高效液相色譜法定量分析方法外標(biāo)法

高效液相色譜定量分析方法——外標(biāo)法永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院李玉婷目錄01面積歸一化法02外標(biāo)法03內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法工作曲線法外標(biāo)法外標(biāo)一點法樣品的量與其峰面積A成正比工作原理外標(biāo)法—工作曲線法配制標(biāo)準溶液C1~C5Step11.取被測組分的純物質(zhì)，配制成一系列不同濃度的標(biāo)準溶液。測得峰面積A1~A52.分別取一定體積上述溶液注入色譜儀。3.采集不同濃度標(biāo)準溶液的色譜圖，獲得峰面積或峰高。外標(biāo)法—工作曲線法測得峰面積Ax配制標(biāo)準溶液CxStep24.積分,按外標(biāo)法定量計算,繪出峰面積（或峰高）對濃度的關(guān)系曲線——標(biāo)準曲線。A=aC+b（r>0.999）AxCx濃度C(C1,A1)(C2,A2)(C3,A3)

(C4,A4)

(C5,A5)峰面積A等體積進樣外標(biāo)法—外標(biāo)一點法前提：過坐標(biāo)原點，即截距b為0，也就是說A=aC+b的公式，簡化成A=aC測得A對照配制標(biāo)準溶液C對照測得（Ax）配制未知濃度溶液CxAxCx濃度C

(C對照,A對照)峰面積A等體積進樣外標(biāo)法—外標(biāo)一點法優(yōu)點缺點不需要校正因子f。優(yōu)點不需要所有組分出峰，待測組分出峰即可。需要待測組分純品為對照物。缺點結(jié)果受進樣量，進樣重復(fù)性和操作條件影響大。用HPLC外標(biāo)法測定黃芩藥材中有效成分黃芩苷的質(zhì)量分數(shù)外標(biāo)法—實例黃芩藥材經(jīng)干燥，粉碎，過篩。取黃芩粉末適量，精密稱量為25.6mg，置于碘瓶中，精密加入100.0mL50%乙醇溶液，密塞，超聲振蕩30min提取，過濾，續(xù)濾液為供試品溶液。供試品溶液的制備測定法對照品溶液制備精密稱取黃芩苷對照品25.0mg于100mL容量瓶，以50%乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液2.00、4.00、6.00、8.00和10.00mL，分別置于100mL容量瓶，稀釋至刻度，制成系列濃度的對照品溶液。各溶液用定量環(huán)進樣20μL，三次進樣的測定結(jié)果取均值。不同濃度的對照品溶液的峰面積分別為31582、69355、106311、142196和177714面積單位。供試品溶液中黃芩苷的峰面積為70214面積單位。由外標(biāo)回歸方程計算黃芩藥材中黃芩苷的質(zhì)量分數(shù)。外標(biāo)法—實例1.根據(jù)

x2.00，4.00，6.00，8.00，10.00得2.對照品濃度:C(mg/100mL)0.50，1.00，1.50，2.00，2.504.將5組數(shù)據(jù)輸入Excel軟件，作散點圖，添加趨勢線后5.顯示回歸方程為A=73021C-4099.96.線性相關(guān)系數(shù)為r=0.99997.供試品峰面積70214，代入回歸方程得含量:1.02mg/100mL3.對應(yīng)峰面積:A/(Uv.s)31582,69355，