實訓(xùn)十四HPLC法測定食醋中苯甲酸鈉含量

無機與分析技術(shù)

HPLC法測定食醋中苯甲酸鈉含量薛俊娟

食醋中苯甲酸鈉含量測定

【實訓(xùn)目的】1、

掌握島津LC-20AT液相色譜儀測定食醋中苯甲酸鈉的實驗原理2、

初步掌握HPLC操作技能3、

學(xué)習(xí)高效液相色譜保留值定性方法和外標(biāo)法的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量方法，并能對實驗結(jié)果進行分析。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

【實訓(xùn)原理】液相色譜法是進入色譜柱中的各組分，由于在流動相和固定相之間溶解、吸附，滲透或離子交換等作用的不同，在兩相間進行反復(fù)多次地分配，經(jīng)過一定長度的色譜柱后，彼此分離，記錄儀上顯示出各組分的色譜峰。本實驗采用工作曲線法（即外標(biāo)法）測定苯甲酸鈉組分的含量，根據(jù)保留時間和峰面積進行定性定量分析。該法用待測物的純品作為對照品，精密稱（量）取對

食醋中苯甲酸鈉含量測定

照品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，等體積準(zhǔn)確進樣，測量各峰的峰面積，繪制峰面積對濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；在相同的色譜操作條件下將試樣等體積進樣分析，測量色譜峰峰面積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上在查出樣品中該組分的濃度。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

【實訓(xùn)用品】1、儀器:島津LC-2DAT高效液相色譜儀、DGu-20A5R在線脫氣機、微量進樣器或SIL-20A自動進樣器、SPD-20A紫外檢測器、CTO-20A柱溫箱、LabSolution色譜工作站、電子天平（萬分之一）容量瓶（500mL;50ml;I0ml6個）、膠頭滴管、燒杯（50ml）、吸量管(I0ml)、超聲波清洗機

食醋中苯甲酸鈉含量測定

2、試劑：色譜乙腈(經(jīng)濾膜0.45μm過濾)；0.04mol/L乙酸銨溶液：稱取3.08g乙酸銨，加水溶解并定容至1000ml，經(jīng)過（0.45μm）過濾；

食醋中苯甲酸鈉含量測定

【實訓(xùn)步驟】1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用萬分之一天平精密稱取0.05g苯甲酸鈉，記錄準(zhǔn)確數(shù)值，溶解定容至500ml容量瓶（含最高為100μg/ml儲備溶液），分別移取儲備溶液0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml稀釋定容至10ml容量瓶，配制成含量為0ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、60ml、80ug/ml、100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

2、

供試品溶液的配制將市售普通陳醋準(zhǔn)確移取2ml至50ml容量瓶，稀釋定容為25倍的稀溶液作為供試品，平行配制2份。3、色譜條件色譜柱:ODS-C18柱（InertsilRODS-SP5μm，4.6250mm）；流動相：5%乙腈+95%乙酸銨；四元泵模式：低壓梯度（總流速1.0ml/分鐘，乙酸銨流量通道設(shè)為95%來實現(xiàn)流動相比例）；泵壓力限制（Pmax20.0MPa，pmin0.5MPa）

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進樣量：50μl（定量環(huán)規(guī)格:20μl）；檢測波長：230nm（選擇D2燈）；檢測器池溫40℃。4、含量測定分別準(zhǔn)確吸取0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液50μl進樣，記錄各標(biāo)樣的保留時間及色譜峰面積。然后量取50μl供試品進樣，記錄色譜圖。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

【實訓(xùn)注意】1、以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，做線性回歸方程。2、含量計算通過測量出食酷中苯甲酸鈉的色譜峰峰面積，帶入線性回歸方程，求得樣品中該組分的濃度，再乘以25倍的稀釋倍數(shù)即為食醋中苯甲酸鈉的含量。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

3、判斷依據(jù)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB2760--2011規(guī)定苯甲酸鈉在醬油、醋中最大使用量為1.00g/kg（以苯甲酸計）。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

2、配制的樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液用0.45μm針孔式濾膜過濾后進入1.5ml樣品瓶中，進樣前要用擦鏡紙輕輕擦凈進樣器表面，以免污染儀器?！静僮饕c】1、制備所需的流動相，有機溶劑用0.45μm的有機濾膜過濾，水溶液用0.45μm的水系濾膜過濾，超聲脫氣20分鐘。

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3、檢測完畢，用甲醇或乙腈沖洗管道30分鐘（具體來說沖洗柱子流動相的量應(yīng)該是色住體積量的10倍，可以根據(jù)流量就柱體積計算沖洗時間），以免有樣品在管路和柱子殘留，如果更換沖洗流動相貯液瓶后，仍然要進行排氣操作。

食醋中苯甲酸鈉含量測定

3、檢測完畢，用甲醇或乙腈沖洗管道30分鐘（具體來說沖洗柱子流動相的量應(yīng)該是色住體積量的10倍，可以根據(jù)流量就柱體積計算沖洗時間），以免有樣品在管