1957年最早加以描述，1958年加拿大Robinson從患者糞便和咽拭中分離出CoxA16，同時(shí)患者血清抗體有四倍增長(zhǎng),初步查明CoxA16為本病病原；1959年提出HFMD命名，HFMD在全球廣泛流行，無(wú)明顯的地域分布。之后世界各地均經(jīng)常發(fā)生由各型柯薩奇、?？刹《竞虴V71引起的手足口病流行。發(fā)熱,不適,咽喉腫痛,口腔、手、腳側(cè)面及掌心、屁股出現(xiàn)小泡傳染性極高病程約1周目前四十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)HFMD的病原手足口病可由多種腸道病毒所引起，其中包括CoxA5,A10,A16,A19,EV71,以及部分埃可病毒和柯薩奇B組病毒,以CoxA16和EV71最為常見(jiàn)傳播途徑:糞-口途徑傳播:唾液與糞便;呼吸道傳播:空氣飛沫;接觸傳播

皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。HFMD為全球性傳染病，在全球廣泛分布，無(wú)明顯的地域分布,但近年EV71在東南亞一帶流行,引起較多的重癥和死亡病例。在80年代和90年代，中國(guó)手足口病的流行主要以CoxA16為主，2008年，CoxA16和EV71共循環(huán)引起手足口病爆發(fā),EV71在大部分省市為優(yōu)勢(shì)病毒。

目前四十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)人腸道病毒感染的一般致病機(jī)制進(jìn)入途徑口腔/呼吸道咽喉及下腸胃道傳播扁桃體、深層淋巴結(jié)、腸道淋巴結(jié)微病毒血癥先天性感染神經(jīng)系統(tǒng)心臟肝臟、胰臟、腎上腺呼吸系統(tǒng)皮膚及黏膜病毒血癥神經(jīng)系統(tǒng)抗體產(chǎn)生、病毒血癥消失，病毒感染癥狀改善飛沫、接觸、飲食肌肉目前四十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)致病特點(diǎn)

①隱性感染多見(jiàn)，很少引起腹瀉，嬰幼兒、免疫力低下的成人易感。

②病毒在機(jī)體腸道中增殖，很少引起腸道癥狀，是以消化道為原發(fā)灶的全身感染。③不同人腸道病毒可引起相同癥狀，同一種人腸道病毒可引起不同臨床表現(xiàn)。④感染過(guò)程中形成病毒血癥。目前五十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)中國(guó)HFMD的流行1981年，我國(guó)在上海首次報(bào)道了HFMD病例1987年在中國(guó)分離到CVA161995年以來(lái)，我國(guó)陸續(xù)在武漢、深圳、上海、重慶、山東和安徽等地的HFMD患者中分離到EV71病毒。2007年，山東發(fā)生了手足口病爆發(fā)流行，累計(jì)報(bào)告HFMD病例39，606例，其中14例病例死亡。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EV71是引起山東臨沂HFMD的主要病原，同時(shí)還檢測(cè)到Echo3和/或CVA16。2008年全國(guó)出現(xiàn)HFMD爆發(fā)流行,以HEV71為優(yōu)勢(shì),CVA16還有其它EV共循環(huán)引起目前五十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)加強(qiáng)HFMD病原檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的十分必要依據(jù)臺(tái)灣1998-2008和中國(guó)大陸2007-2008年的經(jīng)驗(yàn)

掌握手足口病病原譜，特別是EV71感染所占的比例，對(duì)析判斷HFMD疫情導(dǎo)致重癥和死亡的比例有重要的科學(xué)參考價(jià)值。目前五十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手足口病的診斷一般是通過(guò)采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行基因檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)抗體檢測(cè)、病毒分離和病毒鑒定，如果沒(méi)有采到合格的臨床標(biāo)本，或無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。很多血清型的腸道病毒能引起手足口病，不同細(xì)胞系對(duì)不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同時(shí)期腸道病毒的流行株也不同。通常用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為RD、HEp-2、Vero等，聯(lián)合使用上述的兩種或更多細(xì)胞有助于分離到更多的腸道病毒。目前五十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)類(lèi)型-病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測(cè)抗體/抗原檢測(cè)病毒檢測(cè)核酸ELISA/HI/PA蛋白印跡病毒分離ELISA電鏡中和試驗(yàn)RT-PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCR套式PCRLAMP免疫熒光基因芯片每種方法各有優(yōu)勢(shì),依據(jù)病毒來(lái)定檢測(cè)策略Newmoleculartoolsforepidemiologystudiesanddiagnosis目前五十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)三結(jié)核桿菌與呼吸道病原體檢測(cè)TB：TuberclebacilliCP：ChlamydiapneumoniaMP：MycoplasmalpneumoniaSARS：severeacuterespiratorysyndromeH1N1甲型流感呼吸道合胞病毒目前五十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)結(jié)核桿菌流行現(xiàn)狀（1）羅伯特·科赫（１８４３——１９１０），德國(guó)細(xì)菌學(xué)家，結(jié)核桿菌發(fā)現(xiàn)者結(jié)核病是一個(gè)全球性的問(wèn)題，近年來(lái)在世界范圍內(nèi)出現(xiàn)流行，且呈增長(zhǎng)的趨勢(shì)TB目前五十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)結(jié)核桿菌流行現(xiàn)狀（2）我國(guó)結(jié)核病的疫情僅次于印度而居世界第二位2000年，全國(guó)人口結(jié)核感染率為44.5%，其中15～44歲人群占了53％，每年約有25萬(wàn)人死于結(jié)核病目前五十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)結(jié)核桿菌引起的感染肺部感染：原發(fā)性肺結(jié)核，開(kāi)放性肺結(jié)核。肺外感染：腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖結(jié)核、腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎、全身性結(jié)核。目前五十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)常規(guī)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法及不足1.痰涂片作抗酸染色：陽(yáng)性率低、費(fèi)時(shí)2.細(xì)胞培養(yǎng)“金標(biāo)準(zhǔn)”：周期太長(zhǎng)(3-4W)3.血清學(xué)診斷：

