馬鈴薯脫毒與快繁脫毒苗培育

園藝技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫模塊五植物脫毒與組培快繁技術(shù)項目四馬鈴薯脫毒與快繁園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育項目四

馬鈴薯脫毒與快繁123CONTENTS脫毒苗培育馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒馬鈴薯無病毒苗的鑒定項目四馬鈴薯脫毒與快繁4馬鈴薯無病毒株的繁殖和保存5微型薯生產(chǎn)6原種種薯生產(chǎn)一、脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)（一）基本知識1.脫毒苗（無病毒苗）：是指不含有該種植物的主要危害病毒，經(jīng)過檢測主要病毒在植物體內(nèi)表現(xiàn)為陰性反應(yīng)的苗木。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)（一）基本知識病毒病的危害苗期分株數(shù)量減少

萌芽率降低，生長量減少嫁接不親和種子發(fā)芽率降低產(chǎn)量降低果實品質(zhì)下降

樹勢衰退，直至死亡脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育葡萄病毒園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育棗瘋病園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育蘋果莖溝病毒蘋果莖痘病毒園藝植物組織培養(yǎng)3.病毒抑制劑的局限性（1）對病毒只起到抑制作用（2）不能治愈全株（3）對植株有毒害作用（4）當(dāng)藥效消失時，病毒又恢復(fù)4.脫毒苗的優(yōu)點（1）產(chǎn)量提高（2）品質(zhì)提高（3）抗病性提高脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)5.病毒病的傳播途徑（1）介體傳播（2）機械傳播（3）無性繁殖材料和嫁接傳播6.受病毒侵染植株外部癥狀

局部或系統(tǒng)花葉，皺縮，卷葉，黃化，老葉上出現(xiàn)紫色邊緣的褪綠斑，一般春秋季明顯。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)7.病毒特性及其侵染規(guī)律（1）全身侵染，終生帶毒，持久危害,一般通過嫁接傳染，多數(shù)不經(jīng)過種子傳播。（2）病毒在植物體內(nèi)分布不均一，越接近生長點，病毒濃度越稀。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)（二）脫毒技術(shù)熱處理脫毒化學(xué)治療脫毒花藥培養(yǎng)脫毒莖尖培養(yǎng)脫毒微體嫁接脫毒脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育熱處理脫毒園藝植物組織培養(yǎng)原理植物處于高溫環(huán)境中，體內(nèi)病毒全部或部分鈍化，不能生成或生成病毒很少，病毒含量不斷降低，從而達到脫毒目的。方法

溫湯浸漬高溫空氣處理脫毒苗培育溫湯浸漬園藝植物組織培養(yǎng)適用材料：休眠期器官方法：將植物材料浸漬在50－55℃溫水中，10min至數(shù)小時。特點：簡單易行，易使植物材料受傷。脫毒苗培育熱空氣處理園藝植物組織培養(yǎng)適用材料：活躍生長的莖尖方法：將生長的帶毒盆栽植物移入溫?zé)嶂委熓覂?nèi)，35－40℃熱氣處理幾十分鐘至數(shù)月。缺點：不能脫除所有病毒。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育莖尖培養(yǎng)脫毒園藝植物組織培養(yǎng)原理：莖尖或根尖分生組織（0.1－0.5mm）大多不含病毒。取材：

取新梢頂端3－5cm。消毒

接種：切取0.2－0.5mm的莖尖組織接種于培養(yǎng)基上。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)脫毒苗培育莖尖培養(yǎng)脫毒園藝植物組織培養(yǎng)影響莖尖培養(yǎng)成活的因素1.外植體的大小2.培養(yǎng)條件較高的溫度、充足光照利于莖尖培養(yǎng)3.外植體的生理狀態(tài)選萌動期的芽生長旺盛枝條的頂芽比側(cè)芽培養(yǎng)效果好脫毒苗培育花藥培養(yǎng)脫毒園藝植物組織培養(yǎng)消毒與接種采花蕾70%的酒精浸漬數(shù)秒剖開花蕾取花藥接種在誘愈培養(yǎng)基上（每瓶30－50個花藥）脫毒苗培育花藥培養(yǎng)脫毒園藝植物組織培養(yǎng)接種后形成愈傷組織分化培養(yǎng)基10－30天分化出再生植株20－30天脫毒苗培育花藥培養(yǎng)脫毒園藝植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)條件溫度：23－28℃光強：2000－4000lx光照時間：每天16h脫毒苗培育微體嫁接脫毒園藝植物組織培養(yǎng)適用植物莖尖培養(yǎng)脫毒生根困難，不能獲得完整植株的植物。方法培養(yǎng)砧木：種子去皮后接在MS培養(yǎng)基上，25℃環(huán)境下暗箱培養(yǎng)2周，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)。準備微莖尖：從供體上采集莖尖。脫毒苗培育微體嫁接脫毒園藝植物組織培養(yǎng)嫁接：從試管中取出砧木，切去子葉，留1－2cm長的上胚軸，切去過長的根系，保留4－6cm。莖頂部一側(cè)切U切口，莖尖置于切口上。嫁接苗培養(yǎng)：送入MS液體培養(yǎng)基中，由濾紙橋支撐進行培養(yǎng)。移裁：培養(yǎng)1個月左右，具2－3片葉時移入基質(zhì)中，套袋、保溫，保濕，20天后成活。脫毒苗培育園藝植物組織培養(yǎng)（三）脫毒苗的鑒定指示植物檢測血清學(xué)鑒定電子顯微鏡檢測分子生物學(xué)檢測脫毒苗培育指示植物檢測園藝植物組織培養(yǎng)優(yōu)點靈敏、準確、可靠、操作簡便。對指示植物的要求根據(jù)不同病毒，選擇合適的指示植物容易栽培對要鑒別的病毒敏感，易接種，易感染，癥狀顯著。利用病毒在其他植物上產(chǎn)生特定癥狀作為鑒別病毒存在與否及種類的方法稱指示植物法。脫毒苗培育指示植物檢測園藝植物組織培養(yǎng)鑒定方法汁液涂抹法嫁接接種法取被鑒定植物幼葉1－3g研缽中研磨，過濾濾液中加少量500－600目金剛砂棉花球醮汁液涂抹葉面2－3次指示植物15－25℃培養(yǎng)脫毒苗培育血清學(xué)鑒定園藝植物組織培養(yǎng)含義抗原與抗體發(fā)生特異性反應(yīng)（血清學(xué)反應(yīng)），根據(jù)反應(yīng)的癥狀可鑒別病毒存在與否和種類，這種方法稱為血清學(xué)鑒定。原理病毒侵入動物體后，動物血清中會產(chǎn)生抗體，含抗體的血清稱為抗血清，病毒即為抗原。脫毒苗培育血清學(xué)鑒定園藝植物組織培養(yǎng)優(yōu)點專一性高，結(jié)果準確，快速簡便，一般幾小時甚至幾分鐘就可完成。方法病毒的分離、純化、制備抗血清、測定脫毒苗培育電子顯微鏡檢測園藝植物組織培養(yǎng)用電子顯微鏡直接觀察被鑒定植物組織的提取液有無病毒，并進一步鑒定病毒顆粒大小、形狀和結(jié)構(gòu)甚至種類。特點

靈敏度高，并能定量測定病毒，準確率高。但設(shè)備昂貴。目前已發(fā)展出免疫電鏡技術(shù)。脫毒苗培育分子生物學(xué)鑒定園藝植物組織培養(yǎng)也稱酶聯(lián)免疫吸附測定法，是將酶