醬油中乙酰丙酸的測定

生物技術(shù)及應(yīng)用專業(yè)教學(xué)資源庫《生物產(chǎn)品的分析與檢驗》醬油的分析與檢驗

-----醬油中乙酰丙酸的測定主講教師：畢靜瑩目錄1.簡介2.醬油中乙酰丙酸的測定

檢測原理試劑和材料儀器和設(shè)備分析步驟▲乙酰丙酸亦稱戊隔酮酸、左旋糖酸、果糖酸，是水解生產(chǎn)的。本品主要作為制造樹脂、醫(yī)藥、香料和涂料的原料。簡介乙酰丙酸分子結(jié)構(gòu)02醬油中乙酰丙酸的測定（內(nèi)標(biāo)法檢測）★按照GB5009.252—2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中乙酰丙酸的測定進行。內(nèi)標(biāo)法檢測原理▲樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，以正庚酸作內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，用具有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內(nèi)標(biāo)法進行定量?！鴼庀嗌V法測定醬油中乙酰丙酸的方法有內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法兩種。本節(jié)就內(nèi)標(biāo)法進行詳細講解?！橇碛姓f明，本方法所用試劑均為分析純，所用水為GB/T6682規(guī)定的二級水。試劑▲無水硫酸鈉(Na2SO4)：650℃下灼燒4h，貯于干燥器中備用；▲無水乙醚(C4H10O)；▲鹽酸(HCl)；▲氯化鈉(NaCl)；▲乙酸乙酯(C4H8O2)：色譜純。試劑和材料▲飽和氯化鈉溶液：稱取370g氯化鈉于燒杯中，加入1000mL水，攪拌使其溶解、混勻，靜置備用。試劑配制▲正庚酸(C7H14O2)：純度≥99.5%▲乙酰丙酸(C5H8O3)：純度≥99.5%標(biāo)準(zhǔn)品▲正庚酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(5.00mg/mL)：稱取0.5g正庚酸(精確至0.0001g)，用乙酸乙酯溶解并定容于100mL容量瓶中，混勻。▲乙酰丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(5.00mg/mL)：稱取0.5g乙酰丙酸(精確至0.0001g)，用乙酸乙酯溶解并定容于100mL容量瓶中,混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制▲乙酰丙酸標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取乙酰丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL于6個10mL容量瓶中，各加入1.0mL正庚酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙酸乙酯定容，即得標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，相當(dāng)于每毫升含12.5μg、25.0μg、50.0μg、250.0μg、500.0μg、750.0μg的乙酰丙酸?！鴼庀嗌V儀：配有氫火焰離子化檢測器(FID)；▲分析天平：感量為0.1mg和1mg；▲旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。儀器和設(shè)備▲準(zhǔn)確稱取5g(精確至0.001g)試樣于100mL具塞試管中，加入10mL飽和氯化鈉溶液、1.0mL正庚酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液、3.0mL鹽酸，充分振搖1min。分析步驟試樣制備▲加入50mL乙醚，振搖萃取3~5min，靜置約10~15min。待分層后，吸取上層乙醚萃取液于250mL分液漏斗中，再重復(fù)萃取兩次，每次用乙醚50mL，合并乙醚萃取液；▲用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，棄去下層。乙醚層用30g無水硫酸鈉脫水，在45℃左右濃縮至近干，用乙酸乙酯定容至10mL，充分搖勻，待氣相色譜進樣檢測。氣相色譜參考條件

▲色譜柱：DB-WAX石英毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)或相當(dāng)型號色譜柱?！V柱溫度：120℃，1min230℃，4min；▲進樣口溫度：270℃；▲檢測器溫度：270℃；測定▲進樣方式：分流進樣，分流比25:1；▲進樣體積：1μL；▲氫氣流速：30mL/min；▲空氣流速：300mL/min；▲尾吹氣：30mL/min；▲載氣：高純氮，純度大于99.999%，流速：1.0mL/min?！鴮?biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入氣相色譜儀中，測定乙酰丙酸與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的相應(yīng)峰面積。以乙酰丙酸峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積為縱坐標(biāo)，以乙酰丙酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作內(nèi)標(biāo)法乙酰丙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖乙酰丙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的氣相色譜圖▲將試樣溶液注入氣相色譜儀中，得到乙酰丙酸和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的相應(yīng)峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中乙酰丙酸的質(zhì)量濃度。試樣溶液的測定

▲用5.0mL水代替試樣，做空白試驗?？瞻自囼炓阴１岬暮堪词?1)計算:分析結(jié)果的表述式中:X——樣品中乙酰丙酸含量，單位為毫克每千克(mg/kg);ρ——測定用樣品中乙酰丙酸質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——樣品的定容體積，單位為毫升(mL);1000——換算系數(shù);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次