a.接種BCG可出現(xiàn)陽(yáng)性b.不能區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病和治愈后留下?lián)p傷灶的病人c.交叉反應(yīng)，假陽(yáng)性不能早期診斷！容易漏診、誤診！TB目前五十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA的意義1.能穩(wěn)定檢測(cè)10copy的TB-DNA，靈敏度高，特異性強(qiáng)2.早期、快速、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核病。痰液、肺及支氣管灌洗液——肺結(jié)核血液——播散性結(jié)核和各臟器的結(jié)核病腦脊液——中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病宮頸拭子、尿道拭子——泌尿生殖道結(jié)核病TB目前六十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)3.熒光定量PCR檢出結(jié)核桿菌陽(yáng)性率顯著高于痰涂片抗酸染色和改良羅氏培養(yǎng)法。

4.TB-DNA濃度可用于判斷療效：痰標(biāo)本中結(jié)核桿菌的數(shù)量呈逐漸下降趨勢(shì)，TB-DNA拷貝數(shù)下降。根據(jù)病原體DNA濃度，對(duì)藥物治療及療效觀察提供參考依據(jù)TB熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA的意義目前六十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)CP、MP感染可致咽炎、支氣管炎和肺炎，潛伏期約2-3周，通常起病較緩慢。持續(xù)性咳嗽。

肺炎衣原體(CP)、肺炎支原體(MP)感染與致病CP/MPMP肺炎約占非細(xì)菌性肺炎的1/3以上，或各種原因引起的肺炎的l0％。

MP感染與小兒支氣管哮喘密切相關(guān)。CP感染與冠心病存在密切的關(guān)系肺癌、支氣管擴(kuò)張患者中CP感染率相對(duì)較高目前六十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)熒光定量PCR用于非典型性肺炎的診斷意義：1.直接檢測(cè)病原體，早期、快速、特異診斷非典型性肺炎。2.治療方案與細(xì)菌、病毒感染的治療方案不同3.流行病學(xué)調(diào)查。

TB、MP、CP已被許多醫(yī)院尤其是婦幼保健醫(yī)院和兒童醫(yī)院納為肺部感染的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目

MP/CP/SARS目前六十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)甲型H1N1流感流行性感冒簡(jiǎn)稱(chēng)流感，是由甲、乙、丙三種流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。甲型流感病毒根據(jù)其表面(H和N)結(jié)構(gòu)及其基因特性的不同又可分成許多亞型，至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有16個(gè)亞型(H1-H16)，神經(jīng)氨酸酶9個(gè)亞型(N1-N9)。

目前六十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)“豬流感”更名為“甲型H1N1流感”世界衛(wèi)生組織4月30日宣布，從當(dāng)日起，該組織不再使用“豬流感”一詞指代當(dāng)前疫情，而開(kāi)始使用“A（H1N1）型流感”一詞。與之相對(duì)應(yīng)，我國(guó)的官方文件從5月1日起相繼用“甲型H1N1流感”代替原來(lái)的“人感染豬流感”。世界衛(wèi)生組織發(fā)言人說(shuō)，之所以更改叫法，是因?yàn)椤柏i流感”一詞容易誤導(dǎo)消費(fèi)者，美國(guó)和墨西哥等國(guó)的豬肉及豬肉制品已明顯受到其他國(guó)家進(jìn)口禁令影響。世界衛(wèi)生組織的聲明說(shuō)，根據(jù)目前掌握的科學(xué)依據(jù)，此次流行的病毒僅在人際間傳播，尚無(wú)證據(jù)表明它在豬群內(nèi)傳播，或由豬向人傳播，也無(wú)證據(jù)表明人因食用豬肉或相關(guān)產(chǎn)品染病。目前六十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)病原學(xué)甲型H1N1流感病毒屬于正粘病毒科，典型病毒顆粒呈球狀，直徑為80nm~120nm，有囊膜。囊膜上有許多放射狀排列的突起糖蛋白，分別是血凝素HA、神經(jīng)氨酸酶NA和M2蛋白。病毒顆粒內(nèi)為核衣殼,呈螺旋狀對(duì)稱(chēng),直徑為10nm。甲型H1N1流感病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒，基因組約為13.6kb，由大小不等的8個(gè)獨(dú)立片段組成。

目前六十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)目前六十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)流行病學(xué)特點(diǎn)傳染源主要為病豬和攜帶病毒的豬，感染豬流感病毒的人也被證實(shí)可以傳播病毒。感染這種病毒的動(dòng)物均可傳播。傳播途徑主要為呼吸道傳播，也可通過(guò)接觸感染的豬或其糞便、周?chē)廴镜沫h(huán)境或氣溶膠等途徑傳播。某些毒株如H1N1可在人與人之間傳播，其傳染途徑與流感類(lèi)似，通常是通過(guò)感染者咳嗽或打噴嚏等。目前六十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)易感人群普遍易感?；颊叨鄶?shù)年齡在25歲至45歲之間，目前報(bào)道以青壯年為主，應(yīng)注意老人和兒童。目前六十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)臨床表現(xiàn)潛伏期一般1至7天左右，較流感、禽流感潛伏期長(zhǎng)。

人感染甲型H1N1流感后的早期癥狀與普通人流感相似，包括發(fā)熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還會(huì)出現(xiàn)腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發(fā)紅等。目前七十頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)

部分患者病情可迅速進(jìn)展，來(lái)勢(shì)兇猛、突然高熱、體溫超過(guò)39℃，甚至繼發(fā)嚴(yán)重肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細(xì)胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征、呼吸衰竭及多器官損傷，導(dǎo)致死亡。

目前七十一頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢查外周血象：白細(xì)胞總數(shù)一般不高或降低。重癥患者多有白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞減少，并有血小板降低；血清學(xué)診斷：可使用間接ELISA、抗原捕捉ELISA、熒光免疫法等；反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）：由于PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已用于豬流感病毒基因的檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查等；目前七十二頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)4

病毒分離：從患者呼吸道標(biāo)本中（咽拭子、口腔含漱液、鼻咽或氣管吸出物、痰或肺組織）分離甲型H1N1流感病毒。常用的方法有雞胚接種法和細(xì)胞培養(yǎng)法?，F(xiàn)有的診斷方法中，病毒分離法是較敏感的，但需要2-3周時(shí)間。目前七十三頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)人感染豬流感的診斷標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)觀察病例：曾到過(guò)甲型H1N1流感疫區(qū)，或與病豬及甲型H1N1流感患者有密切接觸史，1周內(nèi)出現(xiàn)流感臨床表現(xiàn)者。列為醫(yī)學(xué)觀察病例者，對(duì)其進(jìn)行7天醫(yī)學(xué)觀察（根據(jù)病情可以居家或醫(yī)院隔離）。目前七十四頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)2疑似病例：曾到過(guò)疫區(qū)，或與病豬及甲型H1N1流感患者有密切接觸史（也可流行病學(xué)史不詳），1周內(nèi)出現(xiàn)流感臨床表現(xiàn)，呼吸道分泌物、咽試子、痰液、血清H亞型病毒抗體陽(yáng)性或核酸檢測(cè)陽(yáng)性。目前七十五頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)臨床診斷病例：被診斷為疑似病例，且與其有共同暴露史的人被診斷為確診病例者。確診病例：從呼吸道標(biāo)本或血清中分離到特定病毒；RT-PCR對(duì)上述標(biāo)本檢測(cè)，有甲型H1N1病毒RNA存在，經(jīng)過(guò)測(cè)序證實(shí)，或兩次血清抗體滴度4倍升高，可確診為人感染甲型H1N1流感。目前七十六頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)四TORCH感染特點(diǎn)與檢測(cè)TOX:Toxoplasma

gondiiRV:Rubellavirus

CMV:HumancytomegalovirusHSV:HerpessimplexvirusTORCH目前七十七頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)TORCH感染特點(diǎn)

1.母-胎傳播的主要病原體2.引起胎兒畸形新生兒缺陷的重要原因3.自然狀態(tài)下呈隱性感染4.懷孕、多次輸血、AIDS等易發(fā)生顯性感染5.可致多發(fā)性、全身性感染6.只有風(fēng)疹可獲得長(zhǎng)久的免疫力，可用疫苗預(yù)防

TORCH目前七十八頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)(一)弓形蟲(chóng)感染與致病滋養(yǎng)體如弓形，廣泛分布，人獸共患。寄生在有核細(xì)胞中，貓和貓科動(dòng)物是終宿主易感者多，免疫者少我國(guó)智力低下兒的弓形蟲(chóng)感染率28％畸形兒的弓形蟲(chóng)抗體IgM陽(yáng)性率12.25％艾滋病患者約有20％～80％合并弓形蟲(chóng)感染，造成艾滋病死亡的一個(gè)重要并發(fā)病TORCH–TOX目前七十九頁(yè)\總數(shù)八十七頁(yè)\編于十九點(diǎn)人群自然感染率達(dá)到60-90%，多為隱性感染免疫功能低下(懷孕、多次輸血、器官移植、AIDS)發(fā)生顯性感染可發(fā)生垂直傳播，是宮